应用间接接荧光抗体试验检测猪繁殖和呼吸综合征抗体

应用间接荧光抗体试验进行了猪繁殖和呼吸综合征血清抗体的检测。共检测２个猪场，计２７份血清。其中Ｐ猪猪血清２２份，检出ＰＲＲＳ阳性性血清２０份，阳性率为９０．９％；Ｌ猪场猪血清５份，检出ＰＲＲＳ阳性血清２份，阳性率为４０％。首次证实我区存在ＰＲＲＳＶ感染猪群。     

猪繁殖与呼吸综合征疫苗研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS)所引起的猪的一种接触性传染病。该病1996年在我国初次发现,     

PRRS ELISA试剂盒检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的应用

利用重组杆状病毒表达的PRRSV核衣壳蛋白作抗原制成ELISA诊断试剂盒，检测人工感染PRRSV猪血清、疫苗免疫抗体和田间血清，并与IDEXX公司生产的试剂盒进行比较。结果表明，该试剂盒在PRRSV感染后8天内就可检出感染性抗体，而用IDEXX公司生产的试剂盒在感染后的18天才检测到感染性抗体，对弱毒疫苗的免疫检测也基本能反映出疫苗的免疫应答状况。对华东地区PRRSV流行病学调查结果表明，PRRSV在国内普遍存在，同时也证明研制的试剂盒，是客观科学调查我国PRRS流行情较理想的检测工具。     

猪繁殖与呼吸障碍综合征的防治

猪繁殖与呼吸障碍综合征又称蓝耳病,是由猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒引起的一种病毒性传染病,该病以母猪怀孕后期流产、死产、产弱仔,以及各种年龄段的猪均表现发热、呼吸道症状为特征的疾病。自1995年在我国出现、1996年确诊以来,在全国许多猪场时有发生,给我国的养猪业、尤其是给种猪场造成了巨大的损失。介绍了该病的流行情况、发病机制、病理变化、诊断和防治措施,供参考。     

北疆地区猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的检测与分析

为了解2014-2015年北疆地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的抗体水平。试验从北疆的石河子、沙湾、玛纳斯、克拉玛依4个不同区域的16个规模猪场采集血液样品共计吕2吕份,采用间接ELISA法检测其抗体水平,结果发现PRRSV的平均抗体阳性率为75.36%,平均KQ值为58.12。16个猪场抗体阳性率达到70%以上的占吕1.25%,各猪场抗体水平差异极显著(P0.01)。通过对16个不同规模猪场的血清学检测,表明北疆部分地区对PRRS的防控水平存在差异,防控力度仍需要继续提高。     

几种检测猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体ELSIA诊断试剂盒的对比试验

目前,常用的检测猪繁殖与呼吸综合征（俗称猪蓝耳病）抗体的方法是间接酶联免疫吸附试验（ELISA）,该方法具有快速、方便、准确的特点。目前,国内外很多生物制品厂家生产有检测猪蓝耳病抗体的ELISA试剂盒,质量参差不齐,为找到敏感性强、特异性好的试剂盒,笔者所在实验室开展了不同厂家猪蓝耳病抗体检测试剂盒的比对试验。试验结果表明,某国外试剂厂家试剂盒具有较高的敏感性和特异性,可以作为猪蓝耳病抗体检测的首选试剂。     

猪繁殖与呼吸综合症诊治

猪繁殖与呼吸综合症（PRRS）又称猪蓝耳病,是当下世界上对养猪行业危害最大的一种急性传染病之一。这种传染病是因为猪繁殖与呼吸综合症病毒引起的,当猪被感染后,出现大面积的呼吸道疾病,如果是母猪还会出现不能正常受孕,即便受孕也大概率流产,甚至出现死胎和木乃伊胎等现象。考察近10年中国各地猪繁殖与呼吸综合症的流行情况,总结不同地区的猪在得病前后的行为表现,同时又总结各处研究人员对于该病的防治手段。     

应用ELISA检测猪繁殖和呼吸综合征抗体

用ＥＬＩＳＡ法对青海省东部各县的部分猪群进行了猪繁殖和呼吸综合征抗征抗体检测。共检测了１２０６份猪血清,检出阳性血清２７８份,阳性率为２３．０５％,说明青海省的猪群中有可能存在ＰＲＲＳ。     

猪繁殖与呼吸综合征的ELISA抗体检测结果分析与应用

本研究应用ELISA方法共检测25个猪场26个猪群507份血清的PRRS抗体水平,应用统计学方法分析各猪群的检测数据,结合猪群临床表现和病原污染情况的流行病学调查结果,可将猪群分为无PRRSV污染,临床健康;PRRS病毒污染,临床稳定;PRRS病毒污染,临床发病且控制困难等3种流行模式,并提出了应用猪群PRRS ELISA检测值标准差、个体检测极值及盒须图(Box-and-Whisker Plot)进行分类的具体指标和PRRS分类控制的建议。     

Dot─ELISA检测猪生殖和呼吸综合征抗体的研究

用差速离心法提纯ＰＲＲＳ病毒，利用ＮＣ膜作为载体，在国内外首次成功建立了检测ＰＲＲＳ血清抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。抗原包被浓度为１００μｇ／ｍｌ，被检血清工作浓度为１∶１０，酶标兔抗猪ＩｇＧ工作浓度为１∶６００。对７２份北京地区猪血清分别用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＩＦ检测，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率为３３．３％，ＩＦ检测阳性率为３０．６％，与ＩＦ符合率较高，对部分待检血清检测结果表明：６１份１９９１年进口美国猪血清阳性率为０％，１８２份１９９５年进口加拿大猪血清阳性率为４．９４％。本法不需特殊仪器，适用于基层兽医部门和猪场对该病的血清学诊断和流行病学普查     

猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白间接ELISA方法的建立

为研制特异性敏感性较好的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体检测方法,更好地实现PRRSV的流行病学监测和诊断,将PRRSV GDr180毒株N蛋白基因序列克隆到p ET32a(+)载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内实现了高效表达,表达形式为可溶性表达,通过Western blot证明表达产物与PRRSV GDr180株阳性血清具有很好的反应原性和特异性。将大肠杆菌表达的N蛋白经过超声、离心、过柱纯化后,作为间接ELISA包被抗原检测血清中的PRRSV抗体,通过对各参数和试剂的优化建立了能检测PRRSV血清抗体的间接ELISA检测方法;对方法的特异性和重复性以及与同类成品试剂盒间的应用效果对比进行了试验。结果表明,研究建立的ELISA抗体检测方法可用于检测猪血清中PRRSV抗体、监测猪繁殖与呼吸综合征的流行情况和评价相关疫苗的免疫效果。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征的调查报告

为了解2011年盘锦地区免疫猪群中高致病性猪繁殖与呼吸综合征的免疫效果和感染状况,采用ELISA和荧光定量RT-PCR方法分别检测了本年度1-12月采集到的2160份猪血清和120份猪组织样品。结果表明,受检的猪组织样品中均无高致病性猪繁殖与呼吸综合征抗原;大洼县、盘山县、兴隆台区、双台子区猪繁殖与呼吸综合征抗体阳性率分别为82.2%、81.1%、78.8%、81.1%;种猪场、商品代猪场、散养户的猪繁殖与呼吸综合征抗体阳性率分别为90%、81.3%、75%。从总体来看,2011年盘锦地区的猪繁殖与呼吸综合征免疫状况良好,无猪繁殖与呼吸综合征疫情发生。     

重组N蛋白抗原检测美洲型PRRSV抗体间接ELISA方法的建立

利用表达纯化的PRRSV特异N蛋白抗原表位基因的重组融合蛋白作为抗原,建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。研究结果表明重组N蛋白的最适包被浓度为4.5μg/mL,最适包被条件为37℃1 h加4℃过夜,待检血清稀释度为1:40,HRP-兔抗猪IgG(1:1000)37℃孵育30min。经重复性试验、交叉试验等试验结果表明该方法重复性好、特异性强、灵敏度高,与武汉科前ELISA试剂盒的符合率达93.2%。用已建立的方法检测2007年以前临床血清样本983份,总阳性率为48.6%。     

间接酶联免疫吸附试验检测猪生殖与呼吸系统综合征血清抗体的研究

本研究建立了检测猪生殖与呼吸系统综合征（ＰＲＲＳ）血清抗体的间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），其抗原包被浓度为２μｇ／ｍｌ，血清最适稀释度为１∶１００。试验结果表明：ＥＬＩＳＡ的敏感性高于间接免疫荧光抗体试验（ＩＦＡ），是一种切实可行的诊断方法。     

猪繁殖与呼吸综合征

综述了猪繁殖与呼吸综合征,包括病原PRRSV病毒的病原特点、流行病学、临床症状及诊断方法和防治措施等六方面。介绍了该病的临床诊断、病理学诊断和血清诊断方法及病毒分离技术,同时提出了该病的防治措施。     

Establishment and Application of an Indirect ELISA with Recombinant N Protein of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus

To establish a sensitive,specific and efficient method of antibody detection for porcine reproductive and respiratory syndrome virus（PRRSV),PRRSV N protein was expressed through prokaryotic expression system and purified by affinity chromatography to act as a coating antigen.Then an indirect ELISA detection method for serum PRRSV antibody was finally set up after the optimization of reaction conditions.Besides,the research also involved cross reaction,repeated experiments,and comparison with other ELISA kits.It was determined that the optimum concentration of coating antigen was 2 μg/mL and that the dilution ratio for serum was 1:100,with 30 min of incubation and 10 min of chromogenic reaction.With this method,positive serum samples of five common swine pathogens,including classical swine fever virus（CSFV),porcine circovirus（PCV）and porcine pseudorabies virus（PRV）and so on,were tested,and the results were negative.Both intra-assay and inter-assay coefficients of variation were below 10%,and the comparison with commercial ELISA kits indicated that its accuracy was 94.7%.So this indirect ELISA,which had been established in this research,could provide a rapid diagnosis for swine infected by wild PRRSV and applied in epidemiological investigation,as a convenient and efficient serological antibody detection method.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白间接ELISA检测方法的建立及应用

为建立一种敏感、特异、快速的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体检测方法,本研究利用原核表达技术表达了PRRSV N蛋白,亲和层析纯化后作为包被抗原,通过对各反应条件优化选择,建立了PRRSV血清抗体的间接ELISA检测方法,并进行了交叉反应和重复性试验,以及同类成品试剂盒间的应用效果对比试验。最终确定了抗原包被最佳浓度为2 μg/mL,血清最佳稀释度为1∶100,血清及酶标二抗孵育时间均为30 min,显色时间为10 min,检测猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪伪狂犬病病毒等5种常见猪病病原的阳性血清均为阴性;该ELISA检测方法批内和批间重复性的变异系数均小于10%;与商品化ELISA试剂盒效果比较显示符合率为94.7%。本研究建立的间接ELISA方法将为猪群感染野毒PRRSV后的快速诊断及流行病学调查提供一种简便易行、快速高效的血清学抗体检测方法。     

定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒游离受体夹心ELISA方法的建立与应用

为了建立猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）游离受体定量检测方法,本试验用表达猪唾液酸黏附素（Sn）游离受体的重组腺病毒rAd-Sn4D-Fc感染PK-15细胞,以细胞培养上清纯化的Sn4D-Fc游离受体作为标准抗原,鼠抗猪Sn免疫血清为一抗,生物素标记兔抗猪Sn多克隆抗体为二抗,建立定量检测Sn4D-Fc游离受体的双抗体夹心ELISA方法;用rAd-Sn4D-Fc注射仔猪,定期采集血清进行游离受体检测。结果显示,纯化Sn4D-Fc标准抗原的纯度为94.3%,能被Sn免疫血清识别;一抗的最佳工作浓度为5 μg/mL蛋白,二抗的最佳稀释度为1：4 000,夹心ELISA检测标准抗原的灵敏度为0.4 ng/mL,对照抗原无交叉反应;夹心ELISA能从重组腺病毒注射猪血清中检测到Sn4D-Fc游离受体,最高表达量为6.54 ng/mL,持续时间为15 d。研究结果表明,建立的双抗体夹心ELISA可用于PRRSV游离受体的体内外定量检测。     

猪繁殖与呼吸综合征疫苗的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的严重危害世界养猪业的一种传染病,该病可造成猪的繁殖障碍、呼吸系统病症与生长受阻。本文着眼于PRRSV疫苗的免疫原性、保护效力和安全性,涉及市场上现有的商品化疫苗与已报道的处于试验阶段的相关疫苗研究成果,以期为PRRSV的防控与疫苗研发提供有益的参考。