一株放线菌次生代谢产物抗菌活性的初步研究

研究了从秦岭山区中筛选得到的一株放线菌(编号为No.24),对其产生的次生代谢产物的抑菌活性进行了测定。生测结果表明,离体条件下,发酵液对农业常见的病原真菌均有较强的抑制作用,对苹果轮纹病菌和小麦根腐病菌的菌丝生长抑制作用最强,其EC50分别是146.87 mg.L-1和164.09 mg.L-1;对玉米大斑病菌和马铃薯干腐病菌孢子萌发的抑制作用较强,其EC50分别为129.33 mg.L-1和184.99 mg.L-1。盆栽试验在浓度为6 000 mg.L-1时对小麦白粉病的保护和治疗作用分别为76.1%和70.7%,对番茄灰霉病的保护和治疗作用分别为66.9%和61.1%。田间药效试验结果表明,No.24菌株发酵液可以有效控制番茄灰霉病和小麦白粉病的进一步蔓延。     

放线菌A19菌株次生代谢产物的初步研究

【目的】对放线菌A19菌株发酵液中的次生代谢产物进行初步研究,以了解其抑菌活性及其稳定性。【方法】采用抑制菌丝生长法、管碟法、盆栽试验等方法,测定了A19菌株发酵液的抑菌活性和发酵液中有效成分的热稳定性及酸碱稳定性;并以活性追踪为指导,采用大孔吸附树脂、硅胶柱层析、高效液相色谱等技术对其有效成分进行了分离。【结果】室内生测发现,A19菌株发酵液对10种供试病原真菌均有明显的抑制作用,其中对小麦根腐病菌的抑制效果最好,抑制率达100%;对枯草牙孢杆菌、金黄色葡萄球菌和L-链球菌3种病原细菌也有较好的抑制作用,其中对枯草芽孢杆菌的抑制作用最强,抑菌圈直径达到21 mm。盆栽试验表明,A19菌株发酵液对小麦白粉病有一定的保护作用和治疗作用,防治效果分别为54.3%和65.0%。A19菌株发酵液对热稳定,对酸碱不稳定。从A19菌株的发酵液中分离得到15-1,15-2和15-3 3种化合物,其中15-2鉴定为7-羟基-3异丁基六氢吡咯[1,2-α]吡嗪-1,4-二酮。【结论】放线菌A19菌株发酵液抗菌谱较广,具有较好的研究价值。     

诺丽内生真菌的分离鉴定及其次生代谢产物的抗氧化活性

对采自海南省海口市、万宁市、儋州市、琼海市、三亚市和临高县的诺丽果和叶,消毒后,25℃下分离培养得到32株内生真菌,采用26s r DNA D1/D2区域和ITS r DNA测序鉴定菌种。结果表明:32株内生真菌属于担子菌门(Basidiomycota)、子囊菌门(Ascomycota)2个类群。其中,13株酵母菌分别属于金担子菌属(Aureobasidium)、蔷薇色酵母属(Rhodotorula)、隐球菌属(Cryptococcus)3个属5个种;19株霉菌分别属于刺盘孢属(Colletotrichum)、间座壳属(Diaporthe)、炭团菌属(Hypoxylon)、枝孢属(Cladosporium)、镰刀菌属(Fusarium)、叶点霉属(Phyllosticta)和赤霉属(Gibberella)7个属10种。同时,采用乙酸乙酯溶剂对15种诺丽内生真菌发酵液进行提取,获得次生代谢产物。用ABTS+·自由基清除法进行了抗氧化活性评价,用福林-肖卡法和Al Cl3显色法测定各提取次生代谢产物中总多酚含量(TPC)、总黄酮含量(TFC)。结果显示,乙酸乙酯提取的15种诺丽内生真菌都具有抗氧化活性,且m48,j22抗氧化活性显著,诺丽内生真菌具有较丰富的多样性和具有产生抗氧化活性物质的潜力,在医药健康领域具有重要应用价值。     

海洋来源放线菌HN-E31次生代谢产物的分离与鉴定

利用反相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、半制备高效液相色谱等分离方法,对采自中国南海的鸟氨酸微菌属放线菌HN-E31发酵液乙酸乙酯萃取部位的化学成分进行分离研究,通过1H NMR、13C NMR和质谱等波谱技术,并参照相关文献数据,对化合物进行结构鉴定。结果共分离得到了12个化合物,分别鉴定为:环(脯-缬)二肽(1)、环(脯-亮)二肽(2)、环(脯-异亮)二肽(3)、环(脯-苯丙)二肽(4)、环(亮-丙)二肽(5)、环(异亮-丙)二肽(6)、苯丙氨酸(7)、3-hydroxyacetyl-indole(8)、3-吲哚甲醛(9)、水杨酸(10)、尿嘧啶(11)和对羟基苯甲醛(12)。上述化合物均为首次从鸟氨酸微菌属放线菌中分离获得。     

菌株518鉴定及其次生代谢产物的生防特性与分离

经形态学与分子生物学鉴定,菌株518为淡紫拟青霉。对其进行液体发酵处理,发酵产物对番茄灰霉病有很好的防治效果,同时起到一定的促生长作用。菌体固体发酵后,从中分离得到4种化合物。初步鉴定分别为麦角甾醇、D-甘露糖醇、麦角甾-7,22（E）-二烯-3β,5α,6β-三醇（又称酵母甾醇）、白僵菌素。     

次生代谢产物的研究进展

绿色植物是能够将光能转变成化学能的"生物反应器",是人类赖以生存的最重要的基础。次生代谢过程被认为是植物在长期进化中对生态环境适应的结果,它在处理植物与生态环境的关系中充半着重要的角色。本文分别从植物次生代谢物类型、分布、生产、生物学意义以及应用前景各个方面进行了简单阐述。     

放线菌次生代谢产物对百合灰霉病菌的抑菌活性筛选

以268份放线菌次生代谢产物为筛选对象,百合灰霉病为供试菌种,通过抑制孢子萌发试验、黄瓜子叶法两种试验方法,进行抗百合灰霉病活性筛选。结果表明,孢子萌发抑制率80%以上的有16份,黄瓜子叶离体叶片防治效果50%以上的有10份。筛选到一批具有开发应用前景的放线菌资源。     

一株西沙海绵共附生真菌次生代谢产物

对采自西沙隋氏蒂壳海绵共附生真菌（Penicillium chrysogenum）次生代谢产物进行化学成分的研究,以期发现结构特异的次生代谢产物。隋氏蒂壳海绵共附生真菌用真菌2号培养基进行发酵,发酵后的菌体采用溶剂提取、萃取和现代色谱分离纯化手段,包括正相硅胶柱色谱、ODS柱色谱和HPLC分离制备,运用现代核磁波谱技术并结合高分辨质谱鉴定化合物的结构。结果显示：通过对隋氏蒂壳海绵共附生真菌的菌体提取物进行分离制备,最终分离得到7个单体化合物,鉴定结果为（1） Traumatic acid,（2）N-benzoyl-L-phenylalaninol,（3）cyclo-（Trp-Ser）,（4）cyclo-（D-Pro-D-Leu）,（5）cyclo-（Phe-Tyr）,（6）（22E,24S）-5α,8α-epidioxy-24-methyl-cholesta-（6）,9（11）,22-trien-3β-ol,（7）5α,8α-epidioxy-23-methyl-（22E,24S）-ergosta-6,22-dien-3β-ol。其中化合物1是从自然界中首次分离得到,化合物2、3、4、5、6、7是在该真菌内首次分离得到。     

梨黑斑链格孢菌次生代谢产物的分离鉴定及毒素含量分析

通过分离鉴定梨黑斑链格孢菌次生代谢产物,比较分析梨链格孢菌利用库尔勒香梨、苹果、西红柿、马铃薯、大米、燕麦等不同营养基质后的毒素含量。采用硅胶柱色谱、制备高效液相色谱、1D2D NMR技术等方法,分离鉴定梨黑斑链格孢菌次生代谢产物,高效液相色谱法分析毒素含量。从梨链格孢菌中分离鉴定了6个次生代谢产物,分别为交链孢烯(1)、链格苝醇(2)、交链格孢酚(3)、交链格孢酚单甲醚(4)、土曲霉酮(5)和7-氨基-1,3-二羟基-苯丙酮(6);发现梨链格孢菌利用不同营养基质所产生物毒素(化合物1-4)结构种类相同,但含量存在显著差异。对梨链格孢菌生物毒素成分进行了定性定量分析,明确了毒素成分的主要结构,揭示了该菌利用不同营养基质所产生物毒素含量差异的特点。     

9株土壤放线菌分离鉴定及抗菌活性

初步研究了贵州习水国家级自然保护区土样放线菌。用改良HV培养基分离放线菌,对9株放线菌进行了形态学、生理生化和分子鉴定,系统发育分析和抗菌活性检测。结果显示:1株为小单孢菌属(Micromonospora),相似性97%;8株为链霉菌属(Streptomyces),相似性96%~99%。抗菌活性检测发现,链霉菌C2对3株供试细菌有抑菌作用,抑菌圈直径8.5~12 mm;链霉菌C12对5株供试细菌具有抑菌效果,抑菌圈直径17~20 mm。研究结果表明,小单孢菌为稀有放线菌,链霉菌为优势放线菌;C2和C12相比,C2抑菌作用弱,C12抑菌作用强,C12抑菌谱更广,效果更好。     

一株具有抗菌活性红树林土壤放线菌的分离和鉴定

分离和鉴定具有抗菌活性的红树林土壤放线菌。基于形态特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析,研究通过稀释分离法从广西北海红树林的高盐泥样中分离到1株细菌。系统进化分析表明,分离菌株与链霉菌属Aurantiogriseus AY999773具有99%的同源性,因此,BH0951初步被鉴定为链霉菌属Aurantiogriseus AY999773的变种。说明放线菌BH0951具有抗菌活性,本研究能为本菌株乃至广西北海红树林的微生物资源的开发和利用提供初步数据。     

放线菌Wa-13868的分类鉴定及其代谢产物的研究

在新农用抗生素的筛选过程中,分离到一株具有良好生物学活性的放线菌.经测定,其代谢产物对多种病原真菌及害虫、杂草靶标有良好的活性.时产生菌进行常规分类鉴定及分子鉴定后,确定其为壮观链霉菌(Streptomyces spectabils)的一个菌株.对发酵液中的活性物质进行了提取,生物测定,经HPLC及MS分析,根据紫外光谱、分子量及碎片峰的分析,确定其活性物质为巴菲霉素.     

一株抗马铃薯晚疫病的放线菌的分离鉴定

本研究以高氏1号培养基,采用平板涂布和划线分离培养法,从内蒙古巴彦淖尔市采集的盐碱地土壤中分离到一株放线菌(菌株编号BY104)。该菌的发酵液对引起马铃薯晚疫病的病原菌——致病疫霉的抑制率达100%;菌落的形态、生理生化特征和16S r DNA序列分析比较表明,菌株BY104属放线菌门的链霉菌属。该结果为利用该菌株开展马铃薯晚疫病的生物防治奠定了基础。     

和次生代谢产物合成影响之研究进展

 真菌诱导子是一类诱导植物细胞生长和次生代谢产物合成的化学物质,包括有真菌菌体、菌液浓缩物、菌丝和菌液提取物、菌丝体高温处理后的可溶性成分、细胞壁降解成分、肽类和蛋白质等。该文对真菌诱导子对植物培养物生长和次生代谢产物合成影响的研究进展进行了综述,并对真菌诱导子在植物细胞培养生产次生代谢产物方面的前景进行了展望。     

一株拮抗稻瘟病生防放线菌的分离鉴定

为探寻水稻稻瘟病的生物防治新途径,从东乡野生稻根际土壤中筛选出1株对多种病原真菌都具有较强抑菌作用的放线菌TL-007,根据该菌株形态特征、生理生化特征、16S rDNA序列分析结果,TL-007被鉴定为黑胡桃链霉菌（Streptomyces nogalater）。对该高抗菌株进行稻瘟病生防效果评定,结果表明：经发酵液处理过的水稻幼苗苗高、苗鲜质量、苗干质量、根长、根鲜质量、根干质量等指标明显高于对照组,TL-007发酵液对稻瘟病的防治效果为49.64%。说明放线菌TL-007是一株具有生防潜力的放线菌,在农业生产上具有应用价值。     

2株红树内生真菌混合发酵培养液中代谢产物的分离鉴定

将混合发酵技术应用于南海红树林内生真菌E33和K38代谢产物的培养,从该提取物中分离到5个化合物,利用波谱技术确定其结构分别为2-甲酰基一3,5-二羟基-4-甲基苯甲酸(化合物1)、6,8-二羟基-4-乙酰基异香豆素(化合物2)、5-羟基-6,8-二甲氧基-2,3-二甲基-4H-萘-[2,3-b]-吡喃-4-酮(化合物...     

1株孜然内生真菌的分离鉴定及代谢产物的GC分析

采用组织分离法从孜然种子中分离纯化出内生真菌ZR-003菌株,并通过形态学观察和ITS序列分析方法确定其种属。采用平板测定法研究了该菌株对19种常见农业致病真菌的抑制作用,ZR-003菌株发酵液经过滤、离心和萃取,旋转蒸干之后利用GC方法对其代谢产物进行分析。研究结果表明:ZR-003菌落絮状、白色、具不明显的放射状沟纹,分生孢子结构稀少,其菌丝帚状结构明显散开,瓶梗形状和菌落特征应属于散枝亚组微紫青霉系中颜色较淡的类群;经分子生物学鉴定,ZR-003菌株的ITS序列与微紫青霉(Penicillium janthinellum)的相似性为99%,属微紫青霉菌;同时确定其对香蕉灰纹病菌[Cordana musae (Zimm.)Hohn.]、稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)、苹果斑点落叶病菌(Alternaria alternaria f.sp mali)、小麦根腐病菌[Bipolaris sorokiniana(Sacc.)Shoemakey]、黄瓜黑星病菌(Cladosporium cucumerinum)都具有非常良好的抑制作用,其抑菌率分别为80.00%、81.82%、80.95%、80.00%和80.49%,其中对稻曲病菌的抑菌作用最好。经GC、UV分析可知,ZR-003菌株发酵液提取物在保留时间17.1789min处有明显出峰,其在328nm(λ),20(ε);280nm(λ),1500(ε);244nm(λ),15000(ε)下有明显吸收,与标准样品枯茗醛的色谱光谱特征一致,经计算得到其在发酵液中含量为28.7μg·mL-1,综上可见,孜然内生真菌ZR-003菌株发酵液中含有与孜然相同的药用成分—枯茗醛,从而为枯茗醛的获得开辟了新的微生物来源。     

一株烟曲霉抗植物病原菌活性次生代谢产物的研究

以一株烟曲霉属白花夹竹桃内生真菌为研究对象,对其抗植物病原菌活性的次生代谢产物进行了研究,共分离鉴定了6个化合物,分别是alternariol(1),4-acetylaminobutyric acid(2),monomethylsulochrin(3),succinic acid(4),cyclo-(Ala-Val)(5),homogentisic acid(6)。化合物1对白菜黑斑病菌、苹果腐烂病菌和葡萄炭疽病菌的抑制率分别为91.8%、89.1%和90.6%,大于阳性对照;对番茄灰霉病菌和黄瓜枯萎病菌的抑制率为86.6%和84.3%,与阳性对照相当;对供试的4种细菌都有很强的抑制作用,整体效果优于阳性对照。本研究为研制新型微生物来源的杀菌剂和植物病害的防治提供了理论依据。     

1株抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌放线菌的鉴定及其代谢产物活性分析

【目的】对从原始森林土壤中分离得到的1株抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的放线菌AF1进行分类鉴定,并对其代谢产物活性进行分析。【方法】通过菌株形态学特征、生理生化特征观察和16SrDNA序列分析,对AF1菌株进行分类鉴定;采用琼脂平板打孔法,测定AF1菌株发酵产物的稳定性及AF1菌株发酵产物乙酸乙酯粗提物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌活性。【结果】电子显微镜观察显示,AF1菌株分生孢子直或呈波浪弯曲状,孢子链呈松散螺旋状,AF1菌株能利用葡萄糖、D-半乳糖、麦芽糖、鼠李糖和蔗糖,不能利用D-果糖、D-甘露醇和肌醇,可以水解淀粉但不能水解纤维素。AF1菌株16SrDNA序列全长1 242bp(GenBank ID:KF059834.1),与加利利链霉菌XSD-102(Streptomyces galilee XSD-102)的相似度为100%,初步确定菌株AF1为加利利链霉菌(S.galilee);AF1发酵产物对外界环境不敏感,在30~80℃下活性稳定,90℃处理60min时活性丧失,在pH 2~10下活性稳定,耐受紫外线照射;其乙酸乙酯提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的最低抑菌质量浓度(MIC)为68μg/mL。【结论】AF1菌株为加利利链霉菌(S.galilee),其代谢产物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌具有抗菌活性。     

一株缬草根际稀有放线菌的分离鉴定及其天然产物生物合成基因的筛查

采用梯度稀释涂布平板法分离缬草根际土壤中的放线菌,从高氏一号培养基上分离得到1株放线菌BJA-103,对该菌形态特征、培养特征、生理生化特征及16SrDNA基因序列进行鉴定,并用简并PCR方法对其多种天然产物生物合成关键酶基因进行筛查。经分类鉴定,初步确定BJA-103为Amycolatopsis coloradensis的一个菌株;PCR筛查结果显示,该菌株含有非核糖体肽合酶(NRPS)、Ⅰ型聚酮合酶(PKS-Ⅰ)、Ⅱ型聚酮合酶(PKS-Ⅱ)以及糖肽类抗生素合成关键酶P450单加氧酶的基因。