异源精子诱导栉孔扇贝雌核发育早期胚胎发育及其倍性分析

采用紫外线遗传灭活的长牡蛎（Crassostrea gigas）精子作激活源,经6-DMAP加倍诱导栉孔扇贝（Chlamys farreri）第二极体抑制型雌核发育二倍体;运用荧光显微技术,对雌核发育二倍体卵子早期胚胎发育过程中的核相变化进行观察。结果显示,紫外线处理过的精子入卵后发生一次轻微膨胀,形成雄性原核,但不形成染色体,而是浓缩为致密的染色质小体（DCB）,DCB或滞留于两卵裂球的分裂沟上或进入其一的细胞质中,不与雌原核融合;雌核发育胚胎的发育速度明显滞缓,经6-DMAP处理后胚胎发育速度加快,发育同步化;在雌核发育二倍体诱导过程中,还观察到杂交体、异源三倍体、雌核发育单倍体、雌核发育四倍体。结果为异源精子诱导栉孔扇贝雌核发育提供了细胞学证据。     

用6-DMAP诱导栉孔扇贝异精雌核发育四倍体的细胞学观察

用6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)抑制受精卵第一极体和第二极体的排出,诱导栉孔扇贝Chla-mys farreri异精雌核发育四倍体。采用石蜡切片法,在光学显微镜下观察受精卵在受精和早期卵裂过程中细胞学的变化。结果显示:被遗传灭活的长牡蛎Crassostrea gigas精子(照射强度1 500μW/cm2,照射时间60 s)能够与栉孔扇贝卵子正常授精并激发受精活动,但受精卵发育速度较对照组的迟缓;受精卵即将排出第一极体之前用6-DMAP(终浓度50 mg/L)处理35 m in,抑制受精卵第一极体和第二极体的排出;至原核形成期,四倍性雌核最终融合,在此过程中精核一直处于凝缩状态,不解凝,不形成雄性原核;到第一次卵裂前期,精核以致密的染色质体(DCB)形式位于两组母本染色体之间,卵裂末期,精核位于两卵裂球之间的卵裂沟上或进入其中一个卵裂球的细胞质中;第二次卵裂过程中,精核仍然以DCB形式滞留于卵裂沟上或其中一个卵裂球中。另外,作者还观察到核物质分离紊乱、染色体多极分离等现象,并对产生这种现象的原因进行了探讨。     

栉孔扇贝成长因子研究

[目的]研究栉孔扇贝成长因子。[方法]对麻子港自然海域的栉孔扇贝养殖场进行水质、浮游植物及地形的研究。[结果]结果表明,在扇贝的1个生长周期内各种条件的变化对扇贝的生长都有影响。其中,浮游植物的密度对其影响作用最关键：密度小时扇贝食物来源少生长缓慢,在一定的密度范围内扇贝快速增长,当达到赤潮的密度时又会导致扇贝的大量死亡。其他条件通过影响浮游植物的密度对扇贝起间接的作用。温度也是影响扇贝成长的重要因素。调查表明,10月水温在18℃左右,此时浮游植物的密度相对较大,是扇贝的黄金生长期,扇贝的壳高和肥度有明显的变化,11月中旬扇贝壳高达8 cm,产量可达17 kg/笼,11月中旬后,温度下降,浮游植物含量也随之下降,扇贝大小基本无变化。此时海水只是暂时的存放地,以供鲜货上市。[结论]为找到一种改善栉孔扇贝养殖的方法提供科学依据。     

温度休克诱导栉孔扇贝和虾夷扇贝三倍体的初步研究

本文报道了用冷休克和热休克的方法阻止第一极体释放诱导栉孔扇贝(Chlamys farreri)和虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)三倍体的实验结果。栉孔扇贝在水温17℃下,受精后17min,开始处理。冷休克以1℃,处理持续时间为20min处理组倍化频率最高,为30.4％;热休克以30℃,处理时间为12min的处理组倍化频率最高,达27.6％。虾夷扇贝在水温10℃下,受精后40min,开始热休克处理,结果以29℃,处理持续时间为11min组最好,倍化频率为26.7％。处理组与对照组在孵化率,畸形率和胚胎发育上有明显的差异。栉孔扇贝2n=38,3n=51,虾夷扇贝2n=38,3n=57。     

温度休克诱导栉孔扇贝和虾夷扇贝三倍体的初步研究

本文报道了用冷休克和热休克的方法阻止第一极体释放诱导栉孔扇贝(Chlamys farreri)和虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)三倍体的实验结果。栉孔扇贝在水温17℃下,受精后17min,开始处理。冷休克以1℃,处理持续时间为20min处理组倍化频率最高,为30.4％;热休克以30℃,处理时间为12min的处理组倍化频率最高,达27.6％。虾夷扇贝在水温10℃下,受精后40min,开始热休克处理,结果以29℃,处理持续时间为11min组最好,倍化频率为26.7％。处理组与对照组在孵化率,畸形率和胚胎发育上有明显的差异。栉孔扇贝2n=38,3n=51,虾夷扇贝2n=38,3n=57。     

不同地理种群栉孔扇贝营养成分的比较分析

[目的]分析和评价辽宁、山东、江苏、广东4个不同地理种群栉孔扇贝的营养成分。[方法]用常规方法分析其软体部一般营养成分;用氨基酸分析仪分析氨基酸组成。[结果]蛋白质含量以山东种群最高;粗脂肪和灰分以辽宁种群最高;水分含量以广东种群最高。氨基酸的组成非常全面,各地理种群栉孔扇贝干物质中氨基酸总量由大到小的变化顺序为山东(761.9 mg/g)>广东(755.6 mg/g)>江苏(752.1 mg/g)>辽宁(741.1 mg/g);EAA/TAA比率在36.15%~37.64%;呈味氨基酸的含量较高,变化范围为306.9~312.6 mg/g。钾、磷、钙、镁、铁等元素的含量丰富。[结论]不同地理种群的栉孔扇贝一般营养成分、氨基酸及矿物元素含量虽存在一定差异,但与其他一些双壳贝类相比,栉孔扇贝是高蛋白、氨基酸和矿物元素含量较丰富的海洋食品。     

改进栉孔扇贝养殖技术研究

栉孔扇贝是我国北方扇贝养殖的主要品种,但随着养殖规模的扩大,栉孔扇贝陆续出现死亡现象,1997年、1998年死亡率曾高达90%,部分海区甚至绝产,给渔民造成了巨大的经济损失,因此改进和提高养殖技术已成为栉孔扇贝养殖可持续发展的迫切需要.为此,作者大胆探索出了一条栉孔扇贝养殖新技术--"秋放春收",即改变栉孔扇贝"春放秋收"的传统养殖方式,以避开夏季栉孔扇贝死亡高峰期,从而提高养殖效益.     

人工诱导马粪海胆雌核发育的早期胚胎发育及细胞学观察

以马粪海胆Hemicentrotus pulcherrimus为试验材料,采用紫外线照射使精子遗传失活,用热休克抑制第1次卵裂,并对对照组、照射组及二倍化组的早期胚胎进行乙酸-地衣红压片观察,还对马粪海胆雌核发育早期的胚胎发育、细胞学及精子的超微结构进行了研究.结果表明:照射组和二倍化组的受精率、上浮率、细胞分裂同步性和二倍体率较对照组降低,畸形率升高,且胚胎发育滞后60～90 min;扫描电镜观察结果说明,精子顶体结构受到不同程度的破坏是导致受精率降低的主要原因.二倍化组上浮率(8.0%)和二倍体率(21.4%)较照射组的上浮率(4.9%)和二倍体率明显升高.细胞学观察发现,用紫外线照射后的精子没有像雌性原核那样形成雄性原核,而是浓缩为一染色质小体--DCB小体,不能与雌性原核融合,也不能进行正常的核分裂.经紫外线照射后,受精卵的细胞分裂方式也发生改变,出现三极或者四极分离,同时出现不均等卵裂.经热休克处理后,压片观察发现,在受精卵细胞中出现圆形的泡状区域.     

虾夷扇贝精子的冷冻保存及其杂交试验应用研究

以精子活力和受精率为参数,就收集精子的方法、抗冻剂的种类和浓度及冷冻程序和平衡时间对虾夷扇贝精子超低温保存效果的影响进行了研究,并进行了冻存精子与栉孔扇贝卵子的杂交实验.结果表明,肾管处收集到的精液与海水配的16%DMSO 1∶3（v/v）混合,在4 ℃冰箱内平衡5～10 min,在液氮面上方20cm、3 cm处分别停留3 min、10 min后浸入液氮保存,冻精活力在40%以上.在液氮中保存1 d、8 d、30 d、90 d后解冻,冷冻精子活力没有显著差异（P＞0.05）,但明显低于新鲜精子的精子活力.虾夷扇贝的冻精可以使栉孔扇贝卵子受精,受精率在20%以上,并能得到正常的D型幼虫.     

氯氰菊酯和氰戊菊酯对栉孔扇贝的急性毒性

研究了氯氰菊酯和氰戊菊酯对栉孔扇贝Chlamys farreri的急性毒性作用和不同农药浓度对栉孔扇贝鳃ATP酶的影响。结果表明：氯氰菊酯和氰戊菊酯对栉孔扇贝的96 h LC50分别为0.240、1.742mg/L，安全浓度分别为2．40、17．40 μg／L，栉孔扇贝对氰戊菊酯的敏感性低于氯氰菊酯；不同浓度的氯氰菊酯和氰戊菊酯均使栉孔扇贝鳃Na^＋／K^＋-ATP、Ca^2＋-ATP、Mg^2＋-ATP酶的活性有不同程度的提高，这是扇贝对农药作出的一种急性应急反应。     

氯氰菊酯和氰戊菊酯对栉孔扇贝抗氧化能力的影响

研究了用不同浓度的氯氰菊酯(5、25、125μg/L)和氰戊菊酯(25、125、625μg/L)浸泡栉孔扇贝Chlamys farreri3、6、9、12和15 d后,对血清、内脏囊和鳃组织中的SOD、CAT活性及血清总抗氧化能力(T-AOC)的影响。结果表明:栉孔扇贝血清和各组织中的CAT活性随着氯氰菊酯浓度的升高而增加,氯氰菊酯浓度为125μg/L时,CAT活性最高;而氰戊菊酯浓度为25μg/L时,CAT的活性最高,然后随着浓度的增加其活性降低;当氯氰菊酯和氰戊菊酯浓度分别为5、25μg/L时,各组织中SOD活性和血清T-AOC值出现最大值,然后随着浓度的增加其活性降低。随着农药处理时间的延长,血清中的T-AOC和SOD活性、组织中CAT活性呈现下降趋势;而组织中SOD活性、血清中CAT活性表现为先上升后下降的趋势。另外,栉孔扇贝的抗氧化能力具有组织特异性,鳃组织中SOD活性值的早期变化可作为两种农药对栉孔扇贝氧化毒性的敏感指标。     

酵母聚糖和甘氨酸锌对栉孔扇贝血细胞的影响

采用流式细胞术对栉孔扇贝(Chlamys farreri)血细胞类群百分比的变化进行了研究,以探讨酵母聚糖和甘氨酸锌对贝类免疫防御影响的规律。体内注射酵母聚糖和甘氨酸锌后,分别于6 h、12 h、24 h、48 h、96 h和144 h测定其血细胞各类群的比例的变化。根据前向角散射光(FSC)和侧向角散射光(SSC)强度的不同,栉孔扇贝血细胞可明显地分为透明细胞、小颗粒细胞和大颗粒细胞3个类群。注射酵母聚糖后,在6 h、12 h、24h和48 h时,实验组透明细胞占总血细胞的比例显著高于对照组,而实验组小颗粒细胞所占比例在6 h、12 h和24 h时显著低于对照组。注射甘氨酸锌后,在12 h、24 h和48 h时,实验组透明细胞所占比例显著高于对照组,而小颗粒细胞所占比例显著低于对照组。说明酵母聚糖和甘氨酸锌对栉孔扇贝血细胞的分群有明显的影响,可显著刺激透明细胞的数量增多,同时颗粒细胞数量减少。     

酵母聚糖和甘氨酸锌对栉孔扇贝血细胞的影响

采用流式细胞术对栉孔扇贝(Chlamys farreri)血细胞类群百分比的变化进行了研究,以探讨酵母聚糖和甘氨酸锌对贝类免疫防御影响的规律。体内注射酵母聚糖和甘氨酸锌后,分别于6 h、12 h、24 h、48 h、96 h和144 h测定其血细胞各类群的比例的变化。根据前向角散射光(FSC)和侧向角散射光(SSC)强度的不同,栉孔扇贝血细胞可明显地分为透明细胞、小颗粒细胞和大颗粒细胞3个类群。注射酵母聚糖后,在6 h、12 h、24h和48 h时,实验组透明细胞占总血细胞的比例显著高于对照组,而实验组小颗粒细胞所占比例在6 h、12 h和24 h时显著低于对照组。注射甘氨酸锌后,在12 h、24 h和48 h时,实验组透明细胞所占比例显著高于对照组,而小颗粒细胞所占比例显著低于对照组。说明酵母聚糖和甘氨酸锌对栉孔扇贝血细胞的分群有明显的影响,可显著刺激透明细胞的数量增多,同时颗粒细胞数量减少。     

栉孔扇贝蛋白酶和淀粉酶活力的初步研究

研究了栉孔扇贝两种主要消化酶－－蛋白酶和淀粉酶与温度和ｐｈ值的关系，结果表明，在４．８℃与７５℃之间蛋白酶的最适温度为６０℃，在５℃与６０℃之间淀粉酶的最适温度为２５℃，蛋白酶的最适ｐＨ值有两个，分别是２．６１和７．７７，淀粉酶的最适ｐＨ值为６．５。栉孔扇贝蛋白酶和淀粉酶的活性与酶本身的性质及栉孔扇贝的生理状态有关。     

黄渤海水域栉孔扇贝加工废弃液中的营养及功能成分分析

[目的]明确黄渤海水域栉孔扇贝加工废弃液中的营养及功能成分。[方法]取山东烟台的栉孔扇贝废弃液为材料,采用83550型氨基酸自动分析仪和分光光度法分析栉孔扇贝废弃液的浓缩液中的有关营养功能成分。[结果]山东烟台栉孔扇贝加工废弃液中含有8种人体必需氨基酸,牛磺酸含量为1.97%,蛋白质和总糖的平均含量分别为11.82%和12.68%。[结论]扇贝煮汤营养物质含量丰富,且含有大量的鲜味物质,是加工调味品的理想原料。     

病毒感染对栉孔扇贝血细胞类型和功能的影响

用从胶州湾大规模死亡栉孔扇贝体内分离出来的球状病毒注射感染栉孔扇贝（Chlamys farreri）,分别于病毒感染后8h、24h、48h、72h和128h取血,采用流式细胞仪技术研究了病毒对栉孔扇贝血细胞类型及死亡率的影响,采用荧光显微技术研究了病毒感染的栉孔扇贝血细胞的体外吞噬和包囊化作用的变化。结果表明,病毒感染的扇贝血细胞各类型的比例同对照组相比有显著的差异,在24h、48h和72h,实验组透明细胞比例显著高于对照组,并呈逐渐升高趋势,在8h、24h、48h、72h,实验组大颗粒细胞比例显著低于对照组。在24h、48h、72h和128h,实验组血细胞的死亡率显著高于对照组。病毒感染后,实验组扇贝血细胞的体外吞噬率和包囊化率都显著高于对照组。     

病毒感染对栉孔扇贝血细胞类型和功能的影响

用从胶州湾大规模死亡栉孔扇贝体内分离出来的球状病毒注射感染栉孔扇贝（Chlamys farreri），分别于病毒感染后8h、24h、48h、72h和128h取血，采用流式细胞仪技术研究了病毒对栉孔扇贝血细胞类型及死亡率的影响，采用荧光显微技术研究了病毒感染的栉孔扇贝血细胞的体外吞噬和包囊化作用的变化。结果表明，病毒感染的扇贝血细胞各类型的比例同对照组相比有显著的差异，在24h、48h和72h，实验组透明细胞比例显著高于对照组，并呈逐渐升高趋势，在8h、24h、48h、72h，实验组大颗粒细胞比例显著低于对照组。在24h、48h、72h和128h，实验组血细胞的死亡率显著高于对照组。病毒感染后，实验组扇贝血细胞的体外吞噬率和包囊化率都显著高于对照组。