牛奶中庆大霉素胶体金试纸条检测方法的研究

采用胶体金免疫层析法检测牛奶中庆大霉素残留。制备得到了庆大霉素半抗原,并与载体蛋白偶联得到免疫原和包被原,用免疫原制备特异性单克隆抗体,建立了一种简单、快速和高通量的检测牛奶中庆大霉素残留量的胶体金免疫层析法。试纸条对牛奶样品的检测限为20μg/L,假阳性率为0,假阴性率为0,重复性较好,牛奶样品可直接检测,检测时间只需5min,适合在基层抽检、乳品企业质控、原料奶站现场大量筛查使用。     

牛奶中雌二醇胶体金试纸条快速检测技术研究

为了建立快速、敏感、特异的雌二醇（E₂）残留免疫检测方法,本研究应用胶体金免疫层析技术,研究制备一种快速检测牛奶中E₂的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,采用物理吸附法将E₂兔多克隆抗体偶联至胶体金,经过优化抗原包被量和多克隆抗体标记量等反应条件组装成检测试纸条,测定检测试纸的灵敏度、特异性、重复性和加速保存等参数,并对E₂类似物交叉反应和牛奶基质干扰反应进行了测定。结果表明,试纸条最优包被抗原浓度为2 mg/mL,抗体浓度为20 μg/mL。采用消线法判定结果,检测时间10 min,PBS缓冲液中E₂检测限为10 μg/L,该方法与雌三醇的交叉反应率为40%,与戊酸雌二醇、苯甲酸雌二醇、雌酮、己烯雌酚、炔雌醚、乙炔雌二醇、壬基酚等类似物均无可见交叉反应,牛奶样品经2倍稀释消除基质干扰直接用于检测,该方法在牛奶样品中的判定值为20 μg/L。本研究建立的E₂胶体金试纸条使用简单方便,适合现场快速检测牛奶中E₂残留。     

超高效液相色谱-串联质谱法检测牛奶中7种氨基糖苷类药物残留

应用超高效液相色谱-串联质谱技术,建立了牛奶中7种氨基糖苷类药物(链霉素、双氢链霉素、庆大霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素、安普霉素、大观霉素)的检测方法。样品经乙酸铵缓冲液提取,固相萃取柱净化,CORTECS HILIC为分离色谱柱,采用甲酸铵溶液作为流动相进行梯度洗脱,通过多反应监测模式进行测定。在0.1~5μg/m L的范围内线性关系良好,相关系数均大于0.996。在20、50、200μg/kg添加水平下,平均回收率为80%~117.5%,相对标准偏差均小于15%。检测限为10μg/kg,定量限为20μg/kg,该方法准确、简单、快速。     

牛奶中庆大霉素半定量胶体金试纸条的研制

先将庆大霉素与载体蛋白偶联形成完全抗原,再与庆大霉素单克隆抗体反应制备试剂条。通过抗原抗体之间的免疫反应,采用胶体金检测方法,将抗原按不同浓度喷制两条检测线,使牛奶中庆大霉素检测灵敏度分别为20μg/kg和100μg/kg,该检测限满足我国及欧盟对庆大霉素检测的要求,并且能够实现牛奶样品中庆大霉素现场快速检测。     

亲水作用色谱-高分辨质谱测定生鲜牛乳中7种氨基糖苷类药物残留

建立了生鲜牛乳中链霉素、双氢链霉素、庆大霉素、妥布霉素、卡那霉素、阿米卡星和安普霉素共7种氨基糖苷类抗生素残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法。样品经100mL/L三氯乙酸-乙腈提取和WCX固相萃取柱净化后,采用亲水作用色谱分离,四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱检测。对样品前处理条件、液相色谱流动相及质谱条件进行了优化。结果表明,7种氨基糖苷类抗生素在20μg/L~500μg/L范围内线性关系良好,生鲜牛乳中的加标回收率为88.7%~111.2%,相对标准偏差为6.3%~13.1%,该方法灵敏、准确,可用于生鲜牛乳中多种氨基糖苷类抗生素残留的同时检测。     

猪瘟快速诊断金标试纸条的研制及应用

运用胶体金免疫层析技术,建立一种操作简单、特异性好、灵敏度高、适合临床诊断的检测猪瘟病毒的方法。通过采用柠檬酸三钠还原氯金酸制备胶体金,选择15nm胶体金标记兔抗猪瘟病毒抗体,组装免疫层析试纸条。用试纸条对猪瘟可疑病料进行检测,结果显示,用试纸条检测猪瘟病毒,15min左右即可显示结果,并与荧光抗体检测方法加以比较,结果表明用此种方法可以检测猪瘟病。     

胶体金试纸条法和液相色谱-串联质谱法检测牛奶中四环素类药物残留比较

采用胶体金试纸条与液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）两种方法检测牛奶中残留的四环素类药物。结果表明：胶体金试纸条的检测限为四环素40μg/L、强力霉素40μg/L、金霉素40μg/L、土霉素80μg/L;LC-MS/MS法在牛奶中四环素、强力霉素、金霉素、土霉素的检测限为50μg/L。采用两种方法对实际样品检测,检测结果一致。与液相色谱-串联质谱法相比,胶体金试纸条具有操作简便、快速、直观的特点,可作为筛选法对样品进行定性筛查,LC-MS/MS法进行阳性样品的确证和精确定量。     

猪链球菌重组GDH蛋白间接ELISA检测方法的建立

为建立一种简便快速的胶体金免疫层析方法（GICA）以用于检测犬抗狂犬病毒抗体,本研究运用间接反应一步法原理．采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒用以标记抗犬IgG抗体形成金一抗犬IgG抗体复合物,制成金标结合垫,加上包被有狂犬病毒糖蛋白的硝酸纤维膜,即制成胶体金免疫层析试纸条。样品中狂犬病毒抗体与金标记抗体结合后沿硝酸纤维素膜移动,     

猪瘟快速诊断金标试纸条的研制及应用

运用胶体金免疫层析技术,建立一种操作简单、特异性好、灵敏度高,适合临床诊断的检测猪瘟病毒的方法。本文通过采用柠檬酸三钠还原氯金酸制备胶体金,选择15 nm胶体金标记兔抗猪瘟病毒抗体,组装免疫层析试纸条。用试纸条对猪瘟可疑病料进行检测,结果显示,用试纸条检测猪瘟病毒,15min左右即可显示结果,并与荧光抗体检测方法加以比较,结果表明用此种方法可以检测猪瘟病,并且可以进行推广使用。     

2种不同检测模式下的林可霉素胶体金试纸条的比较研究

本试验旨在研究检测牛奶中林可霉素（lincomycin, LIN）胶体金免疫层析试纸条。根据直接竞争抑制和间接竞争抑制2种模式,通过对金标包被原（抗体）量、pH、包被抗体（抗原）浓度、牛奶前处理等试验的优化,制备出2种满足实际检测需要的胶体金试纸条;二者的检测限分别为30和10 ppb。在实际检测中,间接法在灵敏度、稳定性和检测时间等方面都优于直接法。     

猪繁殖与呼吸综合征胶体金抗体检测技术的建立和初步应用

用胶体金标记纯化后的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因工程表达抗原,建立一种以微孔滤膜为固相载体,以红色胶体金为标记物的检测PRRSV抗体的胶体金免疫层析法(GICA).特异性交叉试验证明GICA检测PRRSV抗体有较高的特异性.与其他方法对比检测证实了其敏感性.生产了一批免疫胶体金试纸条,检测36份临床样本,其中30份经免疫胶体金试纸条及ELISA、免疫荧光检测均为阳性.猪繁殖与呼吸综合征免疫胶体金抗体检测技术的建立为检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体提供了一种快速简便的方法.     

酶联免疫吸附法测定牛奶中庆大霉素的残留量

本文采用ELISA检测试剂盒,测定牛奶中庆大霉素的残留量,牛奶样本经离心后,取上清液,采用间接竞争ELISA方法,在酶标板微孔条上预包被偶联抗原,样本中残留的庆大霉素将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗庆大霉素抗体,加入酶标二抗后,用TMB底物显色,结果表明样本吸光值与残留物庆大霉素的含量成负相关。     

胶体金免疫层析法测定牛奶中β-内酰胺类抗生素和三聚氰胺残留

应用胶体金免疫层析法对牛奶中的β-内酰胺类抗生素和三聚氰胺残留进行检测,考察该法的灵敏度、假阳性率、假阴性率、特异性及准确性。结果表明：用胶体金免疫层析法测定牛奶中的β-内酰胺类抗生素和三聚氰胺,检测限分别为青霉素G 2μg/L、氨苄青霉素3μg/L、阿莫西林4μg/L、苯唑青霉素6μg/L、邻氯青霉素6μg/L、双氯青霉素6μg/L、萘夫西林20μg/L、头孢喹肟20μg/L、头孢哌酮40μg/L、头孢曲松50μg/L、头孢噻呋90μg/L、头孢洛宁10μg/L、三聚氰胺50μg/L,假阳性率不大于5%,假阴性率为0;方法特异性较好,与牛奶中常见的其他抗生素无交叉反应;结果准确可靠,对实际样本的检测结果与液相色谱-质谱/质谱法基本一致。该方法简便、快速、准确、稳定,可作为牛奶中β-内酰胺类抗生素和三聚氰胺残留现场快速检测的一种有效手段。     

胶体金免疫层析试纸条在生物毒素检测领域的研究进展

胶体金免疫层析试纸条是一种常用的检测方法,广泛应用于疾病诊断、生物毒素检测等领域。该技术基于胶体金标记的特异性抗原（抗体）与待检样品中的目标分子相互作用,在试纸条上形成可见的测试线或信号变化。其流程包括样品预处理、标记抗体制备、试纸条组装步骤。胶体金免疫层析试纸条可以用于快速检测食品中的毒素残留、环境中的有害物质以及临床诊断中的相关指标。该技术具有无创、快速、灵敏和准确的特点,在临床应急检测和大规模筛查中能快速获得结果。文章总结了胶体金免疫层析试纸条技术及其在生物毒素检测中的研究进展,并分析了当前胶体金免疫层析试纸条技术的优缺点,展望了该技术在生物毒素检测领域的未来发展方向。     

布鲁氏菌BP26抗原胶体金试剂盒的研制及功能初试

目的：应用胶体金免疫层析技术建立一种快速检测布鲁氏菌抗体的方法,组装试剂盒并进行初步验证。方法：采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,标记重组布鲁氏菌BP26抗原和兔抗BP26多抗血清包被在硝酸纤维素膜上分别作为检测线和质控线,确定标记的最佳pH和最佳标记抗原量,检测试剂盒的灵敏度和重复性。结果：该试剂盒最佳标记pH值为6.7,最佳标记抗原量为20 μl,试剂盒的灵敏度和重复性较好。结论：该试剂盒具有较好的灵敏度和重复性,整个检测过程可在15 min内完成,能够快速检测样品血清,适用于现场快速检测。     

蜂蜜中链霉素多种检测方法比较

采用胶体金免疫层析法、酶联免疫法与液相色谱-串联质谱法三种常用分析方法对蜂蜜中残留的链霉素进行检测,考察了三种方法的符合率。结果表明,胶体金免疫层析法具有操作简便、快速、直观的特点,酶联免疫法灵敏度高适合作为快速筛选方法,液相色谱-串联质谱法可进行阳性样品的确证和精确定量。     

大观霉素间接竞争ELISA的建立

本研究的目的是建立大观霉素的间接竞争性ELISA(icELISA),用于动物源性食品的检测。在优化的条件下,建立了大观霉素icELISA的标准曲线,半抑制浓度IC50=1.78ng/mL。多克隆抗体对大观霉素的特异性较强,与其他氨基糖苷类化合物有微小的交叉。分别对20份空白的牛奶、猪肉、鸡肉进行检测,确定这些样本中大观霉素的检测限分别是4.8、9.3、10.0μg/kg。在样本中添加不同浓度的大观霉素,添加回收率的范围为77.1%~116.0%,变异系数为4.6%~9.7%;ELISA和GC/MS两种方法分析结果无显著性差异(P0.05)。结果表明,本研究成功建立了大观霉素的icELISA,用于检测牛奶、猪肉、鸡肉中大观霉素,准确度和精密度均满足兽药残留检测的要求。     

用胶体金免疫电镜技术检测新城疫病毒

本研究应用柠檬酸三钠还原法制备了20nm的胶体金颗粒标记NDV抗体,并且用直接电镜、免疫电镜和胶体金免疫电镜技术比较观察了新城疫病毒。证明胶体金免疫电镜技术作为检测NDV的检测方法具有简单、快速、准确和无污染等优点。     

用胶体金免疫电镜技术检测新城疫病毒

本研究应用柠檬酸三钠还原法制备了20nm的胶体金颗粒标记NDV抗体，并且用直接电镜、免疫电镜和胶体金免疫电镜技术比较观察了新城疫病毒。证明胶体金免疫电镜技术作为检测NDV的检测方法具有简单、快速、准确和无污染等优点。     

小鼠肝炎病毒金标快速检测方法的建立

本试验旨在探讨一种能够快速、简便及特异检测MHV病毒的金标检测方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗小鼠肝炎病毒(MHV)抗体,选择优化层析条件,建立双抗体夹心模式的免疫层析法试纸条对MHV进行检测。20 nm左右的胶体金颗粒、5.05 μg为最低稳定抗体量(稳定0.5 mL胶体金)、M135层析材料、3%BSA是最佳封闭液。640 μg/mL抗体蛋白为最适检测线包被浓度,而800 μg/mL抗体蛋白为质控线最适包被浓度。此试纸条能10 min快速特异地检测出MHV抗原,阳性时检测线和质控线均显示红色,阴性时则只有质控线显示红色。结果表明,胶体金免疫层析方法能快速、特异、稳定地检测MHV抗原。