发生培养基中添加孕酮对牛体外受精卵发育的影响

通过在发生培养液中添加孕酮以研究外源性孕酮对牛体外受精卵发育的影响。结果表明,适量添加孕酮有助于胚胎的体外发育。其中,10ng/ml孕酮添加组的8细胞胚胎发生率(55％)极显著高于对照组(39.0％)(P<0.01);囊胚发生率(18.9％)亦显著高于对照组(9.6％)(P<0.05)。但这种促进作用是通过混合培养系统中的颗粒膜细胞得以实现的。本试验未发现孕酮对胚胎是否产生直接作用。     

不同培养液对昆明小鼠体外受精率及早期胚胎体外发育的影响

在TYH受精液中添加促卵泡素（FSH）和苯甲酸雌二醇（E2）,检测不同浓度的FSH和E2对昆明小鼠的体外受精率的影响;检测在M16、CZB两种培养液中添加胎牛血清（FCS）与否对昆明小鼠早期胚胎体外发育的影响．结果表明：在．rYH中添加1．0IU／mL FSH,受精率和2-细胞胚率显著高于对照组;在TYH中添加0．1μg／mL E2,受精率和2-细胞胚率也显著高于对照组．在CZB中添加体积分数为10％FCS,可显著减少2一细胞期体外发育阻断,并显著提高小鼠胚胎体外发育的囊胚率,可见,以TYH添加1．0IU／mL FSH和0．1μg／mL E2为受精液,以含体积分数为10％FCS的CZB为胚胎培养液,小鼠胚胎可获得较高的囊胚率．葡萄糖并不是小鼠胚胎形成囊胚所必需的．     

小鼠桑椹胚玻璃化冷冻前后生物频谱处理对体外发育的影响

本试验利用周林频谱仪（WS－302）照射玻璃化冷冻前后小鼠桑椹胚,研究对其体外发育的影响,结果表明：胚胎在10％EG溶液中处理5min后移入EFS30中处理1min的二步法冷冻组,解冻后经照射5～20min后的胚胎发育率（95％～100％）与对照组（94％）比较无显著性差异（P＞0．05）。当在EFS40中处理1min的一步法冷冻组的胚胎,照射后发育率由对照组的54％提高到97％差异极显著（P＜0.01）。改用GFS40一步法冷冻的胚胎照射后的发育率也明显高于对照组（P＜0．05）。另外,对冷冻前胚胎进行照射,其解冻后发育率（87％）也得到了显著提高（P＜0．01）。     

海风藤酮对兔胚胎发育及PAF效应的影响

海风藤团为血小板激活因子PAF的特异性受体桔抗剂。用含20μg·mL-1海风藤酮的培养液培养兔2细胞胚胎144h,发育到等于或小于16细胞的胚胎比例为66．9％,对照组为13．5％（P＜0．025）。发育到襄胚和孵化囊胚的比例,对照组为39．9％,而试验组发育到囊胚的比例为2．7％（P＜0．001）,没有胚胎发育到孵化囊胚阶段。试验表明海风藤团对胚胎的体外发育有阻滞作用。试验还表明,兔胚胎可以释放PAF,海风藤国能明显抑制免胚胎培养液所引起的去牌鼠血小板数量下降的PAF效应。     

牛老化卵体外受精后的胚胎发育速度与细胞遗传学研究

体外成熟培养和牛老化卵受精后发育到囊胚到期速度减慢。囊胚期的发育率分别为22h培养组的35．3％,34h组23．6％,46h组15．4％,胚胎的发育速度随培养时间的延长而明显减慢（P＜0．05）。46h组的囊胚期胚胎的平均卵裂球数明显少于22h组（P＜0．05）,老化组的染色体平均分裂像,分裂指数均明显低于对照组（P＜0．05）。染色体异常发生率46h组高于22h组。     

过氧化氢和谷胱甘肽对延边黄牛体细胞克隆胚胎氧化损伤的影响

在延边黄牛体细胞克隆胚胎体外培养液中分别添加H2O2和GSH,观察重组胚体外发育情况,探究二者对延边黄牛体细胞克隆胚胎氧化损伤的影响.结果表明:不同时间添加H2O2时0～24 h组卵裂率显著高于其它组(P＜0.05),48 ～72 h组16细胞以上发育率显著低于其它处理组(P＜0.05).不同时间不添加H2O2时48～72 h组16细胞期以上发育率显著高于0～24 h组和24～ 48 h组(P＜0.05),24～48 h组显著高于0 ～24 h组(P＜0.05).不同时间添加GSH时0～24 h组和24 ～ 48 h组卵裂率显著高于对照组、48 ～72 h组和72～96 h组(P＜0.05),对照组16细胞以上发育率显著低于48 ～72 h组和72 ～96 h组(P＜0.05).结论:H2O2对延边黄牛体细胞克隆胚胎发育前期的氧化损伤较大,特别是在48 ～72 h.培养前期添加1 mmol/L的GSH能够有效提高延边黄牛体细胞克隆胚胎体外发育效率,缓解有害应激带来的氧化损伤.     

谷氨酰胺&#183;表皮生长因子对牛体外受精胚胎发育的影响

[目的]研究谷氨酰胺、表皮生长因子对体外受精胚8细胞以后发育的影响。[方法]通过对牛进行体外受精和受精卵体外培养,研究谷氨酰胺、EGF对牛胚胎体外发育的影响。[结果]添加谷氨酰胺的4-8细胞发育率和桑囊率（52.52%、30.22%）,都比对照组高,但差异不显著（P〉0.05）。联合添加谷氨酰胺和表皮生长因子的4-8细胞发育率（55.03%）比对照组高,但差异不显著（P〉0.05）;桑囊率（32.39%）比对照组（27.46%）高4.93百分点,且二者之间差异显著（P〈0.05）。联合添加谷氨酰胺和表皮生长因子组比单独添加谷氨酰胺组的4-8细胞发育率和桑囊率都高,但差异不显著（P〉0.05）。[结论]单独添加谷氨酰胺对早期胚胎的体外发育有一定的促进作用,联合添加谷氨酰胺和表皮生长因子对帮助牛胚胎通过体外发育阻滞期有良好的促进作用。     

小鼠胚胎切割取样后体外培养发育能力的研究

本文对小鼠胚胎切割取样细胞数量的多少，取样后胚胎在室温中停留时间以及透明带存留与否的体外发育情况进行了研究，目的在于为牛胚胎性别鉴定切割取样时供借鉴和探讨。实验中的胚胎依据切割取样的细胞数分１０个细胞以内和大于１０个细胞以上两个组。其体外培养发育率分别为９５．７％（６７／７０）和７６．２％（３２／４２），两者差异极显著（Ｐ＜０．０１）；其中晚期桑椹胚、早期羹胚、扩展囊胚的体外发育率分别为８７．７％（６４／７３）、８６．２％（２５／２９）、１００％（１０／１０），三者之间差异不显著（Ｐ＞０．０５）；培养前在室温下停留３～７ｈ和９ｈ的体外培养发育率分别为９４．８％（７３／７７）、５７．１％（２０／３５），两者差异极显著（Ｐ＜０．０１）；胚胎取样后透明带存留和脱失的体外培养发育率分别为８７．９％（５１／５８）和８３．３％（４５／５４），两者差异不显著（Ｐ＞０．０５）。     

牛体外受精卵5～10细胞期单一卵裂球染色体诊断

利用单一卵裂球的染色体诊断牛体外受精5－～10－细胞期胚胎的正常性。牛体外受精后5－～10-细胞期的胚胎用0．5％链霉蛋白酶处理分离单一卵裂球，然后用100ng/ml长春花碱处理10h，制作染色体标本。检查33枚不同发育期胚胎及卵裂球185个，有43．8％的可进行染色体分析（81／185）。结果表明，正常2倍体的发生率为46．9％，染色体异常的卵裂球中，单倍体的发生率为50．6％，显著高于多倍体（2．5％）的发生率（P＜0．001）。单倍体中含有X－性染色体和含有Y－性染色体的性比基本相同。引起单倍体发生的原因可能是由于卵母细胞的孤雌发育或受精过程中精子穿入未成熟卵后由雄性原核产生。     

牛磺酸对牛体外受精早期胚胎发育的影响

研究了牛体外受精后早期胚胎体外发育时向其基础培养液中加入牛磺酸对胚胎桑椹胚率、囊胚率和孵化囊胚率的影响。试验一：以TCM-199＋10％FBS为基础培养液（对照组），再加入7、14mmol／L的牛磺酸（试验组），试验组与对照组的桑椹胚率分别为48．1％、47．4％和43．2％；囊胚率分别为26．4％、22．3％和21．0％；孵化囊胚率分别为21．8％、18．7％和0％。试验二：IVF后2细胞、4～8细胞及8～16细胞期，在基础培养液中分别添加7mmol／L的牛磺酸时，桑椹胚率分别为48．7％、57．1％、52．0％，囊胚率分别为25．1％、30．7％、27．9％，孵化囊胚率分别为25．9％、28．6％、25．0％；而添加14mmol／L牛磺酸组时，桑椹胚率分别为50．4％、56．4％、55．4％，囊胚率分别为26．5％、31．3％、27．7％，孵化囊胚率分别为27．5％、31．1％、29．9％。结果表明，体外发育培养液中添加7mmol／L牛磺酸可显著提高桑椹胚率和囊胚率（P〈O．05），并且在4～8细胞期添加14mmol／L牛磺酸最为合适。     

兔胚胎玻璃化冷冻的研究

探讨用玻璃化冷冻法保存兔胚胎的效果．结果表明,兔早期囊胚在0．5M海藻糖（93．8％）溶液中的存活率显著高于0．5M蔗糖组（70．0％,P〈0．05）．对照组与不同浓度甘油处理间兔胚胎存活率均差异不显著（P〉0．05）．分别用不同浓度乙二醇玻璃化冷冻兔胚胎,解冻回收后正常胚胎数和囊胚孵化率,对照组与10％,20%EG组之间均差异不显著（P〉0．05）,但对照组,10％,20％EG组均显著高于30％EG组（P〈0．05）．解冻回收后正常胚胎数体内胚胎组（79．4％）显著高于体外胚胎（54．1％,P〈0．05）,囊胚孵化率2组之间差异不显著（P〉0．05）．缓慢冷冻法与玻璃化冷冻法之间胚胎解冻回收后正常胚胎数和囊胚孵化率均差异不显著（P〉0．05）．     

外源褪黑素对牛卵母细胞体外成熟的影响

 【目的】探索外源褪黑素（melatonin,MT）处理对牛卵母细胞体外成熟的影响从而优化牛体外胚胎生产体系。【方法】在牛卵母细胞成熟过程中添加不同浓度的MT,观察并统计其体外受精后胚胎的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数。应用放射免疫分析法检测血清、卵泡液和成熟培养液内MT与孕酮（P）、雌激素（E2)、促卵泡素（FSH）、促黄体生成素（LH）水平的变化并检测卵母细胞的活力和活性氧（ROS）的浓度。【结果】存在于牛卵泡液中的MT浓度与血清中的相近,添加10-11 mol•L-1 MT组的P浓度（2.01±0.33）ng•mL-1显著高于对照组（（0.87±0.10）ng•mL-1,P＜0.05）。与对照组（（67.32±7.30）%）相比,10-9 mol•L-1 MT组卵裂率显著提高（（77.81±7.06）%,P＜0.05）,并能提高囊胚率且囊胚细胞数（（29.61±9.55）%,（90.30±28.74）个）,显著高于对照组（（19.64±9.22）%,（75.07±25.98）个,P＜0.05）;同时,10-9 mol•L-1 MT组卵母细胞的活力高于对照组,并能降低卵母细胞内的ROS含量但没有显著差异（P＞0.05）。【结论】牛卵泡液中存在MT,适当浓度的外源MT能促进牛卵母细胞体外成熟。     

氧分压、培养基及生长因子对猪体细胞克隆胚胎体外发育的影响

【目的】建立高效的猪体细胞克隆胚胎的体外培养体系。【方法】比较了克隆胚胎体外培养过程中高、低氧分压（20% O2和7% O2）和2种培养基（NCSU-23和 PZM-3）及添加表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维促进因子（bFGF）对胚胎的囊胚发育率及囊胚细胞数的影响。【结果】（1）与高氧（20% O2）气相相比,低氧（7% O2）条件下NCSU-23显著提高了胚胎的囊胚率和细胞数（P＜0.05,13.7% vs. 8.2%;46.3 vs.31.0）,培养基PZM-3只能显著提高囊胚细胞数（P＜0.05,49.4 vs. 36.6）;（2）与NCSU-23相比,PZM-3无论在高氧还是低氧条件,囊胚率和囊胚细胞数都较高;（3）NCSU-23中添加10 ng•ml－1 EGF或bFGF对胚胎的囊胚发育率（P＜0.05,25.5%,31.7% vs. 15.1%）有显著提高,但不能提高囊胚细胞数。【结论】低氧条件有利于胚胎的早期发育;PZM-3无论在高氧还是低氧条件下,都是胚胎发育的一个效果稳定、高效的培养基;胚胎培养基中添加EGF或bFGF能提高胚胎的囊胚发育率。     

Roscovitine同期化供核细胞对猴—猪异种核移植胚胎发育的影响

[目的]探讨Roscovitine同期化供核细胞对食蟹猴—猪异种体细胞核移植胚胎体外发育的影响,为提高灵长类的核移植效率奠定基础.[方法]活体采集4岁雄性食蟹猴的耳组织,经组织块培养获得纯化的食蟹猴耳成纤维细胞,细胞经固定、染色后用流式细胞仪分析细胞周期分布.以不同同期化方法处理的食蟹猴耳纤维细胞为供体细胞,以体外成熟、去核的猪卵母细胞为受体细胞,利用电融合法构建食蟹猴—猪异种核移植胚胎,观察异种核移植重构胚胎的体外发育情况.[结果]以15 μmol/L Roscovitine处理食蟹猴耳成纤维细胞24、48、72 h获得的G0/G1期细胞比率分别为76.51％、89.69％和90.49％,其中处理48和72h的G0/G1期细胞比率显著高于对照组（P＜0.05）.血清饥饿、接触抑制72 h同期化获得的G0/G1期细胞比率分别为91.12％和90.46％.Roscovitine同期化处理食蟹猴耳成纤维细胞48 h可有效提高食蟹猴—猪异种核移植重构胚胎的囊胚形成率（15.05％）,显著高于血清饥饿同期化处理和接触抑制同期化处理的效果（P＜0.05）.[结论]Roscovitine可有效同期化食蟹猴耳成纤维细胞在G0/G1期,最终提高食蟹猴—猪异种核移植重构胚胎的囊胚形成率.     

中草药添加剂对鸡蛋胆固醇含量的影响

采用红曲、金银花、杜仲、水飞蓟、山楂等中草药组成复方制剂添加于蛋鸡日粮中观察对鸡蛋胆固醇含量的影响。将试验蛋鸡随机分为3组，每组4个重复，试验期5周，试验I组添加500mg/kg，试验Ⅱ组添加250mg/kg中草药制剂，对照组不添加。结果表明：①日粮中添加中草药制剂蛋黄胆固醇浓度（mg/g蛋黄）I、Ⅱ组比对照组分别降低25．4％（P＜0．01）和17．4％（P＜0．05）；②I、Ⅱ组极显著降低了蛋鸡血浆总胆固醇（P＜0．01）、LDL－C（P＜0．01）和VLDL（P＜0．01）水平，提高了HDL－C（P＜0．01）水平；③中草药制剂明显改善了鸡蛋脂肪组成：亚油酸含量（％）I、Ⅱ组比对照组分别提高24．2％（P＜0．01）和17．1％（P＜0．05），亚麻酸含量（％）I、Ⅱ组比对照组分别提高44％（P＜0．01）和36％（P＜0．01）；④3组之间料蛋比无明显差异，但试验组显著降低了产蛋率（P＜0．05），I组有进一步降低产蛋率趋势。试验研究证明，中草药制剂具有显著降低鸡蛋胆固醇含量，改善脂肪成分的作用。建议日粮中用量为250－500mg/kg。     

早期断奶仔猪日粮中添加糖萜素对生产性能的影响

在早期断奶仔猪日粮中，添加糖萜素的试验1组和添加喹乙醇的试验2组，与不添加的对照组相比，试验全期日增重，料重比差异极显著（P＜0．01）；试验1组与试验2组差异显著（P＜0．05），试验1组与试验2组经济效益分别比对照组提高14％和8％。试验1组又高于试验2组6个百分点。     

半胱胺对山羊瘤胃微生物体外发酵的影响

利用来自4头装有永久性瘤胃瘘管本地成年山羊的瘤胃液，以0．7g草粉和0．3g精料（由70％玉米＋30％豆粕组成）为底物，在体外厌氧条件下，研究了不同浓度的半胱胺（10mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L和500mg/L)对瘤胃微生物体外发酵的影响。结果表明：当培养液中半胱胺浓度为50mg/L时，培养液中氨氮浓度比对照组降低5．7％（P＜0．05），而微生物蛋白浓度、总挥发性脂肪酸浓度、丙酸比例和体外发酵总产气量分别比对照组提高66％（P＜0．05）、56％（P＜0．05）、6％（P＜0．05）和11．4％（P＜0．05），发酵总产气量和总挥发性脂肪酸浓度开始高于对照组，微生物蛋白在发酵5h后开始高于对照组。结果显示，半胱胺可促进山羊瘤胃微生物发酵。     

不同剂量甘露寡聚糖对鸡细胞免疫和肠道微生态的影响

45只1日龄海兰褐壳蛋鸡雄性雏鸡随机分成3组（Ⅰ、Ⅱ组分别在千克基础日粮中含甘露寡聚糖2、4g,Ⅲ组为对照组）,试验期42d．结果表明,Ⅱ组鸡的白细胞吞噬率和PHA淋巴细胞转化率（27．6％,47．8％）与Ⅲ组（23．6％,43．8％）相比差异极显著（P＜0．01）;Ⅱ组鸡的白细胞吞噬率与Ⅰ组（25．3％）比较差异显著（P＜0．05）．Ⅰ组鸡白细胞吞噬率（25．3％）显著高于Ⅲ组（23．6％）（P＜0．05）,PHA淋巴细胞转化率（47．1％）极显著高于Ⅲ组（43．8％）（P＜0．01）．Ⅱ组鸡盲肠大肠杆菌数（9．001亿）、盲肠和回肠内容物pH值（6．137、5．097）都极显著低于Ⅲ组（9．412亿,6．66、6．08）（P＜0．01）;Ⅰ组鸡盲肠大肠杆菌数（9．164亿）显著低于Ⅲ组（9．412亿）（P＜0．05）,盲肠和回肠内容物pH值（6．253、5．258）都极显著低于Ⅲ组（6．667、6．08）（P＜0．01）．测试的各项指标除白细胞吞噬率外,Ⅰ组和Ⅱ组之间均无显著差异．日粮中添加甘露寡聚糖能显著提高鸡的细胞免疫功能,能通过改善肠道内环境,显著降低大肠杆菌数,促进有益的乳酸菌生长,降低场内容物的pH值．添加高剂量甘露寡聚糖对鸡肠道微生态的调节作用没有明显的累加效应,说明了肠道微生态的平衡在正常情况下具有一定程度的?     

血管内皮生长因子对水牛卵母细胞体外受精的影响

[目的]探讨血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）对水牛卵母细胞体外受精的影响,为优化水牛卵母细胞体外培养体系及提高水牛体外胚胎生产效率奠定基础.[方法]以带有3层以上卵丘细胞的卵丘—卵母细胞复合体（COCs）为材料,分别在水牛卵母细胞体外成熟液和受精液中添加重组人VEGF165,研究VEGF对水牛卵母细胞体外成熟、体外受精和早期胚胎发育的影响.[结果]在成熟液中添加10ng/mLVEGF,水牛卵母细胞的第一极体排出率由57.3％提高到72.3％,差异显著（P＜0.05,下同）;体外受精后的受精卵分裂率由41.0％显著提高到53.3％.在受精液中添加10 ng/mL VEGF,水牛体外受精的受精卵分裂率由41.9％提高到63.0％,差异极显著（P＜0.01,下同）,囊胚形成率由17.0％显著提高到32.6％.在成熟液和受精液中同时添加10ng/mLVEGF,水牛体外受精的受精卵分裂率和囊胚形成率由43.4％和19.0％极显著提高到64.3％和27.2％,囊胚细胞数由89.5显著提高到106.8.[结论]VEGF能促进水牛卵母细胞体外成熟、体外受精及早期胚胎的发育,因此可将VEGF用于水牛卵母细胞体外受精体系的优化,提高水牛体外胚胎生产效率.     

稀释液中添加不同浓度的维生素B12对牛细管冷冻精液精子形态的影响

为了阐明维生素B12（VB12）对牛细管冷冻精液形态的影响，在常规稀释液中分别添加0．00％、0．25％、0．50％、0．75％、1．00％的VB12进行试验，比较观察结果表明：0．50％组顶体完整率高于对照组，差异极显著（P〈0．01），0．75％组高于对照组差异显著（P〈0．05），1．00％组低于对照组，差异不显著（P〉0．05）。0．50％组的精子畸形率低于对照组，差异显著0．05），1．00％组高于对照组，差异不显著（P〉0．05）。显著（P〉0．05）。（P〈0．05），0．75％组低于对照组，差异不显著（P≥0．25％组的顶体完整率、畸形率与对照组相似，差异不