桑叶蛋白血管紧张素转换酶抑制肽的酶解制备

本研究旨在探讨桑叶蛋白血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的酶解制备方法,从木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、芽孢杆菌蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶6种蛋白酶中筛选出最佳蛋白酶,并运用单因素逐级优化法对酶解反应的底物浓度、加酶量、温度、pH、酶解时间进行参数优化.选取这6种常用蛋白酶,利用酶解法制备桑叶蛋白多肽,以ACE抑制率为主要指标,水解度为辅助指标,研究桑叶多肽对ACE抑制活性的影响.结果 表明,酶解效果最佳的酶为芽孢杆菌蛋白酶,最佳酶解参数为底物质量浓度20 g/L、加酶量7.5％、温度60℃、pH7.0和酶解时间50 min,此时酶解产物的ACE抑制率为81.51％,水解度为15.86％.     

牦牛乳酪蛋白酶解产物二肽基肽酶-Ⅳ抑制活性和特性分析

以牦牛乳酪蛋白为原料,利用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶制备酪蛋白酶解产物,研究其二肽基肽酶-Ⅳ(dipeptidyl peptidase-Ⅳ,DPP-Ⅳ)抑制活性和理化特性.以DPP-Ⅳ抑制率为指标,研究水解时间和蛋白酶的种类对酶解产物DPP-Ⅳ抑制活性的影响,以水解度、三氯乙酸氮溶解指数(trichloroacetic acid-nitrogen soluble index,TCA-NSI)、溶解性和灰分含量为指标,评价酶解产物的理化特性.结果表明:对于相同水解时间点获得的酶解产物,木瓜蛋白酶酶解产物的DPP-Ⅳ抑制活性显著高于其他2种蛋白酶的酶解产物(P＜0.05).利用木瓜蛋白酶水解0.50 h的酶解产物具有最高的DPP-Ⅳ抑制活性(抑制率可达(53.95±1.57)％)、较高的水解程度以及最低的灰分含量.说明利用蛋白酶水解技术能够使牦牛乳酪蛋白中具有DPP-Ⅳ抑制活性的多肽释放,木瓜蛋白酶酶解产物可作为功能性乳基料用于功能性食品的开发.     

酶解蚕蛹蛋白制备血管紧张素转换酶抑制肽的工艺优化

采用碱性蛋白酶水解蚕蛹蛋白,制备血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制肽,是蚕蛹蛋白深度开发的途径之一。以ACE抑制率为响应值,用响应面分析法研究酶解温度、酶解pH和加酶量等因素对酶解产物的ACE抑制活性的影响,优化制备工艺。结果表明,各因素对制备ACE抑制肽的活性影响程度由大到小依次为酶解pH、酶解温度、加酶量。获得碱性蛋白酶水解蚕蛹蛋白制备ACE抑制肽的最佳工艺条件为:酶解温度50.8℃,酶解pH 9.0,加酶量3 500 U/g。在此条件下,蚕蛹蛋白酶解产物对ACE的理论抑制率最高可达96.67%,验证值为96.49%±1.75%,IC50值为0.102 mg/mL,预测模型可靠性高,可应用于蚕蛹ACE抑制肽的酶法制备。     

绵羊乳酪蛋白血管紧张素转换酶抑制肽的制备与鉴定

以绵羊乳酪蛋白为原料,采用中性蛋白酶水解制备生物活性肽,研究酶解时间对酶解产物水解度和血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制率的影响,利用液相色谱-质谱联用技术对水解产物进行分析和鉴定,筛选具有潜在ACE抑制作用的生物活性肽.结果表明:酶解时间达到300 min时,水...     

家蚕蛹蛋白酶解产物对肿瘤细胞MGC-803的增殖抑制活性鉴定

以不同蛋白酶酶解制备家蚕蛹蛋白酶解产物(SPPHs),采用MTT比色法检测其对人胃腺癌细胞MGC-803的增殖抑制活性。不同蛋白酶酶解制备SPPHs对MGC-803的增殖抑制作用存在显著差异(P0.05),其中家蚕蛹蛋白以Alcalase 2.4L酶解的产物(AH)对MGC-803的增殖抑制活性最高,当AH的质量浓度为0.25 mg/m L时,水解度(DH)=25%的AH的抑制活性最高,对MGC-803细胞的增殖抑制率可达到92.74%。Alcalase2.4L酶解家蚕蛹蛋白产物的分子质量也显著影响其对MGC-803细胞的增殖抑制活性,其中分子质量5 k D组分的抑制率高达91.13%,将该组分经葡聚糖(G-25)凝胶层析后分离出4个组分(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ),组分Ⅱ对MGC-803细胞的增殖抑制率最高(27.5%),但与未分离样品相比,抑制效率显著降低,而其他3个分离组分则无抑制作用。研究结果提示,蚕蛹蛋白酶解产物对肿瘤细胞的体外增殖有抑制作用,并且这种抑制作用可能是由多种组分协同完成。     

大米蛋白胃蛋白酶酶解物体外抗氧化作用的研究

本试验采用正交设计,以羟自由基清除率为评定指标,用胃蛋白酶酶解大米蛋白,旨在确定其酶解物体外抗氧化作用最佳的酶解条件。试验结果表明:当酶解温度为37℃时,影响大米蛋白胃蛋白酶酶解物抗氧化效果的因素大小排序为:pH酶浓度底物浓度酶解时间;最佳酶解条件为:pH1.4、酶浓度5%、底物浓度8%、酶解120min,此条件下酶解物的羟自由基清除率为72.78%,多肽浓度为5.49mg/mL,水解度为15.62%。     

单环刺螠(Urechis unicinctus)酶解及酶解产物功能研究

采用碱性蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶对单环刺螠体壁进行酶解,以水解度为指标。结果表明,三种酶中胃蛋白酶在4 h达到最高水解度38.5%。比较三种酶解产物的抗氧化、总还原力和降血糖功能,中性蛋白酶酶解5 h的产物其亚铁离子螯合力最高,可达50%;DPPH自由基清除能力最高可达51.5%,为胃蛋白酶酶解3 h的产物;胃蛋白酶酶解4 h产物的总还原力最高;胃蛋白酶酶解2 h的酶解产物其DPP-4抑制率最高,可达41.3%。本研究为单环刺螠的综合利用提供了参考。     

利用风味蛋白酶制备蚕蛹蛋白多肽的工艺研究

蚕蛹蛋白是一种优质蛋白资源,蚕蛹蛋白多肽分子量更小,可广泛应用于食品、保健品。以裸蛹家蚕一代杂交种的新鲜、无污染的蚕蛹为研究基础材料,通过有机溶剂提取的方法脱脂后得到蚕蛹粗蛋白,选择市场价格低廉、反应条件温和、酶解产物品质高的风味蛋白酶酶解蚕蛹蛋白,制备蚕蛹蛋白多肽。通过单因素和正交试验确定了蚕蛹蛋白酶解制备蚕蛹蛋白多肽的最佳工艺条件:酶解温度50℃,酶解时间4h,料液质量浓度111g/L,酶解液pH值6.0,酶用量750U/g,此条件下水解度(DH)达到30.12%。     

低致敏牛乳清蛋白的酶法制备

乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-LG)是乳清蛋白中最主要的过敏原之一,如何降低β-LG抗原性是目前需要解决的问题。使用碱性蛋白酶、胰蛋白酶及复合蛋白酶对牛乳清蛋白进行酶解,在不同酶解时间点取样,以β-LG抗原性为主要标准,筛选出各方案中β-LG抗原性最低的酶解产物,同时分析该产物的水解度、分子质量分布情况,并与2款市售水解乳清蛋白产品进行苦味比较。结果表明:碱性蛋白酶、胰蛋白酶质量比1∶1复配水解牛乳清蛋白能够制备低致敏产品,其β-LG抗原性仅为0.798μg/mL,且苦味较低。酶解条件为底物质量浓度15 g/100 mL、加酶量5 000 U/g(50%碱性蛋白酶+50%胰蛋白酶)、酶解温度48℃、酶解pH 8.0、酶解时间2.5 h。     

中性蛋白酶酶解海洋鱼鳞蛋白的工艺条件

如何充分利用水产加工废弃物资源越来越受到重视。文章利用中性蛋白酶酶解海洋鱼鳞蛋白制备鱼鳞蛋白多肽。通过考察温度、时间、酶量、料液比等单一因素对水解鱼鳞蛋白的影响,确定并设计了L9(34)正交实验因素和水平,最终获得了中性蛋白酶酶解鱼鳞蛋白优化工艺条件,即酶量4%(质量分数),温度45℃,时间3h,料液比10%。在此条件下,酶解所得水解度为28.9%。与文献比较,该工艺条件下水解时间大大缩短。该条件所得蛋白肽段的分子量主要分布在1-6KDa范围内。由此可见,该优化条件适合规模化生产,所得蛋白肽可以满足食品、化妆品行业的需求。     

脱脂柞蚕蛹蛋白用复合中性蛋白酶水解制备多肽的工艺条件优化试验

利用蛋白酶对脱脂柞蚕蛹蛋白进行酶解制备具有活性的多肽,可以提高柞蚕蛹蛋白的应用价值。为了建立适合工业化应用的脱脂柞蚕蛹蛋白的酶解工艺条件,首先采用单因素试验考察料液质量浓度、复合中性蛋白酶种类与使用浓度、酶解温度和时间4个因素对脱脂柞蚕蛹蛋白水解度的影响,得出较适合的工艺条件是:料液质量浓度60 g/L,3 g/L复合中性蛋白酶中的风味蛋白酶与蚕蛹专用复配蛋白酶按1∶1质量比混合,酶解温度55℃,酶解时间10 h。进一步采用Box-Behnken设计及响应面分析法对工艺条件进行优化,在复合中性蛋白酶质量浓度4.85 g/L、料液质量浓度41 g/L、酶解温度55℃、酶解时间10.66 h的最佳酶解条件下,脱脂柞蚕蛹蛋白的理论水解度为45.82%,实际水解度为45.75%。利用优化的酶解工艺条件制备柞蚕蛹蛋白活性肽,具有酶解效率高、稳定性好、操作简单、生产成本低的特点。     

大鲵皮明胶水解工艺及其自由基清除活性研究

前期研究提取了大鲵皮明胶,将其酶解后制备生物活性肽,为了进一步拓展其在工业中的应用,试验以木瓜蛋白酶为工具酶,通过单因素试验和正交试验优化确定大鲵皮明胶水解工艺,并考察酶解肽分子质量分布、氨基酸组成和自由基清除活性。结果表明:木瓜蛋白酶对大鲵皮明胶水解最佳工艺为加酶量3 000 U/g、温度55℃、pH值7.5、酶解时间4 h,在此条件下,水解度可达26.79%。大鲵皮明胶肽中甘氨酸、脯氨酸、谷氨酸和丙氨酸含量相对较高,占总氨基酸的49.64%,分子质量分布范围主要集中在500~5 000 u,占总酶解产物的79.89%。大鲵皮明胶肽对DPPH自由基具有一定清除能力,其清除率达到50%,所对应的样品浓度(IC50)为6.99 mg/mL。说明该条件下制备的大鲵皮明胶肽可作为潜在的抗氧化肽。     

蚕蛹不同溶解性蛋白的营养学评价及酶解物对血管紧张素转换酶的抑制活性

分别对缫丝蚕蛹中的水溶性和碱溶性蛋白组分进行营养学评价,为高效开发蚕蛹食品提供依据;通过蚕蛹蛋白酶解产物对血管紧张素转换酶(ACE)的体外抑制活性试验,探讨蚕蛹蛋白作为天然降压药品原料的利用潜力。营养学分析表明:蚕蛹蛋白水溶性和碱溶性组分中的氨基酸种类齐全,且必需氨基酸占总氨基酸的质量分数分别为41.2%和39.2%,明显高于WHO推荐的氨基酸组成模式(>36%);蚕蛹水溶性蛋白有第1～第4限制性氨基酸(依次为亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸和苏氨酸),而蚕蛹碱溶性蛋白仅有第1和第2限制性氨基酸(依次为蛋氨酸+胱氨酸、异亮氨酸),2种溶解性蛋白的生物效价均较低,在开发利用中,应补充限制性氨基酸或与其它蛋白搭配使用,以提高产品的营养价值。体外ACE抑制活性试验表明,蚕蛹的水溶性蛋白和碱溶性蛋白的碱性蛋白酶酶解产物均具有较强的ACE抑制活性,IC50值分别为0.121、0.113 mg/mL,2种蛋白有可能成为降血压肽生产原料。     

家蚕丝素蛋白抗氧化肽的制备及其稳定性研究

利用碱性蛋白酶水解家蚕丝素蛋白制备抗氧化肽,考察水解pH、水解时间、加酶量、底物浓度、水解温度5个因素对水解产物DPPH自由基清除率的影响,在此基础上采用响应面试验优化水解工艺条件,并调查家蚕丝素蛋白抗氧化肽对热、酸、碱和体外肠道消化的稳定性,测定不同分子质量范围的家蚕丝素蛋白水解产物组分的抗氧化活性.结果 表明,碱性蛋白酶水解制备家蚕丝素蛋白抗氧化肽的最优工艺条件为水解pH 8.69、水解时间60 min、加酶量3035 U/g、底物(丝素蛋白)质量浓度26.80 g/L、水解温度53.89℃,在此条件下制备获得的家蚕丝素蛋白抗氧化肽对DPPH自由基的清除率为55.16％.家蚕丝素蛋白抗氧化肽具有良好的热稳定性;在中性环境中抗氧化活性很稳定,但在强酸和强碱环境中抗氧化活性明显降低;经体外模拟胃肠道消化后,对DPPH自由基的清除率比未消化处理对照组提高了9.43百分点.分子质量小于5 kD组分是家蚕丝素蛋白抗氧化肽的主要活性组分.研究结果为家蚕丝素蛋白功能产品的开发提供了试验依据.     

鸭血球短肽的优化制备及其特性研究

本试验旨在筛选水解效率高且脱色效果好的商业蛋白酶,建立血球短肽的优化工艺,比较其在酶解前后营养特性的变化,研究其功能特性与体外抗氧化能力,以研发功能性血球短肽产品,为家禽血液资源高值化的转化利用与深度挖掘提供理论依据与技术借鉴。比较酶种类、酶浓度、温度、p H、水解时间等因素对蛋白酶水解度(DH)、脱色程度、水解物产量的影响,采用正交试验设计优化血球短肽的最佳工艺,对血球短肽进行营养价值、功能特性及抗氧化性能评价。确定酸性蛋白酶为最佳水解酶,其水解鸭血球蛋白制备短肽的最优工艺参数为:酶用量6 000 U/g,温度50℃,p H 3.5,水解时间7.0 h。在此条件下,水解度为(25.10±0.65)%,水解物产量为(60.09±1.77)%。通过高效液相色谱分析水解产物分子质量分布。结果表明,酶解对血球蛋白有明显的降解作用,酶解产物主要以3 ku以下的短肽为主,其中1 ku以下占大部分(62.82%)。血球短肽粉呈乳白色,氨基酸种类齐全,必需氨基酸含量丰富(53.31%),鸭血球蛋白酶解后的溶解性大大提高(60%),且具有良好的乳化稳定性。血球短肽清除自由基能力较强,随血球蛋白浓度的提升,清除1,1-二苯基-2-苦基肼自由基(DPPH·)与超氧阴离子能力随之愈强,还原力也逐渐增加。由此可见,酸性蛋白酶可有效水解鸭血球蛋白获得氨基酸含量丰富、溶解性好且具有抗氧化活性的乳白色血球短肽,可以作为功能性原料应用于食品与饲料中。     

双酶水解对脱脂牛乳致敏性的影响

以水解度、分子质量分布及酶解产物对免疫球蛋白G（immunoglobulin G,IgG）和患者血清IgE结合能力为 指标,采用双酶水解方法研究酶对脱脂牛乳体系主要蛋白致敏性的影响。结果表明：双酶一步水解E/S为3 000 U/g、 碱性蛋白酶与风味蛋白酶配比为3∶1、酶解80 min条件下脱脂牛乳中主要致敏乳蛋白酪蛋白、α-乳白蛋白、β-乳球蛋 白的IgG结合能力分别显著下降74.93%、97.24%、93.46%（P＜0.05）;酶解破坏脱脂牛乳蛋白高级结构,使α-螺 旋、β-转角结构增加,β-折叠结构减少,游离巯基含量显著增加至14.29 μmol/g（P＜0.05）,表面疏水性增强,结 构趋于松散;脱脂牛乳体系中粒子发生聚集,平均粒径显著增加至346.90 nm（P＜0.05）,稳定性降低;酶解产物 对牛乳蛋白过敏患者血清IgE结合能力显著降低23.53%（P＜0.05）,综合致敏性显著下降69.60%（P＜0.05）。因 此双酶水解是降低脱脂牛乳致敏性的有效方法。     

超声波处理对蚕蛹蛋白质理化性质及酶解产物抗氧化活性的影响

通过超声波处理改变蚕蛹蛋白的理化性质,以利于蚕蛹蛋白的酶解及提高酶解产物的抗氧化活性。在30℃±5℃条件下,用功率为406.8 W的超声波对质量浓度0.037 g/m L的蚕蛹蛋白溶液处理31.9 min后,蛋白质分子的巯基含量增加,二硫键含量降低,傅里叶红外光谱中反映无规则卷曲和β-折叠二级结构的吸收峰明显增强,荧光光谱中的荧光激发强度明显增强,表明有更多的疏水性基团暴露于分子表面。抗氧化试验表明,经超声波处理获得的蚕蛹蛋白酶解产物,其DPPH自由基清除能力和Fe~(2+)螯合能力分别比对照组蚕蛹蛋白的酶解产物提高了12.47%和58.11%,并且其还原能力也有提高。研究结果显示,超声波处理改变了蚕蛹蛋白的理化性质,有利于蚕蛹蛋白在酶解过程中释放抗氧化肽。     

米蛋白肽制备工艺研究及产品营养成分分析

本研究以米渣为原料,通过对米渣进行预处理及限制性酶解后,再对酶解液浓缩后喷雾干燥得到米蛋白肽粉,研究其最佳酶解条件及产物性质.结果表明:(1)最佳酶解工艺条件:用酶量为1%,酶解温度为50℃,固液比为1:5,pH值为8,酶解时间3 h;(2)产物米蛋白肽的蛋白质含量为91.5%,分子质量大部分在3000 Da 以下,短肽含量为77.87%,必需氨基酸含量丰富,是一种优质植物蛋白质资源.     

碱性蛋白酶水解黄酒糟制备乳猪液体蛋白饲料研究

为提高黄酒糟可溶性蛋白含量和水解度,试验采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶对黄酒糟蛋白进行适度酶解。结果表明:在相同酶活添加量条件下,经碱性蛋白酶酶解作用后可溶性蛋白含量和水解度最高。通过单因素试验和正交试验获得碱性蛋白酶水解黄酒糟蛋白的最优工艺条件:料液比为1∶6,温度为55℃,加酶量为500 U/g,pH值为9,反应时间为3 h,酶解液可溶性蛋白含量为68.38%。说明黄酒糟蛋白是优良的乳猪液体饲料的蛋白原料来源。     

酶解法制备菜籽多肽的工艺研究

本文以菜籽粕为原料,酸处理将菜籽粕脱毒后,采用碱溶酸沉法提纯菜籽蛋白,再用碱性蛋白酶酶解菜籽蛋白制备菜籽多肽,采用单因素逐级优化试验设计,以酶解液中菜籽多肽的含量为指标优化酶解工艺参数。结果表明:酸处理后的硫甙含量下降了84.32%,碱溶酸沉后,蛋白的提取率为76.25%。单因素逐级优化试验的结果表明:碱性蛋白酶酶解的最适条件为底物浓度4%、加酶量7%(E/S)、温度50℃、p H 8.5、酶解时间120 min,该条件下多肽含量为(35.4±0.11)mg/m L。