大肠埃希氏菌O157:H7的HDA检测方法的建立

采用自行建立和优化的依赖解旋酶DNA恒温扩增(HDA)检测体系,建立HDA检测方法对大肠埃希氏菌O157:H7进行检测。采用大肠埃希氏菌O157:H7的rfbE基因为目的片段设计特异性引物,建成可快速检测大肠埃希氏菌O157:H7的HDA检测法,进行了特异性和灵敏度试验,并与普通PCR方法进行了比较。结果表明:所建立起的检测法,灵敏度为4.3×103 cfu·mL-1,灵敏度与普通PCR方法相当。大肠埃希氏菌O157:H7的依赖解旋酶DNA恒温扩增检测方法具有普通PCR的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求更低,用普通水浴槽即可进行反应。具有广阔的推广前景。     

出血性大肠埃希菌O157∶H7广东分离株对小鼠致病性的研究

探索肠出血性大肠埃希菌Escherichia coli O157∶H7广东分离株021210(NalR)[以下简称O157∶H7 021210(NalR)]对小鼠的半数致死量(LD50),揭示其在小鼠体内产生的病理变化.将20日龄的昆明鼠随机分组,饮水中加入萘啶酮酸预处理,消除肠道杂菌,再分别以不同剂量腹腔注射O157∶H7 021210(NalR),进行临床观察和病理学检查.测定出LD50,试验结果表明一定剂量的O157∶H7 021210(NalR)可引起小鼠主要脏器及肠道发生病变.     

动物源大肠埃希菌O157∶H7多重PCR检测方法的初步研究

[目的]建立一种快速检测动物源大肠埃希菌O157∶H7及其毒力基因的多重PCR方法.[方法]以编码大肠埃希菌O157抗原的rfbE基因、编码H7抗原的fliC基因以及编码细胞溶血素A的hylA基因为靶基因,设计3对特异性引物,优化并建立检测大肠埃希菌O157∶H7的多重PCR方法,对其特异性和敏感性进行检测,最后对其临...     

贵州羔羊致病性大肠埃希氏菌血清型和致病因子的研究--大肠埃希氏菌的分离、血清型、致病因子和致病性试验

１９９７￣１９９９年,对贵州册亨,水城,龙里,关岭４个县的３３００头份羔羊进行调查,收集羔羊腹泻病例１１５例,初分离出肠杆菌８０株,经生化试验和致病试验初步鉴定出大肠杆菌５５株菌株,分离率为４８％。经小白鼠致病性试验,５５株菌株都能引起发病死亡;并用其中的ＣＨ９８１２、ＣＨ９８１７、ＬＬ９９３４、ＧＬ９８６ ６株菌株做家兔致病性试验,结果,６株菌株都能使羔羊、家兔发病死亡。对初分离５５株菌株做知清     

164株大肠埃希菌耐药性分析

目的分析临床分离的大肠埃希菌株耐药性,为合理选用抗生素提供依据.方法根据NCCLS推荐使用的常用抗生素,采用Kirby-Bauer法检测164株大肠埃希菌对8种抗生素耐药性.结果164株大肠埃希菌耐2～4种抗生素居多,少数菌株可耐5～8种抗生素;对氧哌嗪青霉素、氨苄青霉素、复方磺胺、四环素、诺氟沙星的耐药率分别为45%、39%、32%、30%和24%.讨论大肠埃希菌耐药严重,多重耐药现象普遍,应引起临床高度重视.     

大肠埃希氏菌耐药性水平传递研究

以实验室分离大肠埃希氏菌菌株E11-83(耐链霉素)和E6-203(耐萘啶酮酸)为供体及受体菌,研究供体及受体菌的含量比、接合培养介质、氧气量、抗生素诱导、接合时间、温度等因素对接合率的影响。结果发现,供体与受体菌比例为1∶8时,接合率最高,为2.4×10-4;有氧条件下膜接合率最高,为2.5×10-4;添加低质量浓度阿莫西林对于大肠埃希氏菌的接合率影响较小;培养16 h接合率达到最高,为3.5×10-4;接合温度27℃时接合率最高,为3.1×10-4。     

两株大肠埃希菌生物膜形成及影响因素

为分析不同离子质量浓度变化对大肠杆菌生物膜形成的影响,以分离自犊牛腹泻病中的两株大肠埃希菌为材料,采用试管法和96孔微量板法,在体外进行大肠杆菌生物膜形成及影响因素的研究。结果显示,试验菌(7号,13-2号)均能在试管和96孔板上形成生物膜。同时,根据试验结果绘制出这两株菌在48h、37℃下于M9培养基和进口96孔板的生物膜生长曲线。     

一株中美貘源大肠埃希菌O157分离鉴定及致病性研究

2018年3月,某动物园1只中美貘突然精神沉郁,卧地不起,高热,呕吐,食欲废绝,第2天出现神经症状,死亡。剖检可见肺苍白,边缘有散在的出血点;气管有大量白色泡沫,轻度气肿;心肌和心耳有大面积出血;胃肠黏膜出血、坏死。无菌采集肝脏和脾脏,使用麦康凯和LB琼脂平板进行细菌培养、分离,麦康凯琼脂平板上可见粉红色光滑菌落,疑似大肠埃希菌。纯化细菌,经PCR鉴定为O157型大肠埃希菌,推断中美貘可能因O157型大肠埃希菌感染致死,进一步药敏试验表明,该菌仅对阿米卡星、氨苄西林和复方新诺明敏感,多重耐药率达87.5%。PCR方法检测了8种主要的毒力基因,结果表明该菌株携带ompA和fimC 2种毒力基因。小鼠致病性试验结果显示,该菌株的半数致死量(LD_(50))为1.0×10~(8.5) cfu。     

蓝狐脑型大肠埃希氏菌的分离鉴定

从有神经症状的病死蓝狐脑组织中分离出两株大肠埃希氏菌，两株菌对小白鼠致病性强，对痢特灵、氨苄青霉素等敏感。     

鸡源致病性大肠埃希氏菌的耐药性

研究了分离江苏地区若干鸡场的２９株鸡源致病性大肠埃希氏菌的耐药性,结果表明,所有菌株对ＣＦＺ,ＴＯＢ敏感,耐药率为０,对ＮＥＯ,ＫＡＮ,ＧＥＮ,ＰＩＰ耐药率约为６．９％,ＣＴＮ,１３．７９％;ＣＭＰ,３４．４８％,对ＳＴＲ,ＣＯＳ,ＶＡＮ,ＥＲＹ耐药率较高,分别为６５．５２％,７２．４２％,８２．７６％,９３．１０％,待检菌株多药耐药现象严重,有２７株（９３．１０％）有２种或２种以上药物耐药,多药     

In Vitro Assessment of Probiotic Potential of Lactobacillus acidophilus and Antagonistic Activity Against Escherichia coli O157:H7

The antagonistic activity of Lactobacillus acidophilus KLDS1.0901, KLDS1.0902, KLDS1.1003 and NCFM against Escherichia coli O157: H7 were investigated in this study. The culture supernatants of all the L. acidophilus stains showed high bacteriostatic activities against E. coli O157: H7 and the bacteriostatic substances of their Cell-Free Supernatants (CFS) were preliminarily determined from organic acids. The bacteriostatic activity from CFS or viable L. acidophilus against E. coli O157: H7 was also assessed by using co-incubation methods, CFS had high bactericidal activity against E. coli O157: H7, no viable E. coli O157: H7 was detected when 5×107 cfu of E. coli O157: H7 was added to 5 mL of CFS and incubated at 37℃ for 2 h. However, L. acidophilus themselves had no bacteriostatic activity after directly contacted with E. coli O157: H7. The inhibition E. coli O157: H7 adhesion and colonization of L. acidophilus were also investigated based on competition, exclusion and displacement assays. L. acidophilus KLDS1.0901, KLDS1.1003 and NCFM strains were effective to displace E. coli O157: H7 from a Caco-2 cell layer in competition and exclusion assays. However, in displacement assay, all of the strains showed no significant antagonistic activities. Meanwhile, the probiotic potential of L. acidophilus strains was investigated based on adhesion assay to Caco-2 cells and anti-inflammatory effects by IL-8 produced in Caco-2 cells. The adhesion ability and anti-inflammatory effects of L. acidophilus strains showed a strain-dependent manner. In general,L. acidophilus KLDS1.0901 and NCFM showed better probiotic potential than KLDS1.0902 and KLDS1.1003. Thus, the use of L. acidophilus KLDS1.0901 and NCFM to prevent or treat of diseases associated induced E. coli O157: H7 in vivo was suggested.     

出血性大肠杆菌O157：H7的Tir与stx1／2B融合基因的构建和表达

为了更好防治由出血性大肠杆菌O157：H7引起的疾病,尝试研制基因工程疫苗．其中亚单位疫苗具有很大优势。方法：构建表达tir和stxb的融合基因。将tir基因中间295个氨基酸残基（Tir295）与stxB亚基基因72个氨基酸串联。构建pET28a—stx2b—Tir295-stx1b重组质粒,将其转化于BL21（DE3）,用IPTG进行诱导表达,经SDS--PAGE电沫检测,该融合蛋白获得了高效表达。结果：薄层扫描分析表明,目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的30％左右。结论：由于该融合蛋白由Tir、stx1b和stx2b三部分抗原组成．可刺激机体产生针时转位紧密素受体（Tir）和志贺毒素（stx）的抗体,在EHEC0157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值。     

牛源性Escherichia coli O157??H7分离鉴定、耐药性及耐药基因分析

了解某牛场犊牛群发腹泻后继发胸膜炎、腹膜炎并造成犊牛大量死亡的主要病原菌及其耐药性情况。采集病死犊牛肺、腹膜和肠系膜等脏器,进行病原菌分离、鉴定,并对分离的主要致病菌株进行药敏试验及耐药基因检测。结果表明,引起此次犊牛腹泻及胸膜炎、腹膜炎的主要致病菌为E.coli O157：H7;药敏试验结果表明分离菌对青霉素、四环素和氨苄西林等12种抗生素耐药,对头孢哌酮、头孢他啶、丁胺卡那等8种抗生素敏感,表现为多重耐药。该分离菌同时携带tetB、strB、aadB、aphA、floR和TEM等耐药基因,耐药基因型和耐药表型不完全相同。研究可为E.coli O157：H7的防治和耐药性控制提供依据。     

致病性大肠杆菌O157H7外膜蛋白(OMPs)抗原的快速提取

本试验采用了超声波破碎、N－十二烷基肌氨酸处理和超速离心技术提取致病性大肠杆菌O157H7的外膜蛋白（OMPs）。提取物用SDS－PAGE进行电泳检测。     

食源性致病菌O157:H7的生物检测研究

根据致病性大肠杆菌O157:H7的致病基因rfbE设计特异性引物扩增出致病性O157:H7特异性序列,然后分别用常规的琼脂糖电泳技术和Agilent 2100 Bioanalyzer对PCR产物进行检测,并比较两种检测方法的灵敏度、准确度和重复性.结果表明,Bioanalyzer的灵敏性较琼脂糖凝胶电泳法高;其能准确地...     

肠出血性大肠杆菌O157:H7Tir基因的克隆、表达及生物学活性研究

【目的】克隆、表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7转位紧密素受体(Tir)基因,并研究其抗原性。【方法】选用pET28原核表达载体,体外构建Tir原核表达重组菌,并在大肠杆菌中获得高效表达。选用家兔制备高滴度多克隆抗体,Western blot分析其免疫原性。选用HEp-2细胞进行粘附和粘附抑制试验,通过光镜、电镜和荧光显微镜进行观察。选用Balb/c小鼠进行免疫试验。【结果】成功获得高效表达重组Tir蛋白,并制备了兔源Tir多克隆抗体,Western blot分析此抗体能与Tir发生特异性抗原抗体反应。表达Tir蛋白能够抑制O157:H7对HEp-2细胞的粘附和A/E损伤。二免后Balb/c小鼠保护率高达75%以上。【结论】在大肠杆菌中成功克隆表达了Tir基因,所获重组Tir蛋白具有良好的抗原性,可能用于肠出血性大肠杆菌O157基因工程疫苗的研究。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7Tir基因的克隆、表达及生物学活性研究#br#

【目的】克隆、表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157：H7转位紧密素受体(Tir)基因,并研究其抗原性。【方法】选用pET28原核表达载体,体外构建Tir原核表达重组菌,并在大肠杆菌中获得高效表达。选用家兔制备高滴度多克隆抗体,Western blot分析其免疫原性。选用HEp-2细胞进行粘附和粘附抑制试验,通过光镜、电镜和荧光显微镜进行观察。选用Balb/c小鼠进行免疫试验。【结果】成功获得高效表达重组Tir蛋白,并制备了兔源Tir多克隆抗体,Western blot分析此抗体能与Tir发生特异性抗原抗体反应。表达Tir蛋白能够抑制O157:H7对HEp-2细胞的粘附和A/E损伤。二免后Balb/c小鼠保护率高达75%以上。【结论】在大肠杆菌中成功克隆表达了Tir基因,所获重组Tir蛋白具有良好的抗原性,可能用于肠出血性大肠杆菌O157基因工程疫苗的研究。     

Manufacturing bacteriological contamination outbreaks in industrialized meat production systems: The case of E. coli O157:H7

This article outlines aconceptual framework for examining recentoutbreaks of E. coli O157:H7 infectionassociated with the consumption of beef in theUnited States. We argue that beef produced inthis country is generally safer frombacteriological contamination than in the past.Paradoxically, increasing intensification andconcentration in the meat subsector since theearly 1980s has (a) altered agro-food ecology,including characteristics of foodborne bacteriaand human physiology; (b) created conditionsfavorable for the rapid amplification of lowconcentrations of pathogens; and (c) reducedthe beef industry's flexibility to introducechanges necessary to preclude and/or controlthe rapid spread of pathogens in meat and meatproducts. As a result, beef industry currentlyis capable of producing large quantities ofbacteriologically safe meat whilesimultaneously becoming more vulnerable to foodcontaminations that can be fatal in some cases.The limitations and effectiveness of a newregulatory regime, the HACCP (Hazard Analysisand Critical Control Points) system as well asother efforts to decontaminate the beef supplyare discussed.     

鸽源大肠杆菌O157：非H7菌株的致病性和耐药性分析

为查明南京市某赛鸽公棚赛鸽出现腹泻、死亡的致病病原,本研究对采集的病料进行病原分离鉴定,分析致病菌的血清型、生物被膜表型、毒力基因、耐药菌谱,并对分离菌株进行了人工感染试验。研究表明:1)从患病鸽组织、拭子和粪便中分离出的细菌初步诊断为大肠杆菌O157;分离菌株在NA平板上长出白色、光滑的圆形菌落,在CT-SMAC平板上长出紫红色菌落。2)分离菌株的16S rRNA基因序列与大肠杆菌的相似性达98%~99%,命名为E.c.86246。3)血清学试验表明分离菌株为大肠杆菌O157:非H7菌株,动力试验进一步证实其为动力株。4)分离菌株携带tccp1014、eaeA和hly毒力基因,可导致雏鸡胃肠道出现不同程度的功能损伤,甚至导致死亡;其半数致死量为2.0×10⁵ CFU/mL,具有较强的致病性。5)分离菌株携带tetA、tetM、sul2、aadA1和bla_TEM 5种耐药基因,具有较弱的生物被膜形成能力,对四环素、氨基糖苷类等抗菌药物严重耐药,对阿莫西林、氧氟沙星和诺氟沙星敏感。综上,本研究分离的鸽源大肠杆菌O157:非H7菌株,具有动力性,有较强的致病性和一定的耐药性,为大肠杆菌O157的流行病学调查、致病机理分析和抗菌药物的精准施治提供理论依据和数据参考。     

森林凋落物影响因子研究进展

森林凋落物的影响因素分为凋落量的影响因素和凋落物分解速率的影响因素,分别综述了这2种影响因素的具体情况。其中,凋落量的影响因素包括环境因子、林分因子和人为因子;而凋落物分解速率的影响因素包括内在因素和外在因素,内在因素是指凋落物的质量,外在因素包括气候、土壤状况以及全球变化等。