改良格拉纳达培养基分离奶牛乳房炎奶样中无乳链球菌的效果评价

[目的]探索一种适合奶牛乳房炎奶样中无乳链球菌高效分离、鉴定的培养基,对格拉纳达培养基(Granada medium)进行改良,用其分离奶牛乳房炎奶样中无乳链球菌,并进行效果评价.[方法]改良格拉纳达培养基(Modified Granada medium,MGM)的成分为示蛋白胨、玉米淀粉、葡萄糖、丙酮酸钠、盐酸半胱氨酸、硫酸镁、对氧氮己环丙磺酸(MOPS)、磷酸氢二钠、甲氨蝶呤钠、结晶紫和琼脂粉.用MGM、改良爱德华培养基(Modified Edwards Medium,MEM)和血琼脂(Blood Agar,BA)三种培养基对187份奶牛隐性乳房炎奶样进行无乳链球菌分菌培养,采用PCR方法鉴定分离菌株,从而评价三种培养基在分离奶样中无乳链球菌的特异性和敏感性.[结果]在乳房炎无乳链球菌分离中,MGM、MEM和BA的特异性分别为100; 、75.0;和18.2;,敏感性分别为88.0;、53.2;和29.1;.MGM作为选择、鉴定培养基,利用无乳链球菌产生红-橙色色素的特性,通过肉眼观察菌落颜色,一步程序就可以鉴定出无乳链球菌.[结论]该方法为奶牛乳房炎奶样中无乳链球菌的分离提供了一种快捷、简便的新方法.     

奶牛乳房炎无乳链球菌的分离鉴定与特异、快速检测方法

[目的]了解新疆奶牛乳房炎病例中无乳链球菌的感染状况和生物学特性,建立特异、快速检测方法.[方法]采集新疆4个不同地区规模化奶牛场乳房炎奶样,分别用鉴别培养基和绵羊血琼脂平板进行无乳链球菌分离培养、形态学观察、生化试验、PCR鉴定、致病性和常用抗生素敏感性试验.[结果]从检测出的139份乳房炎阳性奶样中分离出无乳链球菌24株.所分离菌株培养特性与生化反应符合该菌特性;依据无乳链球菌16S rRNA基因序列设计引物扩增所得PCR产物在405 bp处出现特异性条带;分离菌株对青霉素、氯霉素、庆大霉素、红霉素、万古霉素、克林霉素、头孢西丁、环丙沙星均敏感,对四环素、强力霉素、复方新诺明耐药.[结论]Granada选择性培养基培养和PCR扩增均可用于乳房炎奶样中无乳链球菌的特异、快速鉴定;新疆乳房炎奶样中无乳链球菌感染率为17.27;.     

奶牛乳房炎的发生、分类与防治措施

乳房炎是奶牛经常发生的疾病,是造成奶牛生产经济损失的重要原因之一。奶牛业发达的美国现在有1100万头泌乳牛,患有隐性乳房炎的达50%。我国北京、上海等地调查,隐性乳房炎发病率在60%左右,2003年东北农业大学在哈尔滨郊区进行了隐性乳房炎的调查,发病率高达75%,造成的损失每头患病牛每年1526.25元。乳房炎的病原体有80～130多种,其中主要的病原为无乳链球菌、停乳链球菌、金黄色葡萄球菌、霉形体、乳房链球菌、大肠杆菌等。奶牛乳房炎分为急性型、慢性型和隐性乳房炎。急性型乳房炎特征是乳房红、肿、热、硬、痛,乳汁显著异常,奶量减少,体…     

简述奶牛乳房炎的防治

1病因 引起乳房炎的主要原因是牛舍不卫生,挤奶不卫生、不规范,乳头损伤等多种因素导致的细菌感染。根据实际发病奶牛的调查统计,引起乳房炎的病原主要有金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、化脓杆菌、产气荚膜杆菌等。     

奶牛隐性乳房炎乳房链球菌巢式PCR检测方法的建立

为研究巢式PCR检测奶牛隐性乳房炎链球菌的灵敏度,以本实验室从新鲜奶样中分离并经过生理生化鉴定的乳房链球菌、无乳链球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌为研究对象,提取细菌DNA,采用巢式PCR技术,根据细菌16S rRNA序列保守区设计通用引物进行第1次PCR扩增,再在乳房链球菌16S rRNA保守区内的可变区设计特异引物对4种病原菌进行第2次PCR检测。结果表明：巢式PCR技术能检测出乳房链球菌16S rRNA保守区的可变区序列,与生理生化鉴定结果一致。该方法能快速有效检测出奶牛隐性乳房炎乳房链球菌。     

四川部分地区奶牛源无乳链球菌的分离鉴定、毒力基因检测及耐药性分析

为了解四川部分地区奶牛源无乳链球菌的毒力因子、感染及耐药情况,对2017-2019年采集的313份临床型奶牛乳房炎乳样进行病原菌分离培养,采用K-B纸片扩散法和PCR法对分离的无乳链球菌进行药敏试验、荚膜分型、毒力基因和耐药基因检测。结果表明,313份乳样共分离到105株无乳链球菌,分离率为33.55%,分离菌株的荚膜全部为Ia型。药敏结果显示,分离菌株对氨基糖苷类药物敏感,对β-内酰胺类药物耐药,耐药基因检测结果也与表型一致。毒力基因检测结果显示,除bac和lmb基因未检测到,cfb、cylE、fbsA、fbsB、hylB和α-enolase基因检出率为100%。结果表明,四川不同地区分离的无乳链球菌荚膜分型一致,并且具有相似的药物敏感性和毒力因子。     

奶牛乳房链球菌的分离鉴定及药敏试验

为了更好地了解青海尖扎县地区奶牛乳房炎乳房链球菌的耐药状况,提出有针对性的治疗方案,缓解奶牛乳汁药物残留问题.通过分离纯化培养和生化鉴定试验得到3类奶牛乳房炎链球菌,并对其中的8株乳房链球菌进行20种药物敏感性试验.结果显示,青海尖扎县地区奶牛乳房炎乳房链球菌阿洛西林、氨苄西林、氯霉素、氟苯尼考、红霉素和阿奇霉素高度敏...     

应用PCR技术检测患乳房炎奶牛生乳中的无乳链球菌

以无乳链球菌特异性STRA-Agl-23-1D基因序列为模板,设计、合成了一对引物,运用PCR技术从12个患有奶牛乳房炎的奶牛奶样中扩增得到9个大小为360 bp的DNA产物;阴性样品中未扩增到产物。测定了其中2个DNA片段的核酸序列,确定为无乳链球菌的STRA-Agl-23-1D基因。     

奶牛乳房炎新疗法

将病牛保定于六栏柱内,在患侧术部用剪刀剪除牛毛,面积为6厘米×4厘米,然后用5％碘酊和70％酒精消毒。局部麻醉后,在患侧髋关节与股关节之间的三角区最凹部,用手术刀切成1～2厘米长的纵向切口,以切透皮肤为宜。然后用     

奶牛隐性乳房炎乳房链球菌16S rRNA的序列分析

为奶牛隐性乳房炎主要致病菌的检测提供参考,对采集于蒙自市奶牛养殖户的10头疑似乳房炎患病奶牛新鲜奶样20份,采用传统细菌分离鉴定方法和PCR技术鉴定奶牛隐性乳房炎的链球菌。结果表明:从传统方法分离菌中提取DNA,经PCR扩增测序为1 541bp,与GenBank数据库中收录的乳房链球菌(登录号:JF896457.1)的序列相似性达80.8%,且与Streptococcus uberis USC71-LHICA菌株的亲缘关系最近,相似性达100%,由此表明,分离菌为乳房链球菌。与传统的细菌培养方法确定细菌种类相比,PCR方法检测具有快速、准确、灵敏度高等特点。     

中药制剂对奶牛隐性乳房炎金黄色葡萄球菌和无乳链球菌抑菌试验（英文）

[目的]研究中药制剂对奶牛隐性乳房炎金黄色葡萄球菌和无乳链球菌的抑菌效果。[方法]根据中兽医学理论和中药特性,组成复方中药制剂＂增乳健牛散＂4种不同的方剂,制备水煎液对奶牛乳房炎的主要病原菌进行抑菌试验。[结果]4种不同的方剂水煎液都有抑菌效果;对金黄色葡萄球菌和无乳链球菌,方剂3为极敏,其他3种不同的方剂为高敏;方剂3抑菌作用最强。[结论]该研究为治疗奶牛隐性乳房炎相关中草药方剂的开发提供了理论依据。     

奶牛临床型乳腺炎的药物治疗试验

根据药敏试验结果选择了抗菌活性强的乳酸环丙沙星、头孢氨苄、头孢三嗪和硫酸丁胺卡那霉素 (硫酸阿米卡星 )等药对 186例临床型乳腺炎进行临床治疗试验。结果 ,总有效率乳酸环丙沙星组为 87.0 % ,头孢氨苄组为 92 .1% ,头孢三嗪组为86 .7% ,硫酸丁胺卡那霉素组为 98.5 % ;痊愈率也以硫酸丁胺卡那霉素组最高为 86 .2 %。     

奶牛乳房炎的防治技术

对奶牛乳房炎的发病原因、发病特点、临床症状、防治措施进行了总结,为该病的预防及治疗提供参考。     

不同品系罗非鱼抗无乳链球菌病性能的评估

[目的]为罗非鱼的养殖提供技术参考.[方法]对吉富罗非鱼P0代和抗病选育P2代、奥尼罗非鱼、尼罗罗非鱼及奥利亚罗非鱼进行人工感染无乳链球菌,评估不同品系罗非鱼的抗无乳链球菌病性能.[结果]从感染死亡率来看,奥尼罗非鱼的抗病性能优于其他品系,各组的感染死亡率大小依次为吉富罗非鱼P0代＞尼罗罗非鱼＞奥利亚罗非鱼＞吉富罗非鱼抗病P2代＞奥尼罗非鱼.其中,吉富罗非鱼抗病P2代的死亡率比Pn代降低45.3％,与奥尼鱼的死亡率相近.从死亡历时来看,吉富罗非鱼抗病选育P2代在感染后48 h才出现死亡,而其他组均在感染后24 h内出现死亡.[结论]通过针对性选育能有效提高吉富罗非鱼的抗病性能,同时也为在罗非鱼苗种投放时品种的选择提供参考依据.     

奶牛乳房炎主要致病菌在牛奶中的分布

[目的]观察奶牛乳房炎主要致病菌在牛奶中的分布情况。[方法]在牛奶中添加一定量的乳房炎致病菌金黄色葡萄球菌或大肠杆菌,于4℃分别静置8、12和24 h,牛奶被分割成上、中、下3等份。采用平板菌落计数法测定各部分牛奶中的细菌数。[结果]两种致病菌菌落数在牛奶中从下到上呈现上升趋势,且上部牛奶中的菌落数显著高于中、下部（P〈0.001）,中部与下部差异不显著。[结论]奶牛乳房炎致病菌经乳头管侵入后可以随牛奶中的脂肪滴上浮,进而侵入到乳腺的深层组织。     

牛源无乳链球菌CAMP因子(cfb)的克隆及原核表达

提取能产生CAMP反应的牛源无乳链球菌山东分离株的基因组DNA,PCR扩增CAMP因子基因,重组到pMD18-T载体中.测序结果表明,扩增片断含有768 bp的ORF,可编码含255个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的无乳链球菌CAMP因子蛋白的氨基酸组成相比, 第8位Tyr→Cys,第95位Pro→Ser,第126位Thr→Ala的3个氨基酸发生了点突变,同源性为98.4;.成功构建原核表达载体pET32a+/cfb,SDS-PAGE分析蛋白质表达水平,IPTG诱导后表达的融合蛋白分子量为48 kD,表达量占菌体总蛋白的52.7;.这为进一步研究其致病与免疫机理、疫苗设计提供了条件.     

罗非鱼无乳链球菌拮抗菌的分离、鉴定及多样性分析

采用径向扩散法筛选对罗非鱼致病性无乳链球菌具有拮抗作用的益生菌,利用16S r DNA对拮抗菌进行鉴定,构建系统发育树对拮抗菌的多样性进行分析,并通过腹腔注射法测定其对罗非鱼的安全性。结果表明,从8个采样点共分离细菌1 759株,其中59株对无乳链球菌具有较强的拮抗作用,抑菌圈直径为10.6mm~30.8 mm,平均21.9 mm;16S r DNA分子鉴定及系统进化树分析显示,59株拮抗菌分为5属8个种,其中芽孢杆菌属(Bacillus)45株、假单胞菌属(Pseudomonas)5株、肠球菌属(Enterococcus)2株、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)2株和葡萄球菌属(Staphylococcus)5株。鱼体安全性试验显示,有22株拮抗菌对罗非鱼不具有致病性,可作为防治罗非鱼无乳链球菌病的备选菌株。     

测定无乳链球菌灭活疫苗浓度的分光光度法

以无乳链球菌灭活疫苗为研究对象,利用分光光度计建立了快速准确测定该灭活疫苗浓度的方法.研究结果表明,波长为600 nm处无菌生理盐水及稀释后的无乳链球菌灭活疫苗均无特征吸收峰,吸光度变化平缓,此时无乳链球菌灭活疫苗的吸光值（X）与其浓度（Y）呈正相关（r =0.998 3,df=6,P＜0.01）,其关系曲线为：y=11.277x-2.022 9.无乳链球菌菌液经φ=0.4％甲醛灭活3h的A600值基本稳定;选择4名实验员对该方法进行重复检测,结果显示所测疫苗A600值的RSD为0.5％ ～1.2％,且符合上述相关性方程;说明利用分光光度计法测定经甲醛灭活的无乳链球菌疫苗浓度,其结果较准确、重复性较好,具有简单快速的特点.