卡特兰叶片原生质体分离条件的研究

试验以卡特兰叶片组织为材料,研究了预处理时间、酶液组合、酶解时间、酶液中甘露醇含量等不同因素对其原生质体分离的影响.结果表明,以1%的纤维素酶＋0.3%的果胶酶为混合酶液,11%的甘露醇为渗透压稳定剂,在25±1℃的条件下,pH为5.8的酶液组合中酶解8 h,获得的原生质体产量最高,可达8.9×10^6/g鲜重,存活率高达91.2%.     

木薯叶片原生质体分离条件研究

本试验以木薯叶片为材料,研究了质壁分离时间、酶液组合、酶解时间、酶液中甘露醇浓度等不同因素对原生质体分离的影响.结果表明:叶片在CPW9M溶液中质壁分离0.5h后,置于1％离析酶+0.5％纤维素酶+1％半纤维素酶+9％甘露醇的酶液中,黑暗条件下酶解14～16 h,其原生质体产量和活力最高.     

牡丹叶片原生质体分离条件的研究

以地方品种洛阳红牡丹叶片为材料,通过单因素和正交试验,研究了预处理时间、酶解时间、不同酶组合及酶液中甘露醇含量等因素对牡丹叶片原生质体分离的影响。结果表明:在蔗糖浓度为0.3mol/L的溶液中,预处理0.5h效果最好,(25±1)℃条件下,在0.5%纤维素酶+0.4%果胶酶+0.3%半纤维素酶+10%甘露醇、pH值5.8的混合酶液中,酶解6h所得的原生质体产量最高,有活力的细胞可达2.325×106个/g。     

卡特兰叶片原生质体分离条件的研究

试验以卡特兰叶片组织为材料,研究了预处理时间、酶液组合、酶解时间、酶液中甘露醇含量等不同因素对其原生质体分离的影响.结果表明,以1%的纤维素酶+0.3%的果胶酶为混合酶液,11%的甘露醇为渗透压稳定剂,在25±1 ℃的条件下,pH为5.8的酶液组合中酶解8 h,获得的原生质体产量最高,可达8.9×106/g鲜重,存活率高达91.2%.     

菜豆叶片原生质体的分离条件

以菜豆幼嫩叶片为材料,研究了预处理、酶液组合、酶解时间、酶解方式、甘露醇浓度及纯化时的离心转速对菜豆叶片原生质体分离的影响。结果表明:菜豆叶片质壁分离1 h后,在2%纤维素酶+1%离析酶+10%甘露醇+0.1%BSA+5 mmol/L MES+10 mmol/L CaCl2·2H2O,pH为5.8的混合液中,(25±1)℃黑暗条件下振荡酶解12 h可获得大量有活力的绿色原生质体。纯化时400 r/min离心3 min效果较好。     

红叶石楠叶片原生质体分离条件的研究

以红叶石楠(Photinia×frasery)叶片为试验材料,研究了预处理时间、酶类组合、酶解时间、酶液中甘露醇含量及酶解温度等不同因素对其原生质体分离的影响。结果表明,以1.0%的纤维素酶+0.3%的果胶酶为混合酶液,11%的甘露醇为渗透压稳定剂,在25℃±1℃的条件下,酶解8h,获得的原生质体产量最高,可达14.7×106个/g(FW),原生质体活力可达84.5%。     

枣树原生质体分离条件的研究

枣树原生质体分离研究是其原生质体培养与融合、外源遗传物质转化等研究的基础工作。用胚性悬浮培养细胞、细粒状胚性愈伤组织、未细切愈伤组织和已细切愈伤组织等４种材料进行原生质体分离。结果表明,枣树胚性悬浮培养细胞是最佳起邕材料,用浓度为１０ｇ／Ｌ纤维素酶＋１ｇ／Ｌ离析酶＋ＣＰＷ盐（１３２０ｍｇ／Ｌ ＣａＣｌ２·２Ｈ２Ｏ和１００ｍｇ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４·Ｈ２Ｏ组成的混合液）＋０．７ｍｏｌ／Ｌ甘露醇组成的混合     

正交实验优选非洲菊叶片原生质体分离条件研究

以非洲菊叶片为材料,采用正交实验方案对非洲菊叶片原生质体分离条件进行研究,经综合分析结果表明：以1.0%的纤维素酶和0.75%的果胶酶为混合酶液、6%的甘露醇为渗透压稳定剂的条件下,酶解5h能达到较好的分离效果,获得高质量的非洲菊叶片原生质体。     

青天葵叶片原生质体分离条件的优化

以青天葵Nervilia fordii(Hance)Schltr.的新鲜叶片为试材,对青天葵原生质体的制备分离技术进行研究。用不同浓度的甘露醇溶液处理青天葵叶片下表皮细胞,进行细胞质壁分离试验,确定青天葵叶片细胞的等渗浓度;采用正交设计研究酶解法制备青天葵叶片原生质体的最适合纤维素酶浓度、离析酶浓度及酶解时间。结果表明,青天葵叶片细胞的等渗浓度为11%甘露醇;采用1.0%纤维素酶R-10+0.6%离析酶R-10的混合酶液酶解青天葵叶片12 h能达到很好的分离效果,获得高质量的原生质体。     

蛹虫草原生质体分离条件研究

[目的]为蛹虫草各种药理机制及有效成分的研究提供试验依据。[方法]在其他条件不变的情况下,分别研究不同酶解液(单一酶和不同的组合酶)、不同菌龄(3、5、7、9、11 d)、不同酶解时间(1、2、3、4、5 h)、不同酶解温度(23、28、33、38、43℃)、不同酶解pH值(pH值4.92、5.29、5.91、6.47、6.98)以及不同渗透压稳定剂(浓度0.6 mol/L的MgSO4、KCl、甘露醇和葡萄糖)对蛹虫草原生质体制备结果的影响,确定制备蛹虫草原生质体的适宜条件。[结果]用浓度0.6 mol/L KCl配制成含1.0%纤维素酶和0.5%蜗牛酶的复合酶,在28℃、pH值5.91时,对培养9 d的菌丝体酶解3 h,得到的原生质体数量最多。[结论]为以后进行蛹虫草原生质体技术的深入研究和应用奠定了基础。     

芦荟原生质体的分离

[目的]为进一步的离体培养快速繁殖奠定基础,同时也为原生质体的融合(体细胞杂交)提供条件。[方法]采用酶解的方法以芦荟的叶片为材料进行原生质体分离。[结果]用芦荟的叶肉细胞可成功分离出原生质体,而且活力较高,可达90%以上。[结论]芦荟原生质体的成功分离主要取决于材料的来源、酶液的组成。另外还受酶解液的渗透压、温度和pH值影响。     

二倍体马铃薯原生质体的游离与培养

以3种不同基因型的二倍体马铃薯为材料，研究了材料来源和不同预处理及游离过程中渗透浓度对原生质体游离质量和后期发育的影响。结果表明，不同基因型二倍体马铃薯细胞酶解时的适宜渗透浓度不同，Dd-Ⅲ-5为0．35～O．40mol／L，JK3为0．35mol／L，而Dd-Ⅱ-10的适宜渗透浓度范围较广，在0．30～O．45m01／L内均可；不同预处理所游离的原生质体质量及后期发育存在差异，经预处理后的原生质体活性均高于85％，且分化能力强；同一基因型的叶肉和愈伤组织所游离的原生质体活性差异不大，在产量上叶肉细胞高于愈伤组织；愈伤组织分化时，分化培养基附加的3个激素组合中，NAA1mg／L＋ZT 0．2mg／L时愈伤组织全部褐化死亡，而NAA1mg／L＋2，4-D1mg／L＋GA3 0．2mg／L和NAA1mg／L＋BA1mg／L上的愈伤都分化，后者分化较早；基因型对原生质体后期发育影响较大，经培养后，仅Dd-Ⅲ-5得到完整植株。     

蕙兰原生质体分离条件的研究

用蕙兰无菌苗的幼叶和幼原球茎以及花蕾时的花瓣和花粉块为材料，研究了纤维素酶（商品名ＯｎｏｚｕｋａＲ－１０）浓度、渗透压稳定剂甘露醇浓度和酶解时间等因素对蕙兰原生质体分离的影响，结果表明：①花粉块和花瓣的分离条件为１．５％纤维素酶、０．３％果胶酶、１１％甘露醇、酶解时间６．５ｈ时，其原生质体最高得率分别为４．５６×１０６和２．１２×１０６个／ｇＦＷ。②幼叶的分离条件为１．０％纤维素酶、０．３％果胶酶、１３％甘露醇、酶解时间２０ｈ时，其原生质体最高得率为３．３６×１０６个／ｇＦＷ。③幼原球茎的分离条件为１．０％纤维素酶、０．３％果胶酶、１１％甘露醇、酶解时间１６ｈ时，其原生质体最高得率为１．８７×１０５个／ｇＦＷ。此外，花粉块与叶片的原生质体溶液中杂质很少，有利于提纯；花瓣原生质体溶液中碎屑较多，且有少量的针晶；原球茎原生质体溶液中的淀粉粒与针晶很多，非常不易提纯。因此，花粉块与叶片为蕙兰原生质体分离的较好材料     

药用植物青天葵叶片原生质体的制备与纯化

[目的]研究青天葵原生质体的制备与纯化方法。[方法]以青天葵新鲜叶片为试验材料,以青天葵叶片原生质体产量及原生质体存活率为考察指标,研究了预处理、酶解方式、酶解温度、离心转速、光照、筛网目数等因素对青天葵原生质体分离纯化效果的影响。[结果]适宜青天葵叶片原生质体游离的条件是用浓度13%甘露醇溶液预处理叶片1 h、酶解温度（25±1）℃、黑暗、静置;原生质体纯化采用离心沉淀法,以200目筛网过滤后离心8 min（800 r/min）,操作2次,可得到大量完整清晰、细胞碎片少的原生质体。[结论]该方法获得了制备青天葵原生质体的理想条件与参数,为建立青天葵原生质体再生体系提供了依据。     

酶解条件对黄瓜原生质体分离效果的影响

[目的]研究黄瓜原生质体分离的最佳酶解条件.[方法]以黄瓜子叶和悬浮细胞为材料,研究不同酶解条件对其原生质体的分离效果的影响.[结果]黄瓜子叶获得高质量的原生质体的最佳条件为：酶液组合2％纤维素酶＋1.0％果胶酶,酶解时间8h,酶液浓度0.7 mol/L,酶液pH 5.5.[结论]该试验研究了不同酶解条件对黄瓜原生质体的分离效果的影响,为黄瓜的进一步开发利用提供依据.     

金钗石斛菌根、茎和叶内生真菌的分离与鉴定

[目的]分离鉴定铁皮石斛不同组织内生真菌,以期为提高其组培苗的大田定植成活率提供试验依据。[方法]以改良PDA-抗生素酸性培养基为基础分离培养基,分别从金钗石斛菌根、茎和叶中分离内生真菌,利用切片法对分离得到的菌株进行纯化,并观察其菌落形态。[结果]通过菌落形态观察,初步鉴定所纯化的6个内生菌株分别为:NJJG-1,NJJG-2,NJJR-1,NJJR-2,NJJR-3和NJYJ-1。试验结果表明材料表面消毒条件和方法以及分离培养基的选用,均直接影响真菌的分离纯化效果和分离得到的内生菌的多样性,其中以75%酒精处理30 s,再用0.1%升汞处理7 min的表面消毒效果稳定,再配合改良的PDA-抗生素酸性培养基分离内生菌,可以分离出较多的内生菌种类。[结论]该研究结果为铁皮石斛不同组织内生真菌的分离鉴定提供了指导方法,同时为提高其组培苗的大田定植成活率提供了试验依据。     

米曲霉原生质体生成条件的研究

[目的]探讨米曲霉原生质体制备的高效方法.[方法]统计米曲霉菌丝体检测不同生长时间(72、84、96、108、120 h)的菌丝、不同渗透压(分别使用0.8 mol/L蔗糖、氯化钠和葡萄糖溶液作为渗透压稳定剂)和不同组合酶系(溶菌酶、纤维素酶和蜗牛酶、混合酶系的配比按照L9(34)正交设计)下的原生质体产量.[结果]经检测,培养108 h菌丝体、0.8 mol/L NaCl渗透压稳定剂原生质体产量较高.同时溶菌酶(2 mg/ml)+纤维素酶(6 mg/ml)+蜗牛酶(6 mg/ml)组合酶系原生质体产量较高,达9×105个/ml.[结论]原生质体的产量受菌体自身状况和外界条件影响.该研究为大量制备高活力的原生质体及进行细胞融合试验奠定了基础.     

米曲霉原生质体生成条件的研究（摘要）（英文）

[目的]探讨米曲霉原生质体制备的高效方法。[方法]统计米曲霉菌丝体检测不同生长时间（72、84、96、108、120 h）的菌丝、不同渗透压（分别使用0.8 mol/L蔗糖、氯化钠和葡萄糖溶液作为渗透压稳定剂）和不同组合酶系（溶菌酶、纤维素酶和蜗牛酶、混合酶系的配比按照L9（34）正交设计）下的原生质体产量。[结果]经检测,培养108 h菌丝体、0.8 mol/LNaCl渗透压稳定剂原生质体产量较高。同时溶菌酶（2 mg/ml） ＋纤维素酶（6 mg/ml） ＋蜗牛酶（6 mg/ml）组合酶系原生质体产量较高,达9×105个/ml。[结论]原生质体的产量受菌体自身状况和外界条件影响。该研究为大量制备高活力的原生质体及进行细胞融合试验奠定了基础。