小檗碱和miRNA-18b对猪IVF胚胎HIF-1α的调控作用

【目的】探明miRNA-18b和HIF-1α之间的关系。【方法】以NCSU-23胚胎培养液为对照组,Ber加入NCSU-23培养液中为Ber组,在对照组的原核胚细胞质中显微注射10pLmiRNA-18b过表达剂(agomir)、低表达剂(antagomir)和阴性片段分别为miRNA-18bagomir组、miRNA-18bantagomir组和阴性片段对照(NC)组。观察IVF胚胎2-、4-、8-细胞和桑椹胚、囊胚发育率;通过qRT-PCR、Western-blot和双荧光素酶报告基因的方法验证miRNA-18b的靶基因HIF-1α。【结果】Ber组和miRNA-18bantagomir组,可极显著提高猪IVF囊胚发育率(P0.01)。Ber组和miRNA-18bantagomir组能上调猪IVF胚胎中HIF-1α表达水平,miRNA-18b agomir组能下调HIF-1α表达水平;HIF-1α的表达水平随着胚胎发育呈上升趋势,4-～8-细胞阶段更为明显;在HIF-1α的3’UTR wt、mut重建载体转染产生的双萤光素酶活性上,miRNA-18b与NC组均无差异(P0.05)。【结论】Ber和抑制miRNA-18b的表达能够促进4-、8-细胞和桑椹胚时期HIF-1α的表达从而促进猪IVF胚胎体外发育,其中4-～8-细胞时期作用更为明显。     

川芎嗪和小檗碱对猪卵母细胞体外成熟效果的影响

以mTCM-199添加抗生素为对照组,以分别添加0．5μg／mL川穹嗪（1igustrazine,Lig）和0．1μg／mL小檗碱（berberine,BR）为试验组,初步探讨川芎嗪、小檗碱对猪卵母细胞体外成熟效果的影响,以期提高猪卵母细胞体外成熟率。试验结果表明：以卵丘扩散和第一极体排出率分别作为猪卵母细胞体外成熟的判断标准,Lig组和BR组均显著高于对照组（P〈0．05）,Lig组和BR组间无显著差异（P〉O．05）。结论：川芎嗪和小檗碱对猪卵母细胞体外成熟具有一定的促进作用。     

血管内皮生长因子对绵羊卵母细胞体外受精及胚胎发育的影响

为了研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对绵羊卵母细胞体外成熟和成熟后卵母细胞体外受精卵的早期发育的影响,在细胞培养过程中分别在体外成熟培养液、体外受精液及体外胚胎发育液中添加5、10 ng/mL VEGF.结果显示,添加VEGF组卵母细胞的体外成熟率由对照组的80.68%提高到了86.09%和85.22%(P<0.01),成熟卵母细胞的卵裂率由69.38%提高到了75.18%和73.48%(P>0.05),5 ng/mL添加组的桑葚胚率(45.45%)和囊胚率(30.06%)极显著(P<0.01)高于对照组(37.61%;23.65%);而10 ng/mL添加组的桑葚胚率(40.25%)和囊胚率(27.80%)低于5 ng/mL添加组的,高于对照组,但差异不显著.据此认为5 ng/mL VEGF的添加量比10 ng/mL VEGF添加量能更有效的促进绵羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎早期发育.     

Western印迹法检测IGF-Ⅰ及其受体蛋白在牙鲆仔鱼变态中的表达

利用Western印迹法对胰岛素样生长因子-Ⅰ(insulin-like growth factor-1,IGF-Ⅰ)及其受体(IGF-Ⅰreceptor,IGF-ⅠR)蛋白在牙鲆仔鱼发育变态阶段的表达进行分析。结果显示IGF-Ⅰ蛋白在仔鱼变态前(17 d)和变态起始阶段(21 d)免疫活性较强,而在变态期间降低;IGF-ⅠR蛋白在变态起始阶段的表达与IGF-Ⅰ类似,但在变态期间与IGF-Ⅰ相反,具有相对丰富的表达。这些结果为进一步研究IGF-Ⅰ及其受体在牙鲆变态中的生理意义奠定了基础。     

胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)研究进展

胰岛素样生长因子Ⅰ(Insulin-like growth factor-Ⅰ,简称IGF-Ⅰ)是与胰岛素结构相似并具有细胞分化和增殖功能的多肽,其生物学活性受IGF-Ⅰ受体及胰岛素结合蛋白的调节.IGF-Ⅰ具有调控细胞凋亡、影响蛋白质的合成、调节骨骼肌生长和修复、保护神经系统等生物学功能.     

小檗碱对猪卵巢卵母细胞体外成熟及其脂滴含量和分布的影响

[目的]探明不同形态的猪卵巢中卵母细胞体外成熟效果与脂滴的相关性,以及小檗碱对其的影响.[方法]将卵泡型卵巢GV期和黄体型卵巢GV期卵母细胞分别用添加小檗碱的成熟液体外成熟,观察体外成熟效果;用尼罗红染色的方法测定成熟前后的卵母细胞的脂滴含量,并观察成熟后各组卵母细胞脂滴的分布.[结果]卵泡型卵母细胞的颗粒细胞扩散率和第一极体排出率均显著高于黄体型卵母细胞(P＜0.05),小檗碱(Berberine,Ber)组卵母细胞的颗粒细胞扩散率显著高于对照组(P＜0.05),第一极体排出率极显著高于对照组(P＜0.01);体外成熟后,对照组卵母细胞中脂滴含量显著降低(P＜0.05),小檗碱组极显著降低(P＜0.01),且极显著低于对照组(P＜0.01).黄体型卵母细胞的脂滴含量则显著低于卵泡型(P＜0.05).猪卵母细胞成熟后的脂滴分布为分散型、外围型和不规则型,卵泡型卵母细胞脂滴主要呈分散分布,黄体型卵母细胞脂滴主要呈外围分布,并且黄体型卵母细胞脂滴呈不规则分布多于卵泡型.[结论]小檗碱能明显促进猪卵母细胞体外成熟,且卵泡型成熟效果显著好于黄体型;体外成熟后,卵母细胞脂滴逐渐减少,小檗碱组脂滴含量极显著减少,且黄体型卵母细胞脂滴含量明显减少;猪卵母细胞内脂滴的分布与卵巢所处的时期有关.     

中草药与金霉素对生长猪的影响及其机理初探

75～80日龄体重相近仔猪150头,随机均分3组,每组5个重复,每个重复10只样本,研究中草药饲料添加剂与金霉素影响生长猪生产性能的免疫内分泌机制。以中草药添加剂（1％）和盒霉素（25mg／kg）分别添加饲喂组Ⅰ,Ⅱ猪群,组Ⅲ为对照,各组仔猪注射猪瘟疫苗2头份／头。分别于开始用药当天（d0）、35d（d35）时逐一称重,并各组前腔静脉采血10头,统计各组猪群生产性能,测定血清猪瘟抗体水平和胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF—Ⅰ）、胰岛素（Insulin）和三碘甲腺原氨酸（T3）和甲状腺素（T4）等与生长有关的内分泌激素。结果显示中草药组仔猪在净增重、日增重和增重率及料肉比方面都显著优于金霉素组和对照组猪群,而后2组间差异不显著。试验结束时,中药组猪群血清猪瘟抗体水平、IGF—Ⅰ、Insulin和T4水平显著高于金霉素组和对照组仔猪。表明该中草药添加刑可通过增强仔猪免疫功能．并显著提高仔猪血清IGF—Ⅰ和胰岛素的水平、减缓T4的下降,从而提高仔猪的生产性能,表现出1种整体调节效应。     

β—转换生长因子对牛体外受精卵体外发育的影响

本研究主要检测ＴＧＦ－β对牛早期胚胎体外发育和移植后的成活率的影响，在试验１和试验２，添加０．３－７．０ｎｇ／ｍＬ的ＴＧＦ－β至无论是复杂培养液还是各成分已知的简单培养液中，囊胚中内细胞团细胞都不同程度地增长，比对照组的囊胚多０．５－１．０倍；此外在含有３．０－５．０ｎｇ／ｍＬ的ＴＧＦ－β的培养液中的囊胚，其孵化率显著地高于对照组。     

玉米秸秆型日粮营养水平对肉牛肝脏IGF-Ⅰ及其受体基因表达的影响

为研究不同营养水平玉米秸秆型日粮对肉牛肝脏IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR基因mRNA表达的影响。选择9月龄、体重相近[(235±7)kg]的健康杂交肉牛(黄牛×西门塔尔)30头,随机分为3组,饲喂3种不同营养水平日粮(低营养水平、中营养水平和高营养水平),每组5个重复,每个重复2头,试验期为10个月。结果表明:(1)与低营养水平日粮组相比,中营养水平和高营养水平组的日增重显著升高(P0.05);随着营养水平的提高,血液中的IGF-Ⅰ呈上升趋势,且高营养水平组含量显著高于其他两处理(P0.05)。(2)肝脏中的IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR mRNA表达量也与营养水平呈正相关,高营养水平组显著高于其他两组(P0.05)。这说明高水平营养能促进杂交肉牛生长,提高血液中的IGF-Ⅰ含量,并能提高IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR mRNA在肝脏中的表达量。     

小檗碱对NIT-1细胞胰岛素分泌的影响

目的 探讨小檗碱对NIT-1细胞胰岛素分泌的影响及可能的作用机制。方法 采用小檗碱干预后,用MTT法、放射免疫法及Western blotting确定小檗碱干预的合适浓度范围及检测NIT-1细胞胰岛素水平和腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）蛋白的表达。结果 小檗碱在浓度为100 μmol/L时对基础培养基和高糖培养基干预的NIT-1细胞的增殖存在显著性抑制作用（P<0.05）;而小檗碱在浓度为30 μmol/L时就明显抑制高脂培养基诱导的NIT-1细胞的增殖（P<0.05）。小檗碱分别对基础、高糖和高脂诱导的NIT-1细胞短时相干预（1 h）后,显示葡萄糖刺激胰岛素分泌（GSIS）被明显抑制（P<0.05）;小檗碱对高糖高脂诱导的NIT-1细胞长时相干预（24 h）后显示基础胰岛素分泌和GSIS均有一定的增加（P<0.05,P<0.01）。小檗碱可以促进高糖高脂诱导的NIT-1细胞AMPK蛋白的表达。结论 小檗碱不仅仅作为一种AMPK激活来调节胰岛素分泌,其也可能通过其他的通路进一步影响胰岛素分泌。     

受精液中添加β-ME、BSA和咖啡因对猪卵母细胞体外受精后早期发育的影响

进行受精液中添加不同浓度的β-ME、BSA和咖啡因对猪卵母细胞体外受精及其早期发育的影响试验。结果表明,在受精液中添加β-ME(2、10、50μmol/L)对猪卵母细胞体外受精后的早期发育无显著促进作用,当添加浓度过高(250μmol/L)时对早期胚胎发育反而不利;在受精液中添加咖啡因(1、2、4mmol/L)对猪卵母细胞体外受精后的早期发育无显著的促进作用;在受精液中添加BSA(0.1%、0.2%、0.4%、0.8%)对猪卵母细胞体外受精后的早期发育有一定的促进作用,并以添加0.4%BSA的效果最好。     

鸡胰岛素样生长因子受体基因对胚胎发育的影响

以广东温氏集团培育的黄羽肉鸡种蛋胚胎为研究对象,并以与人和小鼠胚胎发育相关的胰岛素样生长因子2受体(insulin-like growth factor type II receptor,IGF2R)基因为候选基因,进行了SNP位点的筛选和多态性的检测,探讨了IGF2R的变异对胚胎死亡的影响。在IGF2R第34外显子中发现2个SNP位点,对具有AlwNⅠ酶切位点的SNP位点进行了PCR-RFLP检测,分析了胚胎IGF2R的SNP位点PCR-RFLPs基因型在死亡和正常发育胚胎中分布特征。经2χ检验,鸡基因IGF2R第34外显子AlwNⅠ-RFLP基因型在死亡和正常发育胚胎中存在显著差异,在死亡的胚胎中基因型AT的频率(0.326)显著地高于正常发育胚胎的频率(0.077)。     

体外成熟猪卵母细胞的体外受精研究

实验采用体外成熟的猪卵巢卵母细胞，将鲜精以前培养结合咖非因法获能后进行ＩＶＦ实验．体外成熟卵ＩＶＦ后的卵裂率为２４．７％～３８．４％，与目前文献报道的近似；授精时精子浓度为２×１０５／ｍＬ，１×１０６／ｍＬ和５×１０６／ｍＬ体外受精后的卵裂率分别为４０．８％（８２／２０１）．４５％（８５／１８９）和３０．５％（５０／１６４）．前二者无显著差异，但都与最后一组差异显著．我们认为，在本实验条件下，体外受精时适当的精子浓度要比目前常用的１×１０６／ｍＬ低．我们将肝素结合咖啡因的精子在能方法与前培养结合咖啡因法进行了比较，卵裂率分别为１０．７％（９／８４）和４０％（３２／８０），前者虽然在牛体受精实验中很成功．但在猪效果差．将体外成熟体外受精卵移入同步的受体猪输卵管后．有一头母猪成功地产下了５只“试管猪’，存活３只．     

不同培养液对昆明小鼠体外受精率及早期胚胎体外发育的影响

在TYH受精液中添加促卵泡素（FSH）和苯甲酸雌二醇（E2）,检测不同浓度的FSH和E2对昆明小鼠的体外受精率的影响;检测在M16、CZB两种培养液中添加胎牛血清（FCS）与否对昆明小鼠早期胚胎体外发育的影响．结果表明：在．rYH中添加1．0IU／mL FSH,受精率和2-细胞胚率显著高于对照组;在TYH中添加0．1μg／mL E2,受精率和2-细胞胚率也显著高于对照组．在CZB中添加体积分数为10％FCS,可显著减少2一细胞期体外发育阻断,并显著提高小鼠胚胎体外发育的囊胚率,可见,以TYH添加1．0IU／mL FSH和0．1μg／mL E2为受精液,以含体积分数为10％FCS的CZB为胚胎培养液,小鼠胚胎可获得较高的囊胚率．葡萄糖并不是小鼠胚胎形成囊胚所必需的．     

IGF-Ⅰ对山羊睾丸间质细胞分泌cAMP和睾酮的影响

利用山羊睾丸间质细胞体外培养的方法,研究ＩＧＦ－Ⅰ对ｃＡＭＰ和睾酮的影响。结果表明：①ＩＧＦ－Ⅰ可使间质细胞外ｃＡＭＰ积聚能力的显著增强（Ｐ＜０．０５～Ｐ＜０．００５）。②ＩＧＦ－Ⅰ可使间质细胞分泌睾酮的能力显著增加（Ｐ＜０．０５～Ｐ＜０．０１）。③ＩＧＦ－Ⅰ可刺激山羊间质细胞经ｈＣＧ诱导睾酮分泌的显著增多（Ｐ＜０．０５～Ｐ＜０．０１）。以上结果与催乳素和白细胞介素－ｌα这些含氮激素（因子）调节睾酮分泌的机理不同。     

中草药与金霉素对生长猪的影响及其机理初探

75～80日龄体重相近仔猪150头,随机均分3组,每组5个重复,每个重复10只样本,研究中草药饲料添加剂与金霉素影响生长猪生产性能的免疫内分泌机制.以中草药添加剂(1%)和金霉素(25 mg/kg)分别添加饲喂组Ⅰ,Ⅱ猪群,组Ⅲ为对照,各组仔猪注射猪瘟疫苗2头份/头.分别于开始用药当天(d0)、35 d(d35)时逐一称重,并各组前腔静脉采血10头,统计各组猪群生产性能,测定血清猪瘟抗体水平和胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)、胰岛素(Insulin)和三碘甲腺原氨酸(T3)和甲状腺素(T4)等与生长有关的内分泌激素.结果显示中草药组仔猪在净增重、日增重和增重率及料肉比方面都显著优于金霉素组和对照组猪群,而后2组间差异不显著.试验结束时,中药组猪群血清猪瘟抗体水平、IGF-I、Insulin和T4水平显著高于金霉素组和对照组仔猪.表明该中草药添加剂可通过增强仔猪免疫功能,并显著提高仔猪血清IGF-Ⅰ和胰岛素的水平、减缓T4的下降,从而提高仔猪的生产性能,表现出1种整体调节效应.     

玫瑰冠鸡IGF-Ⅰ基因多态性与体重及屠体性状关系的研究

采用PCR-RFLP技术，对100只玫瑰冠鸡的胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）基因的5′端调控区进行遗传多态性研究，该调控区的扩增产物经PstⅠ酶切后出现“-／-”“＋／-”“＋／＋”3种基因型，其基因型频率分别是0．22、0.36和0．42。经χ^2检验，玫瑰冠鸡在IGF-Ⅰ位点上处于哈代-温伯格平衡状态（P〉0．05）。分析基因型与12周龄体重和部分屠体性状时发现：玫瑰冠鸡在12周龄体重、半净膛重和胸肌重上都存在“-／-”〉“＋／-”〉“＋／＋”的趋势，且在半净膛重和胸肌重上，“-／-”型和“＋／-”个体显著高于“＋／＋”型个体（P〈0．05）；在12周龄体重上，“-／-”型显著高于“＋／＋”型个体（P〈0．05）。     

EGF和IGF-Ⅰ对21日龄断奶仔猪内分泌功能的影响

选择3窝21日龄断奶的长白仔猪,随机分为自然哺乳、基础日粮、表皮生长因子、胰岛素样生长因子-Ⅰ共4组,表皮生长因子和胰岛素样生长因子-Ⅰ的剂量为17.86μg·d-1。研究断奶前1d及断奶后1,7,14d血清三碘甲腺原氨酸、甲状腺素、胰岛素、生长激素、皮质醇、促肾上腺皮质激素水平的变化。结果表明,添加该剂量的表皮生长因子使21日龄断奶仔猪血清中胰岛素、皮质醇、促肾上腺皮质激素水平显著升高(P<0.01),而对血清中三碘甲腺原氨酸、甲状腺素、生长激素水平没有显著的影响(P>0.05),表明表皮生长因子可能是通过增加胰岛素、皮质醇、促肾上腺皮质激素水平,促进肌肉蛋白质的合成与周转,进而促进细胞对氨基酸和葡萄糖的摄取,增加蛋白质、脂肪、糖原的合成,刺激细胞的增殖与分化。而添加胰岛素样生长因子-Ⅰ的效果不如表皮生长因子的作用明显。     

胰岛素、IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ及其对卵巢的作用

介绍了近年来胰岛素、胰岛素样生长因子Ⅰ和Ⅱ(IGF—Ⅰ和IGF—Ⅱ)的分子特征、受体性质以及它们促进动物卵巢的细胞代谢、甾体激素合成和受体表达的研究进展。     

EGF在哺乳动物卵母细胞体外受精中的作用

[目的]为卵母细胞的生长发育创造更加适宜的环境。[方法]对EGF的理化特性、作用机理及其在卵母细胞体外培养、体外受精和早期胚胎发育中的作用进行阐述。[结果]EGF、IGF和TGF等生长因子在哺乳动物卵母细胞体外培养中起很重要的作用,尤其是在无血清培养条件下。生长因子可大大提高卵母细胞的成熟率和受精率,并对受精卵的发育有很大的促进作用。在众多生长因子中研究的最多的就是EGF。EGF能够促进卵母细胞减数分裂、卵丘细胞扩散,调节卵母细胞胞质成熟。[结论]对EGF的深入研究对于提高哺乳动物卵子的体外成熟率、体外受精率以及胎儿的发育都具有重大意义,为体外受精等技术和胚胎工程的发展提高可靠的保障。但对清楚了解EGF及其受体的性质和作用机制仍存在很多问题,且对表皮生长因子对体外受精的作用研究较少。