橡胶树HbHMGR1基因克隆及其愈伤组织转化

[目的]克隆橡胶树HbHMGR1基因,转化橡胶树易碎愈伤组织,为橡胶树遗传转化和品种改良打下基础.[方法]根据已经报道的HbHMGR1基因序列（NCBI登录号X54659.1）设计特异引物,通过RT-PCR克隆HbHMGR1基因,构建pCAMBIA2301-35 S-HbHMGR1植物表达载体.再用EHA105（携带pCAMBIA2301-35 S-HbHMGR1,内含NPTⅡ和uidA基因）侵染橡胶树易碎愈伤组织,数月筛选后对抗性易碎愈伤组织系进行GUS染色和分子检测.[结果]成功克隆了HbHMGR1基因,双酶切重组质粒、重组质粒的PCR扩增结果证明成功地构建了该基因的植物表达载体pCAMBI-A2301-35S-HbHMGR1.侵染后抗性橡胶树易碎胚性愈伤组织GUS检测为蓝色,且分子检测呈现阳性,共获得15个抗性易碎愈伤组织系.[结论]橡胶树HbHMGR1基因在愈伤组织阶段开始表达,有效提高了HbHMGR1基因在橡胶中的表达量.     

茶树愈伤组织诱导与共培转化的初步研究

以福鼎大白无性系茶树大田种子胚为材料，切取子叶、胚芽、胚轴和胚根进行培养，诱导形成愈伤组织。选用较致密的愈伤组织切块与带ＮＰＴⅡ和ＧＵＳ基因Ｔｉ质粒的根癌农杆菌共培养，通过卡那霉素抗性选择，得到了抗性愈伤组织并得到了芽的分化。抗性愈伤组织的诱导率在５％左右。共培过程中发现茶树愈伤组织能较强烈地促进农杆菌生长，表现在农杆菌在茶树愈伤组织周围的聚结。这可能是由于茶树多酚类含量较高，而通常酚基复合物有利于农杆菌对植物细胞的附着和转化。     

根癌农杆菌介导苹果愈伤组织遗传转化体系的优化

[目的]以'王林'苹果愈伤组织为转化研究的材料,在已经建立的遗传转化基础上,优化根癌农杆菌介导的'王林'愈伤组织的遗传转化系统.[方法]在遗传转化的过程中,通过对根癌农杆菌的侵染时间、共培养以及抗性的选择,优化遗传转化体系并且增加转化效率.[结果]选择生长20 d的愈伤组织,在根癌农杆菌OD600=0.8时侵染20 min,共培养3d、转入卡那霉素30 mg/L和头孢噻肟250 mg/L的培养基上进行筛选,可显著提高遗传转化效率.[结论]将McmiR 399d作为标记基因进行转化,优化苹果'王林'愈伤组织的遗传转化系统,从而得到过表达和沉默的McmiR399d'王林'愈伤组织.     

杂交枫香胚性愈伤组织遗传转化体系研究

目的杂交枫香是我国重要的用材和观赏树种资源,但其遗传转化体系尚未建立。建立杂交枫香遗传转化体系为杂交枫香性状改良和基因功能研究提供了方法。方法本研究基于杂交枫香高效的体细胞胚胎发生技术,用根癌农杆菌介导的遗传转化法对其胚性愈伤组织进行遗传转化,对潮霉素选择压、菌液浓度、侵染时间、共培养时间、以及共培养温度等影响因素采用...     

不同根癌农杆菌菌株对柑橘愈伤组织遗传转化效率的影响

在遗传转化中常用的菌株有很多种 ,分别属于3种不同的类型 ,即章鱼碱型、胭脂碱型和农杆碱型。章鱼碱型菌株的特点是以Ａｃｈｓ为染色体背景 ,生长缓慢 ,对培养基的要求较高 ,在培养的过程中易结球。转化时较难操作 ,共培养后难以清洗干净 ,常用的菌株为ＬＢＡ440 4等。胭脂碱型菌株的染色体背景为Ｃ5 8,其特点是生长迅速 ,不结球 ,转化中易操作 ,代表菌株为Ｃ5 8等。农杆碱型的菌株的染色体背景为Ａ2 81或Ａ1 36,具有和胭脂碱型菌株相同的特点 ,代表菌株为ＥＨＡ1 0 5。在通常的遗传转化操作中 ,胭脂碱型和农杆碱型因易于操作而常被作为首…     

重组质粒导入根癌农杆菌冻融法的研究

对重组质粒导入农杆菌冻融法的几个技术环节进行改进与优化。结果表明：该方案可简便、快速、有效地将重组质粒导入农杆菌,转化效率高、重复性好。应用该改进和优化的标准冻融法将重组质粒pBISPl．pBIPl,pBIAP1和pBISgpl20分别导入根癌农杆菌EHAl05和LBA4404,构建了植物双元表达载体,为用农杆菌介导法进行植物遗传转化提供了良好的载体系统。     

柑橘转基因胚性愈伤组织的筛选与再生

转化子的高效筛选与再生是获得转基因植株的关键。为快速有效地筛选出转化子,并尽可能在较短时间内获得纯合的转基因植株,开展了柑橘胚性愈伤组织的转化研究。以椪柑、冰糖橙、默科特橘橙等胚性愈伤组织为外植体,采用根癌农杆菌介导法进行转化试验,根据愈伤组织再生过程中不同发育阶段的组织对抗生素的敏感程度及在不同筛选压下抗性组织的生长情况,提出了＂5步筛选再生法＂,获得了大量的再生细胞系,并经GUS检测证实为转化子。     

抗生素对薰衣草愈伤组织诱导和生长的影响

研究了卡那霉素（Kanamycin）和头孢霉素（Cefotaxime）对法国孟士德薰衣草（Lavandula angustifolia,cv．Munstead）愈伤组织诱导和生长的影响。结果表明：在以卡那霉素为抗性选择标记时,叶盘的选择压力为10mg／L,愈伤组织的选择压力为20mg／L;在以头孢噻肟钠为抑菌剂用于薰衣草叶盘遗传转化实验时,其浓度为200mg／L时即可有效抑制农杆菌的生长,同时又不会对薰衣草愈伤组织产生明显的伤害作用。     

根癌农杆菌法转化康乃馨的条件探索

[目的]为构建高效的康乃馨遗传转化体系奠定基础。[方法]以康乃馨叶片为受体材料,通过抗G418筛选,探讨预培养时间、根癌农杆菌菌液浓度、共培养时间等因素对根癌农杆菌介导康乃馨遗传转化的影响。[结果]20 mg/ml G418是康乃馨叶片转化的适宜浓度。随着预培养时间的增加,康乃馨叶片的存活率降低,预培养2~3 d时抗性芽分化率较高。当根癌农杆菌OD600为0.5~0.8时,抗性芽分化率较高,适合康乃馨转化。共培养2~3 d时,康乃馨叶片生长状态好,抗性芽分化率最高。[结论]预培养、共培养各2~3 d,菌液浓度OD600为0.5~0.8是根癌农杆菌介导康乃馨遗传转化的适宜条件。     

根癌农杆菌介导的甘蔗遗传转化

综述开展甘蔗基因工程育种工作20多年来,从最初的利用农杆菌介导法研究抗除草剂和抗虫转基因成功,到目前高转化效率的转基因方法应用过程中取得的成果,分析影响农杆菌转化甘蔗的关键因素,并对农杆菌介导的甘蔗遗传转化研究前景作了展望.     

根癌农杆菌介导的悬铃木叶片遗传转化体系研究

以葡糖醛酸糖苷酶(GUS)基因瞬时表达率为指标,研究了不同因子对根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的悬铃木叶片遗传转化系统的影响.结果表明,预培养9 d的悬铃木叶片在OD600值为0.7的根癌农杆菌菌液中浸染10 min后,再在含有100μmol.L-1的乙酰丁香酮的共培养培养基上黑暗条件下共培养3 d叶片的遗传转化效率最高.该体系为进行农杆菌介导目的基因培养悬铃木新品种奠定了基础.     

根癌农杆菌介导的叶用莴苣基因转化系统的建立

以叶用莴苣微茎尖为试材，在含有BA和NAA的MS液体培养基上旋转培养，诱导出大量愈伤组织；进一步分化培养，获得大量不定芽并生根；将愈伤组织碎块与根癌农杆菌共培养，对经卡那霉素筛选后所得到的再生植株进行X-Gluc染色，蓝色反应阳性率为80％，表明建立了叶用莴苣愈伤组织基因转化系统。     

农杆菌介导FAD8基因遗传转化小油桐的研究

为了创制抗冷性增强的转基因小油桐新种质,本研究以苗龄15 d左右的小油桐无菌苗子叶为外植体,利用农杆菌介导法,将35S启动子驱动能够提高植物不饱和脂肪酸相对含量的拟南芥FAD8基因遗传转化小油桐,通过获得抗性植株,经GUS组织化学染色及PCR检测,证明FAD8基因已整合进入小油桐基因组中。研究获得移栽成活的小油桐转基因株系2个,与对照相比,转FAD8基因植株无明显表型差异。本研究首次获得转FAD8基因小油桐植株,为其抗冷新种质筛选及创制奠定了基础。     

根癌农杆菌介导的苦瓜遗传转化

用含质粒载体pB I121的根癌农杆菌转化“南屿”苦瓜子叶节,通过对gus基因瞬时表达情况进行观测,对根癌农杆菌介导的苦瓜遗传转化体系相关因素进行研究.结果表明,苦瓜子叶节必须预培养3 d左右,用D600nm值为0.3-0.5之间的菌液浸泡,侵染时间为10 min,然后共培养3-4 d.再生植株经PCR检测初步证明gus基因已成功整合到苦瓜基因组中.     

根癌农杆菌介导的向日葵遗传转化研究进展

介绍了近年来国内外根癌农杆菌介导的向日葵遗传转化研究的受体系统、研究现状、主要影响因素、发展限制问题和策略,并对今后根癌农杆菌介导的向日葵遗传转化研究的发展和方向进行了展望。     

农杆菌介导的番茄遗传转化研究进展

综述了农杆菌介导法的转化机理及影响农杆菌转化效果的诸多因素 ,如 :植物基因型、转化受体、预培养、菌液浓度和侵染时间等 ,以及采用遗传工程技术改良番茄品种的现状     

根癌农杆菌介导的水稻遗传转化影响因素研究

从组织培养体系和根癌农杆菌侵染体系两个方面,对影响根癌农杆菌介导的水稻遗传转化频率的各种因素作了具体的分析和综述。     

影响西瓜农杆菌介导的高效遗传转化效率的主要因子

以西瓜子叶为外植体材料,利用GUS染色瞬时表达方法研究农杆菌浓度,预培养、共培养时间,预培养条件以及添加乙酰丁酸酮(AS)对西瓜转化效率的影响,优化西瓜遗传转化参数,初步建立以MS BAP 2.0mg/L IAA 0.2 mg/L Hyg 10 mg/L Cef 300 mg/L为分化培养基,黑暗条件下预培养2 d,使用OD为0.3的菌液侵染10 min后,黑暗条件下共培养3 d,然后在25℃,光周期为16 h的条件下筛选抗性芽的遗传转化体系。