基于ISSR的日本落叶松2代优树遗传多样性研究

为分析80株日本落叶松2代优树间的遗传多样性,本次试验利用ISSR分子标记的方法对采自辽宁省抚顺市清原县大孤家国营林场的80个样本进行了DNA的提取与检测、ISSR反应体系的优化建立及引物筛选、ISSR扩增及电泳检测。结果发现:筛选出的8个ISSR引物共扩增出281条DNA条带,全部为多态性条带,多态性百分率为100%,平均每条引物扩增的多态性条带数为35.1。ISSR扩增结果的遗传相似性在0.8479~0.9142之间,其中编号为C46和C94的遗传相似系数最低,表明二者亲缘关系最远;编号为C96和C97的遗传相似系数最高,表明二者亲缘关系最近。基于日本落叶松ISSR遗传相似性系数进行聚类,当相似系数为0.856时可将80个日本落叶松样本划分为5个类群。     

利用SRAP标记分析东部白松种源的遗传多样性

采用8对SRAP引物对加拿大19个种源的东部白松进行分析,获得97个扩增位点,多态性位点57个,平均多态性水平58.8%;每对引物产生等位基因7～22个,条带分布在100～1 000 bp。19个种源相似系数为71%～95%,根据不同种源的遗传相似系数,利用UPGMA法进行聚类分析,遗传相似系数69%为阈值,将19个东部白松种源分为4个群体。4个群的Nei指数为0.1557,Shanonn指数为0.2426,其中平均等位基因数为1.5876,有效等位基因数为1.2603;全部种源的基因多样性平均值为0.1840,群内基因多样性平均值为0.0340,基因分化系数为0.8152,群体间基因流为0.1132。     

利用RAPD和ISSR分析百日草自交系间的种质遗传多样性

首次运用RAPD与ISSR技术分析了百日草20个自交系的种质遗传多样性.结果表明：从供试材料中147条RAPD引物和44条ISSR引物筛选到具有多态性的RAPD引物12条,ISSR引物9条.RAPD引物共扩增出147条带,多态性位点数为100,多态性位点比率为68.03%,平均多样性指数为0.3559,有效等位基因数为1.4169;ISSR引物共扩增出128条带,多态性位点数为97,多态性位点比率为76.38%,平均多样性指数为0.4013和有效等位基因数为1.4728.试验表明,RAPD、ISSR及两种分子标记整合后的结果较为相似,呈极显著的正相关.聚类结果将20个自交系基本分为2类：一类群来源虹越种子集团公司;另一类群来源甘肃酒泉种子集团公司,分类与原产地相关.RAPD与ISSR标记是研究百日草种质遗传多样性有效的工具,在分析百日草的亲缘关系特别是系谱关系时,ISSR是一种多态性和重复性优于RAPD的分子标记.两种分子标记整合后既能鉴定出自交系的系谱先后关系,也能反应来源相同自交系的亲缘关系.     

利用SRAP标记分析日本落叶松2代优树的遗传多样性

为研究日本落叶松2代优树间的遗传多样性,该文利用SRAP分子标记的方法对选择的80个样本进行了遗传多样性分析。结果表明:筛选出的8对引物共扩增出235条DNA条带,其中多态性条带223条,多态性百分率为94.89%,每对引物可扩增出20~37条多态性条带,平均每对引物扩增的多态性条带数为29.4条。利用UPGMA法进行聚类,当相似系数为0.824时将80个日本落叶松种质材料划分为4个类群。聚类基本与子一代的亲缘关系符合,类群间遗传基础较狭窄,亲缘关系较近,为日后建立日本落叶松2代种子园的工作提供了理论依据。     

51个木麻黄无性系遗传多样性的ISSR分析

采用ISSR分子标记对51个木麻黄无性系进行遗传多样性和亲缘关系分析。结果表明:ISSR适用于木麻黄无性系遗传分析,22个ISSR引物在供试无性系中共扩增出199个位点,多态性位点154个,多态位点百分率为77.4%;平均有效等位基因数为1.5,Nei’s基因多样性指数为0.174 1 0.389 1,Shannon信息指数为0.273 20.556 0,相似系数为0.467 3 0.995 0,平均为0.743 0,表明供试无性系的遗传基础已相对比较狭窄。ISSR聚类分析表明:参试无性系并不能按来源地各自单独聚为1类,无性系亲缘关系的远近与来源相关不大;在相似系数为0.678时,可将所有供试材料分为2大类群;亲缘关系树状图在分子水平上显示了供试无性系间的亲缘关系,为今后木麻黄无性系的推广应用及育种亲本的选配提供了理论依据。     

优良观赏枫香种质的遗传多样性分析

本研究利用ISSR分子标记技术对12个优良观赏枫香种质资源进行遗传多样性研究。从12份不同枫香单株叶片样本中提取DNA,设计适应枫香的ISSR扩增正交体系优化实验,筛选出19条ISSR引物得到127条扩增带,其中多态性条带为94条,多态性条带比率为74.01%。再利用ISSR分子标记技术对数据进行遗传多样性和相似度分析,发现除4号和11号样本具有较高的遗传相似度0.83外,其他样本的遗传相似度为0.61～0.79,清楚的显示其优良种质的遗传差异性,具有较高的遗传多样性。     

绿竹等30个竹种ISSR遗传多样性分析及指纹图谱构建

为了研究30个竹种的遗传多样性和亲缘关系,建立其DNA指纹图谱,为竹亚科部分植物的分类及种质鉴定提供参考,利用优化的ISSR-PCR体系,筛选出18个多态性较好的的引物,对30个竹种的DNA进行PCR扩增。结果显示,18条引物扩增出的多态性位点占100%,平均每个引物扩增出14个位点,且DNA片段长度在200—3 000bp之间;30个竹种间的平均遗传距离为0.441 4,平均遗传相似度为0.644 44;在遗传距离0.51处进行ISSR聚类分析,可以将竹种分成6组,这与传统的分类大多比较吻合。说明30个竹种具有相当丰富的遗传多样性和基因库,各竹种间有一定的遗传差异和亲缘关系;ISSR技术分析竹种间亲缘关系和遗传多样性具有较高的精确性,可作为竹种分类的参考技术。     

新疆枣资源亲缘关系的ISSR和RAPD分析

利用RAPD和ISSR标记对24份新疆主产区枣资源进行分析。9条RAPD引物共在75个位点获得了扩增,多态性位点比例为62.7%;8条ISSR引物共有48个位点获得了扩增,多态性位点比例为56.3%。基于RAPD和ISSR标记,利用UPGMA法分别构建了24份枣资源的亲缘关系图谱。结果表明,RAPD和ISSR的聚类结果相似但是不完全相同,在大类的分析上2种方法的聚类结果表现出差异,但是在细节的表现上趋向一致;综合2种方法的聚类结果,以相似系数0.80为标准,将供试的24份新疆枣种质划分为4大类群。     

20个茶花品种遗传关系的ISSR分析

采用ISSR分子标记技术对茶花品种群中有代表性的20个国内外茶花品种进行了品种间遗传关系的分析.从60对随机扩增引物中筛选出了21对扩增带型清晰及重复性好的引物序列,共扩增出153条带,其中146条呈现多态性,多态性条带比例为95.4%;Nei's基因多样性指数介于0.40～0.48,Shannon信息指数在0.57～0.67,基因分化系数介于0.5～0.7,基因流值介于0.2～0.5,遗传相似系数介于0.50～0.74,平均为0.63.参试的20个茶花栽培品种间遗传差异相对比较窄;结合花型形态学特征与UPGMA聚类分析结果,可将20个茶花品种分为2个大类群.此外,结果显示:ISSR分子标记适用于分析山茶品种间遗传多样性和亲缘关系.     

31个种源东部白松SRAP指纹图谱分析

采用8对SRAP引物对加拿大31个种源的东部白松进行分析,获得104个扩增位点,多态性位点79个,平均多态性水平76%,每对引物产生等位基因7～22个,条带分布100～1 000 bp。各种源相互间相似系数为0.653 8～0.951 9,平均0.830 5。引物组合ME1-EM6与ME7-EM7可将31个种源区分开。     

红松种子园单株ISSR-PCR遗传多样性分析

以林口青山红松无性系种子园216个单株生健康嫩叶为试验材料,利用ISSR-PCR分子标记技术分析其遗传多样性的试验结果表明:从100条引物中共筛选出11条具有多态性的ISSR引物,经ISSR-PCR扩增后共获得102个位点,多态性谱带102条,多态位点比率为100%,单株有效等位基因数变动范围为1.0046~2.000,群体总基因多样性指数为0.3333,Shannon多样性指数为0.0164~0.6931,期望杂合度为0.0046~0.5000,红松种子园单株具有丰富的遗传多样性。     

湖北三潭风景区野生省沽油遗传多样性的ISSR分析

采用ISSR分子标记技术对湖北三潭风景区野生省沽油群体32个样本进行遗传多样性分析,从18条ISSR引物中筛选出10条引物用于PCR扩增,共扩增出147条DNA条带,其中多态性条带134条,占91.16%,平均每个引物扩增条带的数目为14.7条。利用POPGENE1.32和NTSYS-pc软件分析得出该野生省沽油样本的平均有效等位基因数为1.4319,平均Nei′s基因多样性指数为0.2653,平均Shannon信息指数为0.4118;样本间的遗传相似系数在0.47～0.87之间;UPGMA聚类结果,在遗传相似性系数0.6558处可把供试的32个样本分为3大类,表明该野生省沽油群体的遗传多样性比较丰富。     

桂花优良品种‘珍珠彩桂’遗传多样性的ISSR分析及指纹图谱构建

利用ISSR分子标记技术对44个桂花品种进行遗传多样性研究,从100条引物中筛选出10条引物对供试材料基因组总DNA进行PCR扩增,共扩增出条带122条,其中多态性条带112条,多态性比例为91.8%。经Pop Gen32软件包分析,44个桂花品种的平均有效等位基因数为1.592 8,平均Nei’s基因多样性指数为0.341 9,平均Shannon信息指数为0.506 3,遗传一致度介于0.475 4~0.926 2之间,说明桂花品种间遗传多样性较高。UPGMA聚类将44个品种分成7类。建立了新品种‘珍珠彩桂’和其它43个桂花品种的DNA指纹图谱,可从分子水平将‘珍珠彩桂’与现有其它桂花栽培品种进行鉴别。研究结果为桂花分类、品种鉴定、分子育种和子代鉴定提供了重要依据。     

北五味子遗传多样性的ISSR分析

采用ISSR(Inter Simple Sequence R epeat)标记技术,分析了东北三省16个产地北五味子的遗传多样性.6个ISSR引物共检测到83个位点,多态位点的百分率在9.64%～42.17%之间.ISSR的Shannon指数变化范围在0.0583～0.1966之间,Nei指数的变化范围在0.0399～0.1254之间.16个产地的北五味子的基因多样性为24.05%,产地间变异占总变异的66.81%.各产地的地理气候因子与遗传变异指数相关分析表明,影响遗传多样性的地理气候因子为经度和温度,表现为分布区西部、生长季节温度较低的产地变异丰富的特点.     

Genetic variation and division of Pinus sylvestris provenances by ISSR markers

Inter Simple Sequence Repeat (ISSR) was used to detect genetic variation among nine provenances, including 135 individuals. A total of 108 loci were amplified using 10 random primers. The differentiation of the percentage of polymorphic bands (PPB) among different provenances was evident, ranging from 27% to 54%, of which Honghuaerji provenance had the highest PPB and Kalunshan provenance had the lowest PPB. Shannon's Information index (I) at species level was 0.1581 and Nei's gene diversity (h) was 0.2393. Coefficient of gene differentiation (G_ST) calculated by Popgene was 0.3965, these results indicated that majority of genetic variation (60.35%) was found within provenances. According to dendrogram amongpinus sylvestriv provenances, nine provenances were divided into two provenance areas, namely Daxing's and Xiaoxing'an Mountains provenance area and Hulunbeier provenance area. Foundation item: This study was supported by National Scientific and Technological Brainstorm Project. Biography: LI Hui-yu (1978-), female, Ph.D. candidate, Northeast Forestry University, Harbin 150040, P. R. China. Responsible editor: Song Funan     

云南主要核桃品种的ISSR分子鉴别

以核桃当年萌发的新叶为材料,在建立了良好的反应体系基础上,筛选出8条引物对云南省11个主要栽培和推广的核桃品种进行了ISSR分子标记研究。结果表明:8个ISSR引物共检测出位点102个,其中多态性位点62个,占60.78%,参试样品具有较高的多态比率;用其中的两条引物建立了11个品种的指纹图谱,并可用之鉴别参试品种;POPGENE 32软件的计算结果有效等位基因数、基因的多样性和Shannon信息指数分别为1.370 7,0.214 3和0.321 6,供试的云南核桃品种在分子水平上存在比较丰富的遗传变异。     

不同种源印楝遗传多样性的ISSR分析

利用ISSR分子标记技术对印楝进行遗传多样性分析,用9条引物进行扩增,共检测出81条清晰的位点,其中79条具有多态性,多态位点百分率为97．53％,Nei＇s基因多样性指数为0．3803,Shannon信息指数为0．5537,表明印楝遗传多样性很丰富。种源间遗传分化系数为0．4702,Shannon’s居群分化系数为0．4677,表明印楝种源内的遗传分化大于种源间的分化。聚类分析将13个种源分为2大类,来自缅甸的11个种源聚成一类,来自澳大利亚和印度的种源聚成另外一类。结果表明,ISSR分子标记技术适合于印楝的遗传多样性分析。     

美国山核桃群体遗传多样性的RAPD分析

运用随机扩增多态性DNA（RAPD）标记技术，采用Operon公司的10种随机引物，以采自美国东南部、北部、西部和我国江苏、浙江、湖北、湖南、云南等地的9个美国山核桃栽培群体45个单株的种子为材料，检测出多态位点42个。以这些多态位点为依据，计算了估测了多态性位点百分比、Shannon表型多样度指数、Virk群体内遗传距离和Nei氏群体间遗传距离，并用它们作为参数进行群体遗传多样性的RAPD分析。结果表明，参试的美国山核桃品种群体遗传变异明显，且群体间差异大于群体内差异，我国引种的群体遗传差异大于原产地美国的群体遗传差异。     

Genetic diversity of sea buckthorn (Hippophae rhamnoides) populations in northeastern and northwestern China as revealed by ISSR markers

As a N₂-fixing tree species, sea buckthorn (Hippophae rhamnoides) is well adapted to arid regions and is utilized for multiple purposes in China. Current knowledge of genetic variability of H. rhamnoides is limited in terms of rangewide distributions. Eleven natural populations of sea buckthorn in northeastern and northwestern China were analyzed to detect genetic variation among and within populations, by use of ISSR (inter-simple sequence repeats) markers. Using eight primers, 207 polymorphic loci were observed, ranging in size from 250 to 2500 bp. The coefficient of gene differentiation (Gst = 0.0679) showed that the total molecular variance of 11 populations was mainly existed within populations. The genetic variation within and among the 11 populations was 93.21 and 6.79%, respectively. No significant correlation between genetic and geographic distances of the populations was found using ISSR markers. Our study provides a population-level genetic profile for further investigation and conservation of genetic diversity of sea buckthorn.     

锥栗农家品种的遗传多样性及亲缘关系分析

采用ISSR技术对37个锥栗农家品种进行遗传多样性及亲缘关系分析。从65条通用引物中筛选出13条扩增效果较好的引物进行扩增,每条引物的扩增谱带从9(引物828) 16条(引物821)不等,平均每个引物产生12个ISSR片段,共扩增出156条谱带,其中多态性条带129条,占82.69%,平均每个引物扩增的DNA多态性条带为9.9条。结果表明:锥栗农家品种具有丰富的遗传多样性水平;供试农家品种的观测等位基因数1.826 9,有效等位基因数1.509 7,Nei's基因多样度(H_e)为0.292 3,Shannon信息指数为 0.434 4;13条引物可区分37份农家品种及其优株。根据遗传一致度构建反映品种间亲缘关系的UPGMA聚类图,37个锥栗品种可划分为2大类群7个亚类。