南美白对虾多酚氧化酶的提取及其性质研究

以南美白对虾为对象,研究了多酚氧化酶(PPO)分离提取工艺及其生化特性。在单因素试验基础上,采用响应面试验优化了料液比、提取液pH值和浸提时间等因素提取南美白对虾PPO的工艺,并对PPO的生化性质进行分析。结果表明:液料比为2∶1、提取液体系pH值为8.0、浸提时间为3 h等条件下,提取的PPO具有最大酶活力为94.8 A/min·mL,所得回归模型显著(P0.0001),方程拟合性好(R~2=0.9762),可用于预测南美白对虾中PPO的提取;PPO酶促反应动力学方程符合米氏方程,米氏常数K_m为30.322 mmol/L,V_(max)为0.281 A/min。PPO性质研究将为南美白对虾黑变抑制提供理论指导。     

鸭梨果肉多酚氧化酶的活性研究与纯化

对鸭梨(Pyrus bretschneideri Rehd.)果肉多酚氧化酶的活性进行研究并对其进行纯化。以鸭梨果肉为试材,采用邻苯二酚为底物测定氧化产物的方法,就pH值、温度、热稳定性、抑制剂、不同成熟期及果肉不同部位等因素对PPO活性的影响进行了研究;酶粗提液经30%硫酸铵沉淀去杂和80%饱和度硫酸铵析出、Sephadex G200柱层析及HiPrepTM16/10 QXL离子柱层析等步骤进行了纯化,经SDS-PAGE进行了验证。结果表明:鸭梨果肉中的PPO最适pH值为6.4;最适温度为25℃;20～25℃时热稳定性较高;不同成熟期的活性不同;34 mmol/L的NaCl为较好的抑制剂;果肉近果心处活性最高,中部活性最低。经纯化,获得均一的PPO,分子量约43 kD。为鸭梨果肉PPO的性质研究以及控制梨果PPO酶促褐变提供了依据。     

香蕉果肉过氧化物酶初步纯化及特性研究

[目的]为控制香蕉POD引起的酶促褐变提供理论依据。[方法]采用饱和度70%硫酸铵盐析和DEAE-Toyopearl 650M离子交换柱层析分离纯化果肉POD,测定香蕉酶液中POD活性和蛋白质含量。[结果]香蕉提取酶液中POD被纯化了约7.3倍,回收率为33.8%。香蕉果肉POD对愈创木酚的Km值为5.98 mmol/L,其最适pH值为6.5,pH值稳定性为pH 6.0~10.0,最适反应温度为35℃。盐酸-L-半胱氨酸、抗坏血酸能显著地抑制香蕉果肉POD的活性,亚硫酸氢钠、植酸、柠檬酸也能有效地抑制该酶活性;而Cu2+对香蕉果肉POD则有明显的激活作用。[结论]香蕉果肉POD的热稳定性低于香蕉PPO热稳定性,其有效的化学抑制剂与香蕉PPO基本一致。     

马铃薯多酚氧化酶的分离纯化及酶学特性研究

为控制马铃薯在贮藏和加工过程发生的酶促褐变,对马铃薯多酚氧化酶进行分离纯化,并研究其酶学特性。采用缓冲液提取、低温离心得到马铃薯多酚氧化酶(PPO)粗酶液,粗酶液经硫酸铵分级盐析、Sephadex G-25分子凝胶柱层析脱盐处理、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析和Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析分离纯化得到马铃薯PPO,进一步对其部分酶学特性进行研究。结果显示：纯化后的马铃薯PPO其比活力为283.0 U·mg^-1,回收率为16.8%,纯化倍数为18.6倍;该酶最适反应温度为30℃,最适反应pH为6.5;以邻苯二酚为底物时,最适底物浓度为50 mmol·L^-1。该酶对焦性没食子酸、间苯二酚的底物亲和性较强,对4-甲基儿茶酚、咖啡酸、没食子酸、对苯二酚、邻苯二酚、绿原酸的底物亲和性较低,对N-BOC-酪胺、愈创木酚亲和性很低。     

木薯叶多酚氧化酶的提取及其酶学性质研究

以木薯叶为原料,研究木薯叶多酚氧化酶PPO的最佳提取条件与酶学性质。结果表明,木薯叶PPO 的 最佳提取条件为磷酸缓冲液PBS的pH 值6.8料液比4 mL/g提取时间6 h;木薯叶PPO 酶促反应产物在399 nm 处有最大吸收峰,以邻苯二酚为底物的酶促反应的米氏常数Km=0.8 mol/L动力学方程为V=2000[S]/0.8+[S]该酶最 适温度为37益,最适pH 值为7.0。     

枯草芽孢杆菌WHNB 02植酸酶的酶学性质研究

从118份样品中分离到1株产植酸酶的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis WHNB 02),其发酵液经乙醇沉淀、硫酸铵分级沉淀及Sephadex G-100柱层析等步骤后分离纯化了该酶,纯化倍数约为31.5倍,回收率为13.0%.该酶为单体酶,SDS-PAGE测得的分子量约为43 KD,以植酸钠为底物的Km值为0.5 mmol/L,酶反应的最适温度为60℃,80℃作用10 min酶活保存61%,最适pH为7.0,在pH 6.0～10.0范围内稳定,酶活性及稳定性都需Ca2+存在.ED-TA,Mn2+,Ba2+(5 mmol/L)对酶活具有很大的抑制作用.     

龙井43号多酚氧化酶同工酶酶学性质研究

以龙井43号[Camellia sinensis(L.)O.Ktze.cv.Longjing 43]鲜叶为材料,经分离纯化获得多酚氧化酶-同工酶(PPOⅡ),对其部分酶学性质进行了研究。结果表明,PPOⅡ最适反应pH为6.0;抑制剂抗坏血酸、亚硫酸钠和L-半胱氨酸对PPOⅡ的抑制作用随抑制剂浓度的增加而增强;Cu~(2+)浓度在0.25×10-7mol/L时,PPOⅡ活性最高;PPOⅡ的Km为13.05 mmol/L,v_(max)为0.019 OD_(460)/min。     

南烛叶多酚氧化酶最适提取条件的研究

[目的]深入探讨南烛叶多酚氧化酶(PPO)的酶学性质,对南烛叶PPO的最适提取条件进行研究。[方法]以南烛叶为原料,分别研究了交联聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)添加含量、料液比、浸提时间和p H各因素对其提取的PPO酶活的影响。[结果]试验表明,适量南烛叶粉末,以料液比1∶15 g/m L,加入含9%PVPP(W/V)p H 7.6的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液(0.1 mol/L),匀浆并于4℃下浸提9 h,过滤,滤液经冷冻离心(4℃,12 000 r/min,20 min)后得到酶活最高的PPO酶液(11 335 U/m L)。[结论]研究结果可为促进南烛叶的工业化应用提供参考。     

青香蕉多酚氧化酶的提取工艺研究

基于青香蕉组织致密性及多酚氧化酶(PPO）存在形式与成熟香蕉差别较大的特点,以PPO 比活力为考 察指标,研究缓冲液种类、离子强度、pH 值、液料比、聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP）、吐温-80(Tween 80）、浸提时间、提取 次数对孕孕韵提取效果的影响。获得最佳提取工艺条件：0.05 mol/L、pH 6.0 的磷酸缓冲液,内含5%的PVPP 和1%的 Tween 80,液料比1.5颐1(灾/宰）,10 000 r/min 匀浆机打浆20 s,4益以10 000 r/min 离心30 min,残渣重复提取1 次,上 清液即为粗酶液,酶比活力为1 574.06 U/mg。     

中华圆田螺纤维素酶提取及纯化工艺的优化

以中华圆田螺(Cipangopaludina cahayensis)为原料提取纤维素酶,采用均匀设计优化提取工艺,并采用硫酸铵沉淀法初步纯化酶液.结果表明,中华圆田螺纤维素酶提取最佳工艺为缓冲液pH 4.8、浸提时间12 min、离心时间24 min;采用饱和度45％的硫酸铵沉淀法纯化酶液,所得酶液的总酶活和比活力最高,分别为651.01 U和34.099 U/g.