刺激隐核虫与多子小瓜虫免疫学特性比较研究综述

刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)与多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis)是影响渔业生产重要寄生虫,本文主要阐述了刺激隐核虫与多子小瓜虫种内和种间的免疫学相似性和差异性,及其两种寄生虫抑动抗原的免疫学特性以及克隆表达研究。为免疫学方法预防两种寄生虫病提供理论依据。     

刺激隐核虫钙调蛋白基因的分子鉴定

为了解钙调蛋白在刺激隐核虫生长发育过程中的作用,实验从刺激隐核虫滋养体cDNA 文库中克隆出钙调蛋白基因 （cicam）,优化密码子后人工合成开放阅读框 （ORF）,构建成重组质粒 pGEX-4T-1/cicam,将其转化至大肠杆菌后,通过 ZYM-5052 自诱导培养基诱导重组子表达。用谷胱甘肽琼脂糖凝胶及凝血酶纯化重组蛋白 rCiCaM,并用其免疫小鼠 BALB/c 株获得多克隆抗体。分别用逆转录 PCR 和免疫印迹实验检测 cicam 及其编码蛋白 CiCaM 在各期虫体中的表达。通过间接荧光抗体实验检测 CiCaM 在幼虫中的定位。通过覆盖印迹实验 （Blot overlay assay） 初步探讨了重组蛋白 rCiCaM 结合重组肌动蛋白解聚因子的活性。结果显示,cicam 的 ORF 为 450 bp,编码含 149 个氨基酸的肽链,其分子量预测值为 16.9 ku;原核表达的融合蛋白 GST-rCiCaM 及切除 GST 标签的 rCiCaM 的表观分子量分别为 43 和 16.9 ku,均与预测值相符;cicam 在刺激隐核虫的各个发育阶段都有稳定的表达,其表达产物 C...     

刺激隐核虫病的防治

随着我国海水养殖业的规模发展，鱼病也进一步加重，一定程度上影响海水养殖业的健康发展，有些鱼病的防治工作做起来相当的棘手，刺激隐核虫的防治便是其中的一种。今年 4月份，我们所养殖的 2个养殖池中的鱼也患有此病，现将治疗的过程、经验总结如下，以供各位水产养殖同仁参考。 　　一、发病的基本情况 　　今年 4月初 (当时水温为 23～ 26℃， pH值为 8.1左右，水质良好 )，我们所养殖的红鱼畏 池 (小池 )中的红鱼畏 和混养池 (大池 )中的红笛鲷、黑鲷、胡椒鲷、斑石鲷均不同程度患刺激隐核虫病，病情发展迅速，发病后 3天便有鱼死…     

刺激隐核虫生活史的观察

通过对刺激隐核虫的取样,在湿房中24℃下培养,在显微镜下连续观察其生长发育情况。其结果为离开鱼体的刺激隐核虫营养体约经8～10h发育成包囊,包囊壁厚;4～6d包囊内出现窜动的纤毛幼虫;5～8d纤毛幼虫冲撞包囊壁,出现一孔洞,由这一孔洞进入水体中;约5～9d完成营养体→包囊→纤毛幼虫的过程;整个生活史周期为8～13d。     

黄鲷刺激隐核虫的防治研究

黄鲷幼鱼在培养期间,由于受到刺激隐核虫的感染而导致出现极高死亡率。实验发现,使用福尔马林和硫酸铜可有效地治愈黄鲷刺激隐核虫;实验表明,2 mg/L硫酸铜和200 mg/L福尔马林比较适合治疗黄鲷的刺激隐核虫病,是一种经济有效的治疗方法,对治疗病鱼刺激隐核虫病没有明显的副作用。黄鲷病鱼治疗后放回海水暂养,恢复正常,活动良好,无死亡现象。     

大黄鱼刺激隐核虫病的防治

近年来 ,大黄鱼已成为福建沿海的主要养殖鱼类之一。随着其养殖面积的扩大和放养密度的增加 ,病害问题日益突出 ,极大地制约了大黄鱼养殖业的发展。由刺激隐核虫 (Ｃｒｙｐｔｏｃａｒｙｏｎｉｒｒｉｔａｎｓ )引起的白点病在大黄鱼人工育苗及养成中已成为一大病害 ,给养殖者造成了极大的经济损失。笔者通过对霞浦、宁德、福清、罗源等地的鱼病接诊观察和分析调查 ,探索出较为有效的治疗大黄鱼刺激隐核虫病的方法 ,现总结如下。材料和方法　　 1 996～ 2 0 0 0年 ,从福建省霞浦、宁德、福清、罗源等收集了一批患有白点病的大黄鱼仔、稚鱼 ,以…     

刺激隐核虫病因分析及防控措施探讨

海水鱼刺激隐核虫病,又名"海水小瓜虫病"。由于寄生刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)的海水鱼皮肤、鳃和眼出现大量白点为症状,在水产养殖行业俗称"海水鱼白点病"。该病流行的海水鱼种类多,传染速度快、防治难度大,死亡率高,对海水鱼养殖业危害极大。本文借鉴众多学者对刺激隐核虫的研究,从刺激隐核虫的发现、病原、症状、流行、致病原因等方面进行概括,探讨了海水鱼刺激隐核虫病的防治措施。     

大菱鲆刺激隐核虫病与防治

大菱鲆是近几年从国外引进的优良养殖品种。在养殖过程中发现,每年8～10月高温季节很容易感染刺激隐核虫,造成严重危害。现将有关情况总结如下。     

刺激隐核虫病

刺激隐核虫病,俗称海水小瓜虫病或海水白点病,是由刺激隐核虫寄生引起海水硬骨鱼类的一种致死性寄生虫病,以病鱼皮肤、鳃和眼出现大量小白点为特征。为我国二类疫病。一、病原学病原为刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans),属于前口目(Prorodontida)隐核虫科(Cryptocaryonidae)隐核虫属(Cryptocaryon)成员。海水小瓜虫(Ichthyophthirius marinus)是同物异名。     

刺激隐核虫PCR检测方法的建立

根据已知刺激隐核虫ITS序列设计引物,扩增刺激隐核虫ITS部分序列,并进行克隆、测序及序列分析建立刺激隐核虫PCR快速检测方法,检测DNA片段长度为387 bp,与福建长乐CL1209(KC550300)、福建福鼎FD1210(KC550302)、广东番禺PYH4.12株(DQ270010)、日本Wakayama分离株(AB608054)、台湾嘉义Chiayi株(AF490381)等序列同源性为100%,检测灵敏度为2个虫体。应用建立方法对2011-2013年收集到的50份患刺激隐核虫病的大黄鱼样品进行检测,结果与根据临床检测结果的符合率为100%。该检测方法的建立,为刺激隐核虫病的监测和诊断奠定了快速、简便、高通量的检测方法基础。     

卵形鲳鲹刺激隐核虫病组织病理学研究

利用组织切片、HE染色和显微观察的方法,研究了卵形鲳鲹患刺激隐核虫病组织病理变化。组织切片结果可见,感染鱼的鳃和体表受到直接机械损伤;鱼体在缺氧状态下,入侵的刺激隐核虫有可能对机体产生某种毒素,也可能因刺激隐核虫感染而引发细菌或病毒继发性感染,造成肝、脾和肾脏不同程度的间接性损伤。表现为鳃部机能严重受阻,肝脏脂肪肝变性严重,肝索紊乱,血窦缩小或消失;脾脏组织结构不清晰,有充血、出血和坏死等症状;肾脏结构不清晰,肾小管及肾小体缩小,肾小管细胞融合(黏连),组织间隙松散扩大,局部细胞坏死,存在脂肪粒。     

感染刺激隐核虫的大黄鱼对低溶氧量的耐受力研究

每年6月中下旬至7月初是福建省沿海养殖的大黄鱼刺激隐核虫病的发病高峰期,为明确患病大黄鱼暴发性死亡的原因,进行了患刺激隐核虫病大黄鱼对低溶氧量的耐受力试验。结果表明,病情越严重的鱼出现浮头、大量死亡时的溶氧量越高、耗氧率越低。健康鱼的窒息点和耗氧率分别为2．58mg／L、332．4mg／kg·h^-1,而病情呈“＋＋＋”鱼的窒息点和耗氧率分别为3．83mg／L、196．0mg／kg·h^-1。结合试验结果和养殖生产的实际情况,笔者认为患刺激隐核虫病的大黄鱼对低溶氧量的耐受力降低,易导致其暴发性大量死亡。     

人工感染的刺激隐核虫各期虫体的超微结构

从天然感染的卵圆鲳鲹（Trachiruotus blochii）分离到1株刺激隐核虫（Cryptocaryon irritans）,再经人工感染的方法收集各期虫体,制成电镜样品,对虫体进行超微结构研究。刺激隐核虫质膜的基本结构与淡水的多子小瓜虫的质膜相似,分为3层;外限制膜、外胞膜和内胞膜。刺激隐核虫的质膜小泡内充满大量电子致密物质（EDM）。幼虫、幼体和滋养体均具有复杂的口器,由胞咽、口肋、双动基体口纤毛和线带等组成,但不具备膜口类纤毛虫所具有的独特的细胞器：Lieberkuhn氏器。单动基体的体纤毛存在于幼虫、幼体和滋养体,但在包囊期,体纤毛和口器消失。各期虫体的胞质中具有线粒体、高尔基体和脂肪体等细胞器,有的阶段具有粘液囊、伸缩泡、食物泡、共生细菌等。粘液囊在大小、形态和分布上与多子小瓜虫的不同。文中分析了刺激隐核虫在形态上与多子小瓜虫的诸多差异,认为刺激隐核虫的分类更适合归于原口类（Promotome）,而不是膜口类（Ophryoglenina）。     

Role of major histocompatibility complex II antigen-presentation pathway genes in orange-spotted grouper infected with Cryptocaryon irritans

Cryptocaryon irritans, a pathogen model for fish mucosal immunity, causes skin mucosal and systematic humoral immune response. Where and how MHC II antigen presentation occurs in fish infected with C. irritans remain unknown. In this study, the full-length cDNA of the grouper cysteine protease CTSS was cloned. The expression distributions of six genes (CTSB, CTSL, CTSS, GILT, MHC IIA and MHC IIB) involved in MHC II antigen presentation pathway were tested. These genes were highly expressed in systematic immune tissues and skin and gill mucosal-associated immune tissues. All six genes were upregulated in skin at most time points. Five genes expected CTSS was upregulated in spleen at most time points. CTSB, CTSL and MHC IIA were upregulated in the gill and head kidney at some time points. These results indicate that the presentation of MHC II antigen intensively occurred in local infected skin and gill. Spleen, not head kidney, had the most extensive systematic antigen presentation. In skin, six genes most likely peaked at day 2, earlier than in spleen (5–7 days), marking an earlier skin antibody peak than any recorded in serum previously. This significant and earlier mucosal antigen presentation indicates that specific immune response occurs in local mucosal tissues.     

大黄鱼刺激隐核虫病继发细菌感染致死原因的研究

为明确大黄鱼刺激隐虫病大量死亡的致死原因,从患刺激隐核虫（Cryptocaryon irritans）病的大黄鱼（Pseudosciaena crocea）肝脏中分离细菌,病情程度较轻的鱼未分离到细菌,非常严重的鱼分离到细菌;分离的菌株经纯化后鉴定为创伤弧菌（Vibrio vulnificus）,利用纯化后的菌株作回归感染试验,其感染率为100%,死亡率为80%。研究表明患刺激隐核虫病的大黄鱼体内的细菌为继发性感染,是导致大黄鱼大量死亡的致病菌,其感染途径为水→伤口→体内。     

槟榔、川楝子复方中草药对大黄鱼4种酶活性的影响及对刺激隐核虫的杀灭效果分析

海水小瓜虫病是养殖大黄鱼(Larimichthys crocea)和数十种海水鱼类较难控制的主要疾病,它是由刺激隐核虫(Cryptography irritans)感染引发,严重威胁鱼类养殖产业的健康发展。本研究利用复方中草药"HD-2"(槟榔、川楝子、绵马贯众、大青叶、穿心莲等以一定比例混合,超微粉碎经过200目过筛后收集粉末)投喂大黄鱼,研究大黄鱼溶菌酶(LZM)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)等非特异性免疫指标变化和不同用药方式对刺激隐核虫的杀灭效果。结果显示,口服"HD-2"可以促进鱼体LZM、T-SOD、AKP、ACP活性升高,以添加2%中草药组在提高4种酶活性方面作用显著,投喂后第14~21天酶活性最高。"HD-2"对体外刺激隐核虫幼虫的杀灭实验证实:4 h内在50 mg/L浓度下对幼虫没有杀伤作用,80 mg/L、100 mg/L、200 mg/L浓度分别可以杀死20%、54%、89%的幼虫,400 mg/L浓度下幼虫被全部杀死,幼虫4 h半致死浓度为109 mg/L。在室内为期15 d的大黄鱼小瓜虫病治疗实验中,A组按20 g/kg添加"HD-2"药物口服,同时按100 mg/L浓度药浴,存活率为50%;B组按20 g/kg添加药物口服,同时按50 mg/L浓度药浴,存活率50.67%;C组,在无药浴情况下,仅按20 g/kg添加药物口服,存活率为42.67%;A、B、C组存活率均显著高于对照组存活率2.67%(P0.05)。此外,A、B、C 3组中,大黄鱼胸鳍上白点数量明显少于对照组;同时,3个组的大黄鱼鳃丝上隐核虫数量均呈显著下降趋势(P0.05),实验结束时几乎观察不到虫体;而对照组大黄鱼鳃丝上隐核虫数量明显上升。实验过程中A、B、C 3组大黄鱼释放到体外的包囊数量明显下降,第12天时其包囊数量分别下降100%、91.1%、77.7%,与对照组差异极显著(P0.01)。综上所述,口服和药浴同时用药具有最佳效果,仅口服中草药亦能达到良好治疗效果。从实用性和成本考虑,建议仅进行口服处理,即能保障大黄鱼较高成活率,中草药添加量为2%,投喂时间为6~14 d。该结果为防控鱼类小瓜虫病提供了理论参考和技术支撑,在养殖生产中将具有良好的应用前景。