HSP27在牦牛不同组织器官中的表达差异分析

本试验旨在探究正常生理条件下牦牛热休克蛋白27基因（HSP27）在雄性牦牛心、肝、脾、肺和肾5种脏器中的表达差异。试验采用普通聚合酶链式反应（PCR）和实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-q PCR）检测HSP27基因在雄性牦牛组织器官样本中的表达情况。结果表明,HSP27基因在雄性牦牛5种脏器样本中均有表达,并存在表达差异,在肾脏中的表达量占试验总表达量的比例最低,在脾脏和肺脏中的表达量占试验总表达量的比例较低（分别为肾脏表达量的4倍和7倍）,在肝脏中的表达量占试验总表达量的比例较高（为肾脏表达量的95倍）,在心脏中的表达量占试验总表达量的比例最高（为肾脏表达量的96倍）。通过对HSP27基因在牦牛不同组织器官中的表达差异分析,推测其表达差异性可能与牦牛生活环境有密不可分的关系,为进一步探索牦牛在高原低氧高寒环境下机体内HSP27基因在其生长发育过程中发挥的作用提供了理论依据。     

家兔组织器官中Nramp1基因表达差异研究

本研究旨在检测家兔Nramp1基因mRNA在不同组织中的表达水平,为进一步阐明家兔Nramp1基因的生物学功能提供有用的方法和信息。根据GenBank中家兔Nramp1基因序列设计引物,采用基于SYBR GreenⅠ的Real-time PCR对家兔心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、盲肠、回肠、淋巴结、肌肉、脂肪和大脑中Nramp1表达水平进行了定量分析。结果表明,Nramp1基因在肺脏组织中表达量最高,胃组织中最低,而在肌肉和盲肠组织中不表达。研究结果说明家兔Nramp1表达具有一定组织器官特异性。     

不同海拔牦牛骨骼肌肌纤维类型和MYHC基因表达的比较

为了阐明高原低氧对牦牛骨骼肌肌纤维类型的影响,本试验从青海省循化县(海拔2 200 m)、青海省海晏县(海拔3 200 m)、青海省祁连县(海拔3 900 m)选择临床健康的牦牛各3头,采用免疫组织化学方法(免疫荧光同源双标法)观测其骨骼肌中快肌、慢肌含量及比例和实时荧光定量PCR检测不同海拔牦牛骨骼肌肌球蛋白重链(myosin heavy chain, MYHC)各亚型mRNA的变化。结果表明,牦牛骨骼肌中快肌数量显著高于慢肌且随着海拔的升高,快肌数量比和面积比逐渐增大,而慢肌数量比和面积比逐渐减小。牦牛骨骼肌中MYHC各亚型间,MYH2基因相对表达量最高,其次是MYH1,且与MYH7相比差异显著(P<0.05);不同海拔牦牛骨骼肌MYHC相互比较,MYH1和MYH4基因相对表达量随海拔的升高而增加,差异显著(P<0.05)。快、慢肌的差异表达提示在牦牛体快肌纤维多于慢肌纤维;MYHC基因表达差异说明牦牛骨骼肌中调控快肌纤维表达的基因mRNA转录水平比调控慢肌纤维表达的基因高。牦牛骨骼肌表现出这种趋势可能与其所处的高原低氧环境有关,随海拔增高,环境中的氧含量不断减少,肌纤...     

牦牛FHL2基因的克隆、组织表达与蛋白定位分析

旨在获得牦牛FHL2基因序列,阐明该基因序列、蛋白质结构与性质、mRNA的组织表达模式、在雌性生殖器官及颗粒细胞的蛋白表达特性。本研究以5头健康空怀成年母牦牛的心、肝、脾、肺、肾、卵巢、子宫、输卵管组织及5头妊娠2个月左右母牦牛的子宫、输卵管和卵巢为研究材料,利用逆转录PCR(RT-PCR)技术克隆FHL2基因,并使用在线分子生物学软件分析其生物信息学特性;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分析FHL2基因的组织表达特性;应用免疫组化(IHC)和免疫荧光(IF)技术检测FHL2蛋白在雌性生殖器官的分布和颗粒细胞上的亚细胞定位。结果发现,FHL2基因CDS区全长840 bp (ON456866),编码279个氨基酸,FHL2蛋白属于弱碱性亲水不稳定蛋白,没有跨膜结构。不同物种的FHL2氨基酸序列比对和进化树分析表明,FHL2基因编码区在物种进化中比较保守。RT-qPCR结果显示,FHL2基因在检测的组织都有表达,在心的表达量极显著高于其他检测组织(P<0.01);在肺、卵巢、输卵管和子宫中的表达量极显著高于肝、脾和肾(P<0.01)。FHL2基因在妊娠期子宫中的表达...     

中甸牦牛HIF-1α基因表达差异分析

[目的]以云南省迪庆州香格里拉市高山放牧和昆明市东郊小哨示范牧场圈养育肥1.5年以上的成年中甸牦牛为研究对象,比较两种饲养条件下组织器官中HIF-1α基因mRNA表达差异。[方法]采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测HIF-1α基因在不同饲养条件下中甸牦牛不同组织中的表达水平。[结果]结果表明:中甸牦牛不同器官组织HIF-1α基因的相对表达量差异极显著(P0.01);在不同饲养条件下相对表达量差异显著,高山放牧显著高于异地圈养育肥(P0.05);在高山放牧的中甸牦牛肝脏中相对表达量显著高于圈养育肥的(P0.05)。[结论]中甸牦牛不同组织器官中HIF-1α基因广泛表达且具有组织特异性,在不同海拔饲养的相对表达量具有显著差异,为牦牛的耐低氧机制研究提供了理论依据。     

哈萨克马和焉耆马不同组织中IGFBP-5基因表达差异研究

试验旨在探求胰岛素样生长因子结合蛋白-5（insulin-like growth factor binding protein-5,IGFBP-5）基因在哈萨克马和焉耆马不同组织部位中的mRNA表达规律。采用实时荧光定量PCR技术检测在哈萨克马和焉耆马心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小肠、大肠、盲肠、肋间肌、背最长肌、臂肌和臀肌等不同组织中IGFBP-5基因mRNA表达量,同时比较该基因在哈萨克马和焉耆马相同组织中的表达差异。结果表明,哈萨克马和焉耆马表达量最高的均为背最长肌,其次是臂肌,并显著高于心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小肠、大肠、盲肠等内脏组织表达量（P<0.05）,大肠中的表达量最低;焉耆马的肾脏、小肠、大肠、盲肠、背最长肌和臂肌中表达量高于哈萨克马相同部位的表达量,其中焉耆马背最长肌和大肠中的表达量极显著高于哈萨克马的相同部位（P<0.01）,小肠和盲肠中的表达量显著高于哈萨克马的相同部位（P<0.05）。本试验为深入研究IGFBP-5基因的生物学功能,以及对中国马生产性能的遗传改良提供理论依据。     

牦牛PLIN2基因的克隆及其在卵巢不同发情阶段的表达

试验旨在研究牦牛PLIN2基因的序列特征和表达特性,并分析其表达与不同发情时期的卵巢的相关性。根据GenBank中已知的普通牛序列,设计克隆引物,经RT-PCR扩增得到牦牛PLIN2基因序列。RT-PCR检测PLIN2基因在各个组织中的表达量,实时荧光定量PCR分析卵巢不同发情时期的表达量。结果表明,牦牛PLIN2基因的编码区长为1 353 bp,共编码450个氨基酸,为无跨膜结构的非分泌蛋白。与GenBank中已知的普通牛序列同源性达到99.4%,表明PLIN2基因在进化过程中相当保守。在牦牛的各个组织中PLIN2分布广泛,但不同组织中的表达有差异,卵巢、乳腺、胃和肾脏中相对较多,而肺脏中几乎没有表达。实时荧光定量PCR结果显示,在卵巢的不同发情时期PLIN2都有表达,且在黄体期的表达量最高,表明PLIN2基因在牦牛发情周期中起着不可忽视的作用。     

CAPN3基因在草原红牛不同组织中的表达差异

钙激活中性蛋白酶(CAPN3)参与哺乳动物体内多种重要的生理生化过程,但是有关它的确切生理功能和作用机制研究较少.本研究采用实时荧光定量PCR技术检测CAPN3基因在草原红牛多种组织中的表达水平差异情况.试验结果表明,CAPN3基因在所检测草原红牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、十二指肠、瘤胃和背最长肌8种组织中均有表达,且在不同组织中的表达水平有所不同.草原红牛脾脏中的CAPN3基因表达量显著高于其他组织,十二指肠和瘤胃中的CAPN3基因表达量显著高于心脏、肝脏、肺脏、肾脏和背最长肌.本试验为肉牛肉质性状的改良提供了分子遗传学依据,并为深入研究草原红牛体内CAPN3基因的生物学作用及作用机制奠定了基础.     

牦牛跨膜附睾蛋白1基因的克隆及其在卵丘卵母细胞复合体中的表达分析

试验旨在分析牦牛跨膜附睾蛋白1（transmembrane epididymal protein 1,TEDDM1）基因的分子特征及其在卵泡发育中的时序表达特性。研究分别收集发情期牦牛大卵泡（φ≥8 mm）、中卵泡（φ=5~7 mm）和小卵泡（φ≤3 mm）中的卵丘-卵母细胞复合体（COCs）;提取总RNA并反转录,对TEDDM1基因CDS区全序列进行克隆测序,用生物信息学软件分析其编码蛋白分子特征;以牛GAPDH基因为内参,采用实时荧光定量PCR技术分析TEDDM1基因在卵泡发育不同时期的表达水平。结果表明,牦牛TEDDM1基因CDS区全长903 bp,共编码300个氨基酸,与野牦牛、牛、野牛、绵羊和水牛氨基酸序列有极高的相似性,在进化中较为保守;牦牛TEDDM1蛋白为非分泌型不稳定疏水蛋白,共存在7个螺旋结构,整条肽链7次横跨胞膜,属于典型的G蛋白偶联受体;其潜在的磷酸化位点共21个,其中酪氨酸、苏氨酸和丝氨酸磷酸化位点分别为1、3和17个,仅存在1个N-糖基化位点,无O-糖基化位点;存在未知功能结构域蛋白家族（domains of unknow function protein families,DUFs）716结构域,且该结构域涵盖多个跨膜区域;实时荧光定量PCR检测结果发现,中卵泡中TEDDM1基因表达水平显著高于大卵泡和小卵泡（P<0.05）,而大卵泡与小卵泡的表达水平差异不显著（P>0.05）。本研究分析了牦牛TEDDM1基因序列及其在牦牛COCs中的表达特性,为进一步揭示该基因在牦牛卵泡发育过程中的调控作用奠定了理论基础。     

Cloning of PLIN2 Gene of Yak and Its Expression in Ovary during Different Estrus Periods

The purpose of this study was to research the sequence characteristics and the expression of PLIN2 gene, and to analyze the relationship between the expression and the ovaries in different estrus periods. According to the gene sequence of bovine in GenBank, the primer was designed. The PLIN2 gene of yak was cloned by RT-PCR, and the expression quantity of the PLIN2 gene in different tissues of yak was detected by the semiquantitative RT-PCR. Meanwhile,the differential expression of the PLIN2 gene in different ovarian estrus periods of yak was detected by quantitative Real-time PCR. The results showed that the length of the PLIN2 gene was 1 353 bp in CDS, encoding 450 amino acids. The PLIN2 protein was predicted to be non-seretory and lacking cross-membrane domain. It was 99.4% homology identity to that of corresponding cDNA from bovine, which showed that the PLIN2 gene was quite conservative in the process of evolution. The expession profile of PLIN2 was wide in yak tissues, but there were some differences in different tissues. The expression quality was higher in kidney, breast and ovary, while it was almost nothing in lung. The result of quantitative Real-time PCR indicated that yak PLIN2 gene was expressed in different ovarian estrus periods, and the highest expression during the luteal phase, which indicated the PLIN2 gene played an essential role in yak estrous cycles.     

马身猪和大白猪不同组织DECR1基因的表达

旨在研究DECR1基因在猪不同组织和品种中mRNA和蛋白水平的表达规律,探讨该基因与脂肪代谢的关系。以山西马身猪与大白猪为试验材料,提取肝脏、心脏、肾脏、脾脏、肺脏、胃、小肠、皮下脂肪和背最长肌组织的总RNA和总蛋白,应用实时荧光定量PCR技术检测DECR1基因在2个品种各组织中mRNA的相对表达量,采用Western blot技术对各组织中DECR1蛋白进行半定量分析。实时荧光定量PCR结果显示:DECR1基因在各组织中均有表达,组织之间的表达量存在极显著差异(P<0.01),DECR1基因在肝脏、皮下脂肪与心脏中为高丰度表达;在不同品种的皮下脂肪组织中,大白猪DECR1的mRNA表达极显著高于马身猪(P<0.01)。Western blot检测结果显示:DECR1在各组织中均有表达,不同组织的表达量存在极显著差异(P<0.01),在皮下脂肪、肝脏与小肠中高表达;不同品种的皮下脂肪组织中,大白猪DECR1蛋白的表达显著高于马身猪(P<0.05)。猪DECR1基因在不同组织的表达差异可能与脂肪代谢和脂肪沉积有关。     

如皋鸡不同时期肌肉组织生长相关基因的表达谱分析

旨在了解如皋鸡不同时期肌肉生长发育机制。本研究利用基因芯片技术,分析在不同生长阶段下(2～12周龄)如皋鸡肌肉组织基因的表达情况。获得了13 379个基因的差异表达动态图谱。在不同生长阶段下肌肉组织生长基因的表达发生变化,与2周龄相比,4和12周龄下调表达的基因数量多于上调表达的基因数量,6、8和10周龄下调表达的基因数量少于上调表达的基因数量。同时对杂交数据进行多种聚类分析。利用实时荧光定量PCR验证4个基因的差异表达,其结果和芯片杂交分析的结果基本一致。初步建立了不同时期肌肉生长应答基因的动态表达谱,比较全面地获得了肌肉生长应答基因,初步揭示了如皋鸡不同时期肌肉生长发育机制。     

山羊IGFBP-1基因的克隆及其mRNA丰度在多种组织中的发育性变化

本研究旨在探讨胰岛素样生长因子结合蛋白1(Insulin-like growth factor-binding protein 1,IGFBP-1)基因在山羊出生后不同组织的发育性表达模式.在出生后0、15、30、60、90和120 d共屠宰36只南江黄羊羔羊(公、母羔羊各18只),取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、背最长肌、半膜肌、臂三头肌和股二头肌样品以抽提RNA,进行克隆及荧光定量PCR分析.山羊IGFBP-1基因的ORF(Open reading frame)长792 bp,共编码263个氨基酸,其核苷酸和氨基酸序列相似性在反刍动物(牛、绵羊)之间远大于其它物种.羔羊肝脏IGFBP-1 mRNA表达量最高(P＜0.01);肺脏、脾脏、心脏表达水平中等;肌肉中最低且在4种肌肉间表达差异不显著(P＞0.05).出生后尤其是60 d内羔羊IGFBP-1mRNA丰度变化很大,且明显呈现持续下降(肝脏)、先升后降(心脏)以及下降-上升-下降(脾脏、肺脏和肌肉)3种模式的变化.结果提示,IGFBP-1基因CDS区在物种间保守性较强,肝脏是山羊合成IGFBP-1 mRNA的主要部位,IGFBP-1基因在出生后羔羊的早期生长中发挥着重要的作用且其mRNA发育性表达模式具有组织器官特异性.     

70周龄长顺绿壳蛋鸡HO-1基因在不同组织中表达差异研究

为研究HO-1基因在70周龄长顺绿壳蛋鸡不同组织中的表达差异,选取70周龄长顺绿壳蛋鸡9只（每种基因型3只）,采集每只鸡的大脑、肝脏、肾脏、卵巢、输卵管和子宫组织,提取其总RNA进行反转录,利用实时荧光定量 PCR方法检测样品中HO-1基因的表达水平,比较同一组织不同基因型及同一基因型不同组织间HO-1基因mRNA 的表达差异。结果表明,在同一组织不同基因型及同一基因型不同组织间HO-1基因的表达存在差异;其中HO-1基因在肝脏中表达量最高,且3种基因型间肝脏表达量存在极显著差异（P< 0.01）;白壳蛋鸡子宫中HO-1基因表达量极显著高于其他两种（P< 0.01）,纯合绿壳蛋鸡与杂合绿壳蛋鸡无显著差异（P> 0.05）。     

三穗麻鸭Cofilin2基因序列分析及其组织表达研究

为探究三穗麻鸭丝切蛋白2（Cofilin2）基因特征及其在鸭组织中的表达规律,试验根据GenBank中鸡Cofilin2基因序列设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增获得目的基因,利用生物信息学软件分析三穗麻鸭Cofilin2基因特征,实时荧光定量PCR方法检测Cofilin2基因在三穗麻鸭不同组织中的表达情况。结果显示,三穗麻鸭Cofilin2基因编码区大小为498 bp,可编码166个氨基酸;三穗麻鸭Cofilin2基因序列与鸡、猕猴、牛、小鼠、安大略鲑、人和猪相应序列的同源性分别为94.4%、91.6%、91.6%、87.6%、77.7%、70.5%和69.5%;系统进化树显示,Cofilin2基因在不同物种进化过程中高度保守;Cofilin2基因编码蛋白的二级结构由α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲组成,三级结构呈弯曲螺旋结构;实时荧光定量PCR检测显示,三穗麻鸭Cofilin2基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑、胸腺、十二指肠、腿肌和法氏囊等组织器官中均有不同程度表达,其中心脏中表达量最高,法氏囊中表达量最低。本试验结果为三穗麻鸭抗病分子机理研究奠定了基础。