己烯雌酚对成年仓鼠睾丸生精的影响

 探讨环境内分泌干扰物己烯雌酚(DES)对成年动物睾丸生精的影响。将DES皮下注射给成年仓鼠(剂量为1 mg·kg-1·d-1)，用光镜和电镜观察睾丸和生精细胞形态结构的变化，并用甲基绿-哌咯宁和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测生精细胞的凋亡。结果表明，DES处理后睾丸萎缩，曲精小管变细。曲精小管内的细胞排列紊乱，大量的精母细胞和精子细胞凋亡，少见长形精子细胞。电镜下，这些退化的精母和精子细胞的胞浆内有大量髓样或空泡状结构。DES诱发生精细胞凋亡是造成成年动物睾丸生精障碍的重要原因。     

绵羊睾丸的季节性变化

四季观察和测量表明,绵羊睾丸体积、重量、曲细精管直径、生精上皮高度和单位面积上间质组织的面积均于秋季达到最高值,而于冬、春季节降到最低,单位面积上曲细精管面积和曲细精管与间质的体积比则是冬季最高,秋季最低。     

绵羊睾丸的季节性变化

四季观察和测量表明 ,绵羊睾丸体积、重量、曲细精管直径、生精上皮高度和单位面积上间质组织的面积均于秋季达到最高值 ,而于冬、春季节降到最低。单位面积上曲细精管面积和曲细精管与间质的体积比则是冬季最高 ,秋季最低。     

体外培养小鼠生精细胞的形态学

利用姬姆萨原液和瑞-姬染色法对30～35日龄小鼠精液和睾丸组织培养后的生精细胞和精子进行形态学鉴定.结果表明,用姬姆萨原液染色鉴定,精子形态清晰,细胞膜边缘清楚,呈紫红色,未成熟精子的染色程度浅于成熟精子;经过培养的睾丸组织用姬姆萨原液染色,生精细胞形态清晰,细胞核呈颗粒状,开始呈现深紫红色,胞质粉红色且带有蓝色背景,颜色较深,一定时间后颜色变浅;瑞-姬染色生精细胞形态完整清晰,细胞核、核仁、胞质分别呈现不同颜色.     

一种有效分离及在体外扩增成年小鼠精原干细胞的方法

尝试建立一种简便有效的成年小鼠精原干细胞分离培养及扩增的方法。从单只成年小鼠的睾丸中经过两步酶消化法分离精原干细胞,并在去除间质细胞、纯化后的支持细胞饲养层上培养与扩增,获得稳定增殖的精原干细胞系。此方法可显著提高建系成功率,保证细胞系的单一基因型,显著降低体外培养精原干细胞的成本。为成体基因来源的转基因动物的制作和疾病模型的建立提供技术支持。     

小鼠睾丸间质细胞的分离培养

寻求一种简单有效的方法分离纯化睾丸间质细胞并寻求较适宜的培养条件。采用机械撕碎、密度梯度离心等分离、纯化细胞,设对照组寻求较适宜的培养条件。刚分离的细胞经苔盼蓝染色,存活率〉90%;体外培养的细胞形态完整、增殖速度快、贴壁生长状态良好。用17-α羟化酶和用雄激素结合蛋白RT-PCR扩增进行纯度鉴定,前者出现特异片段,后者未出现。该方法简单、经济、快速、有效,适合睾丸间质体外分离培养。     

绵羊睾丸内分泌细胞的季节变化

测量并比较了中国美利奴羊四季睾丸的间质细胞和支持细胞的数目及细胞核大小 ,结果是无论是单位面积、间质细胞的数目 ,还是间质细胞和支持细胞核的大小 ,均呈季节性变化。从春季到冬季 ,在 0 .11mm2 切片上的间质细胞数分别为 34 .80± 2 .98、44 .0 0± 2 .80、47.95± 2 .99和 2 9.87± 2 .2 3个 ;间质细胞核直径分别为 5 .5 1± 0 .6 5、6 .11± 2 .48、6 .36± 0 .94和 4.6 8± 0 .47μm ;支持细胞核直径分别是 7.44± 0 .75、7.5 6± 0 .95、9.2 5± 1.0 5和 7.44± 1.5 7μm。均以秋季达到高峰 ,冬季最低但在曲细精管中支持细胞数无季节变化。     

中国美利奴羊睾丸生精过程的季节性变化规律研究

用组织学方法对中国美利奴公羊四季睾丸的生精过程研究结果表明,公羊的各级生精细胞数量、精子发生率以及精子日产量等均呈季节性变化,秋季最高,冬春季最低(仅为秋季的60%～70%);繁殖季节与非繁殖季节差异极显着(p<0.001);睾丸中曲细精管直径、生精上皮高度以及生精细胞、内分泌细胞的数密度呈现明显的季节性规律变化。     

七日龄小鼠生精小管及睾丸的冷冻保存*

 在DMEM培养液中添加10%小牛血清（NBS）及10%二甲基亚砜（DMSO）作为冻存液，慢速降温冷冻，液氮保存7日龄小鼠生精小管及完整睾丸，37 ℃水浴复苏，0.25%胰蛋白酶消化成单细胞，台盼蓝染色测定细胞复苏率。结果：生精小管及完整睾丸冷冻复苏后细胞复苏率分别为87.3%及85.0%，两复苏率之间无显著差异，与生精小管单细胞对照组相比也无显著差异。冷冻损失率分别为10.1%及12.4%。结果表明，对于7日龄小鼠生精小管及完整睾丸，以10% DMSO为抗冻剂，慢速降温冷冻，液氮保存，37 ℃水浴复苏是一种适宜的冷冻保存方法。     

三氧化二砷诱导大鼠睾丸生精细胞凋亡的研究

[目的]观察不同剂量的三氧化二砷对成年大鼠生精细胞凋亡的影响。[方法]40只健康雄性SD大鼠随机分成4组,分别为0.375、0.750、1.500 mg/kg 3个染毒组和对照组,灌胃法连续给药16周后对各组大鼠进行睾丸脏器系数、精子头计数,并计算每日精子生成量。采用甲基绿—派诺宁染色法和TUNEL法检测大鼠生精细胞凋亡情况。[结果]中剂量组(0.750 mg/kg)和高剂量组(1.500mg/kg)睾丸精子头计数和DSP均低于对照组;与对照组相比,中剂量组和高剂量组生精细胞凋亡指数(AI)均显著升高(P<0.01);生精细胞凋亡指数与每日精子生成量呈负相关(r=-0.563,P<0.01)。[结论]一定剂量的As2O3可通过促进生精细胞凋亡而导致精子生成量的减少,产生生殖毒性。     

视黄醇对仔猪睾丸支持细胞体外生物学特性的影响

支持细胞是构成曲细精管上皮的重要组成细胞,视黄醇及其衍生物是雄性动物睾丸发育和精子发生中所必须的物质,支持细胞是睾丸内视黄醇及其衍生物作用的靶细胞。本研究以3~5周龄仔猪睾丸支持细胞为材料,通过分析视黄醇对体外支持细胞活力、增殖和凋亡相关基因表达、相关细胞因子转录及合成的影响,评价视黄醇对支持细胞体外生物学特性的影响。结果显示,与对照组相比,视黄醇添加浓度达到5.000、0.125 μmol·L^-1时,显著抑制培养24 h和72 h的细胞活性(P<0.05);添加1.250 μmol·L^-1视黄醇组和对照组相比,增殖相关基因PCNA、BCL-2和C-MYC显著下调(P<0.05),凋亡相关基因BAX显著上调(P<0.05),且支持细胞内GDNF、CSF-1和EGF在基因表达和蛋白质水平上均显著降低(P<0.05)。体外培养条件下,添加视黄醇抑制支持细胞活性,促进细胞凋亡。     

小鼠ES细胞在不同饲养层上培养nanog基因的 表达水平与生长行为

观察小鼠ES-D3细胞在MEF、新生牛睾丸支持细胞(nBTSCs)和新生兔睾丸支持细胞(nRTSCs)饲养层上生长4dnanog基因的表达水平和生长行为。RT-PCR分析显示,MEF饲养层上培养4d的ES-D3nanog基因含量高;nBTSC饲养层上培养nanog基因表达较低;而RTSC饲养层上培养nanog基因表达最低。结果显示:不同饲养层上的ES-D3细胞集落形态和培养4d分化程度有差异。在MEF饲养层上的ES-D3细胞培养4d,集落形态仍然很规则,细胞间紧密,集落表面少见大细胞,AKP染色强阳性。在nBTSC饲养层上的ES-D3细胞,集落界限清晰,AKP染色显示,集落大部分细胞呈阳性,少数的细胞集落为弱阳性,可见集落表面分散有较多的大细胞。在nRTSC饲养层上的饲养层上的ES-D3,集落隆起不明显,集落界限不清晰,大部分集落形态不太规则,AKP染色显示集落中部分细胞呈阳性,少数的细胞集落为全阴性,集落表面有较少的大细胞,集落周围有伸出的成纤维细胞。     

石灰、蒌叶处理槟榔对小鼠生殖毒性及体温的影响

为探索添加蒌叶和石灰对槟榔毒副作用的影响,设置蒌叶+槟榔、石灰+槟榔、蒌叶+石灰+槟榔、槟榔4个处理及空白对照(蒸馏水),分别将不同处理的水提液(蒸馏水)对SPF级KM小鼠进行灌胃处理,每天1次,连续灌胃14 d,测定小鼠的生精细胞凋亡指数、Bcl-2与Bax蛋白表达量及体温。结果表明,与空白对照相比,各处理的睾丸曲细精管中生精细胞凋亡指数均增高且差异显著,其中槟榔处理的凋亡指数最大,其次是槟榔+石灰,槟榔+蒌叶+石灰处理最小,槟榔处理的凋亡指数是槟榔+蒌叶+石灰处理的2.6倍;各处理的Bax蛋白表达阳性率均增高,Bcl-2蛋白表达阳性率均降低,其中槟榔处理变化幅度最大,槟榔+蒌叶+石灰槟榔处理最小,槟榔+蒌叶+石灰处理的Bcl-2/Bax值是槟榔处理的1.41倍;各处理的小鼠体温均呈现下降趋势,槟榔+蒌叶+石灰处理体温相对最高且降幅最小,与槟榔处理相反。可见,添加蒌叶或石灰能减弱槟榔对小鼠的毒性作用。     

槲皮素对免疫低下小鼠体液免疫功能的影响

本试验探讨了不同剂量槲皮素对免疫低下小鼠体液免疫功能的影响。通过氢化可的松或环磷酰胺建立免疫抑制小鼠模型,灌胃不同剂量的槲皮素。10d后测定免疫器官指数、脾脏抗体形成细胞和血清溶血素含量。结果表明,槲皮素高、中剂量组小鼠免疫器官指数、抗体形成细胞OD值及血清溶血素HC50明显高于模型组(P<0.05)。     

温度及BRL饲细胞对体外小鼠精原干细胞的影响

 将6 日龄小鼠生精上皮单细胞分别接种于BRL和STO饲养层上,于32 ℃或37 ℃培养,研究其对精原干细胞的影响。结果:在培养的第1周内,2个及4个相连的精原细胞合胞体明显增多。培养１周后,多数精原细胞经短暂的存活及分裂活动后退化消失,培养体系中仅保留下少量单个及由细胞间桥相连的双个及4个成串或成团的A型精原细胞。这些细胞在随后的培养过程中,不表现明显的分裂活动,呈碱性磷酸酶阳性反应。根据精原干细胞生物学特性,它们极有可能就是精原干细胞及其子代细胞。不同条件培养体系中的精原干细胞的生物学行为无明显不同,培养60 d时均仅有少量精原干细胞存活。结论: BRL细胞能用作饲养层促进精原干细胞存活,但对其更新性增殖没有明显作用;32～37 ℃对精原干细胞的生物学行为无明显影响,均可用于培养精原干细胞。     

低温菌株的筛选及对堆肥温度的影响

为解决北方低温季节牛粪大量堆积问题,将筛选的糖、淀粉、蛋白质和纤维素分解菌株复配,优化出组合菌剂(T1+DF2+D2+D5+XB1+XA2),研究低温下优化组合菌剂对低温牛粪堆肥起温的影响。结果表明,在室外-20℃低温下,牛粪接种优化组合菌剂后物料迅速升温,48h达55.8℃,第4d达64.9℃,高温期维持8～9d,发酵周期缩短至15d,而未加菌和加常温发酵剂的对照则一直未进入高温期。说明添加低温复合发酵剂能使低温下牛粪堆体迅速升温,进入高温期,完成无害化,缩短发酵周期。     

ZEA与DON单一及联合染毒致仔猪睾丸支持细胞凋亡的影响

为研究玉米赤霉烯酮(ZEA)与脱氧雪腐镰刀菌烯醇 (DON)单一与联合染毒对仔猪睾丸支持细胞凋亡的作用机理,以10 μg·mL^-1 ZEA与0.2 μg·mL^-1 DON 对睾丸支持细胞单一与联合染毒处理24 h,采用CCK-8法检测细胞活率,电镜观察细胞超微结构变化,流式细胞术、免疫荧光检测细胞凋亡率和线粒体膜电位变化,荧光定量PCR检测凋亡相关基因表达量。结果显示,ZEA与DON单一及联合染毒均可导致仔猪睾丸支持细胞活率下降,细胞超微结构损伤,凋亡率升高,并下调线粒体相关抗凋亡基因Bcl-2表达,上调促凋亡基因Bax、Bid以及下游凋亡相关基因Caspase-3与Caspase-9的表达量,且联合作用大于单一作用。本试验结果表明,ZEA与DON可通过线粒体途径诱导仔猪睾丸支持细胞凋亡,且联合毒性大于单一毒性,表现为亚加性效应。     

温度对冻存小鼠精原细胞的复苏效果

 采用不同温度对冻存后的小鼠精原细胞进行复苏,测定细胞复苏率。4 ℃,37 ℃,67 ℃及97 ℃时的细胞复苏率分别为29.7%,87.6%,88.8%及86.4%。37 ℃,67 ℃及97 ℃的细胞复苏率之间在统计学上无显著性差异。结果表明:37～97 ℃复苏小鼠精原细胞均可获得较好的复苏效果,而4 ℃对小鼠精原细胞复苏不利。     

脱毒菜籽多肽对小鼠免疫功能的影响

[目的]研究脱毒菜籽多肽对小鼠免疫功能的影响。[方法]试验组以低、中、高剂量组0.334、0.667和2.000 g/(kg·d)的脱毒菜籽多肽灌胃小鼠,对照组以等体积纯净水灌胃,30 d后进行二硝基氟苯诱导小鼠迟发性变态反应试验、Con A诱导小鼠脾淋巴细胞转化试验、抗体生成细胞检测和血清溶血素测定试验、小鼠碳廓清试验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验、NK细胞活性测定试验、试验前后小鼠体重以及脏器/体重比值试验。[结果]脱毒菜籽多肽对小鼠的耳廓肿胀、脾淋巴细胞转化、吞噬指数a和NK细胞活性均有显著影响,但对小鼠体重增长、胸腺/体重比值、脾脏/体重比值、脾抗体生成细胞量、血清溶血素水平和腹腔巨噬细胞吞噬能力均无影响。[结论]脱毒菜籽多肽具有增强免疫力的功能。     

人参皂苷促进小鼠成骨细胞增殖的作用及机制

目的 观察人参皂苷（Ginsenoside,GSS）对小鼠成骨细胞增殖活性的影响,并探讨其作用机制。方法 采用MC3T3-E1小鼠成骨细胞系, 加入不同浓度的GSS （3.125~50 μg/mL） 培养后,MTT法检测GSS对成骨细胞增殖的影响,荧光定量RT-PCR法检测不同浓度各组细胞内p21和p27 mRNA的表达水平,并采用Western-blot检测细胞周期相关蛋白表达。结果 与空白对照组相比,3.125~50 μg/mL的GSS在24、48 h时均能够显著促进成骨细胞的增殖(P<0.01或0.05),其作用具有时间依赖性和浓度依赖性。50、25 μg/mL的GSS能够显著抑制p21和p27的mRNA表达(P<0.01),而12.5 μg/mL的GSS对其表达无影响。50、25 μg/mL的GSS抑制了细胞周期抑制蛋白p21及p27表达水平并上调Cyclin D1表达(P<0.01或0.05)。结论 GSS能够通过上调Cyclin D1表达,抑制p21和p27表达,进而促进小鼠成骨细胞增殖.