上海地区虾源弧菌分离鉴定及分子分型研究

为了进一步了解上海市凡纳滨对虾主养区虾源弧菌的分布特征以及主要种属的分子基因型特征,为本地区虾的弧菌病的流行调查、防控治疗提供依据。本研究采用选择性培养基筛选和全自动细菌鉴定仪鉴定的方法,对不同时间,不同池塘的虾源弧菌进行分离鉴定,总共分离到52株不同来源的弧菌,其中30株副溶血弧菌(57.7%),9株拟态弧菌(17.3%),7株创伤弧菌(13.5%),4株溶藻弧菌(7.7%),1株霍乱弧菌(1.9%)以及1株河流弧菌(1.9%)。调查结果显示,上海地区虾源弧菌以副溶血弧菌为主。进而对30副溶血弧菌株副溶血弧菌进行分子分型研究,EIRC-PCR指纹图谱显示基因型存在多态性,每个分离株的基因扩增条带数介于4~8之间,大小都在250~4500 bp之间;聚类分析分为5个亚群,其中Ⅰ亚群15株(50%),Ⅱ亚群6株(20%),Ⅲ亚群6株(20%),Ⅳ亚群2株(6.7%),Ⅴ亚群(3.3%)。结果表明,上海地区虾源副溶血弧菌存在一种主要流行亚群,对生产中药物筛选及疫苗研制具有一定的参考价值。     

弧菌融合蛋白TDH-VVC-VMHA的表达及弧菌毒素双抗体夹心ELISA检测方法的建立

为提高食品中副溶血弧菌、创伤弧菌和拟态弧菌毒素初筛的速度与效率,建立了双抗体夹心ELISA检测方法。以融合蛋白TDH-VVC-VMHA包涵体为抗原免疫豚鼠,采用豚鼠抗融合蛋白免疫血清为包被抗体,辣根过氧化物酶（HRP）标记羊抗豚鼠IgG为标记抗体,应用棋盘滴定法确定ELISA的最适条件。结果表明,所建立的方法与副溶血弧菌、创伤弧菌、拟态弧菌的培养物上清有较明显的阳性反应,与绿脓杆菌、金黄色葡菌球菌、李氏杆菌、甲型副伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌等5种非弧菌属食物中毒菌培养物上清未见交叉反应,与溶藻弧菌、河流弧菌和麦氏弧菌等3种弧菌培养物上清也未见交叉反应。这说明,该方法可以用于食品中副溶血弧菌、创伤弧菌和拟态弧菌毒素的快速同步免疫学检测。     

复方中草药对凡纳滨对虾生长及非特异性免疫功能的影响

为了提高凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的生长性能和抵抗细菌性疾病的能力,将黄芪、大黄、甘草和黄芩等比例组成复方,采用连续和间断两种投喂方式评价1%中草药饵料对凡纳滨对虾的生长和非特异性免疫功能的影响。试验共分3个组,分别为D0组（基础饲料对照组）,D1组（1%中草药饲料组）,6D1-6D0组（6天投喂1%中草药饲料-6天投喂基础饲料）。试验期间在不同时间取样测定血淋巴酚氧化酶、溶菌酶、超氧化物歧化酶的活性,并在14、28天分别进行副溶血弧菌感染凡纳滨对虾。结果表明：D1组对虾的增长率和相对增重率均显著高于6D1-6D0组和D0组(P＜0.05);6D1-6D0组对虾的增长率和相对增重率略低于对照组,但无显著差异(P＞0.05)。饲料中添加复方中草药可显著提高对虾免疫相关酶(PO、LSZ、SOD)活性。养殖第14、28天的弧菌感染试验结果显示：D1组的免疫保护率分别为68.3%和91.6%,6D1-6D0组的免疫保护率分别为27.2%和45.8%。说明中草药可改善对虾对弧菌性疾病的抵抗能力,并随投喂时间的增加而增强。     

牛蛙源无乳链球菌全菌疫苗免疫效果研究

将分离鉴定的无乳链球菌用0.4%的甲醛灭活,加弗氏完全佐剂制成灭活全菌苗,对牛蛙进行注射免疫。通过测定受免牛蛙血清中凝集抗体效价,总蛋白、免疫球蛋白的测定及免疫保护率的测定,探讨疫苗的免疫应答状况。研究结果表明,无乳链球菌全菌疫苗能够提高牛蛙的血清抗体水平及总蛋白、免疫球蛋白含量。此外,无乳链球菌全菌苗对牛蛙抗人工感染也具有较好的免疫保护作用。因此,将无乳链球菌全菌苗用于牛蛙链球菌病的防治具有广阔的发展前景。     

脂多糖与β葡聚糖对迟钝爱德华氏菌亚单位疫苗的免疫促进效果研究

为了研究脂多糖与β葡聚糖的协同免疫促进效果,本论文重组表达了迟钝爱德华氏菌的一个高效亚单位疫苗候选蛋白甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）,利用纯化的重组GAPDH（rGAPDH）蛋白单独或混合脂多糖和β葡聚糖免疫牙鲆,免疫后通过检测牙鲆抗体水平、免疫相关基因表达及免疫保护力三方面指标变化对脂多糖和酵母β葡聚糖的免疫促进效果进行研究。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测结果显示,脂多糖和β葡聚糖与rGAPDH蛋白共免疫组牙鲆的抗体效价在免疫后第14和30天均显著高于单独免疫rGAPDH蛋白的牙鲆,在第30天时其效价为211.76;荧光定量PCR检测结果显示,相比PBS对照组,牙鲆在注射免疫后脾脏组织中IL-1β、IL-6、MHC-IIα、IgM、TCRα及C型溶菌酶6种免疫相关基因表达量均出现不同程度的上调,而其中脂多糖和β葡聚糖与rGAPDH蛋白共免疫组牙鲆在免疫后多个时间点其基因表达水平均显著高于单独免疫rGAPDH蛋白的牙鲆;免疫保护性实验结果同样显示,脂多糖和β葡聚糖与rGAPDH蛋白共免疫组牙鲆在攻毒后累计死亡率显著低于对照组和单独免疫rGAPDH蛋白组,直至第14天累计死亡率为30%,相对免疫保护率为68%。研究表明,脂多糖和β葡聚糖作为疫苗免疫刺激剂使用可显著增强牙鲆的免疫应答水平,提升亚单位疫苗的免疫效果。     

鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、传染性脑脊髓炎四联油佐剂灭活疫苗的研究

用NDV La Sota株、IBV M41株、EDS76V HSH23株、AEV Van Roekel株为种毒，分别接种鸡胚或鸭胚，制备各种病毒抗原液，经福尔马林灭活后，采用FIL TRON盒式超滤系统对制苗病毒抗原液进行浓缩，然后按一定比例混合，以司本80及吐温80为乳化剂，10号白油为佐剂，制成ND-IB-EDS76-AE四联灭活疫苗。对四联苗各项技术指标进行了测定，证明本疫苗安全、无任何副作用；免疫10～14d后产生免疫力；ND部分效检，攻毒100％保护，每羽份含ND效价达50～123PD50；IB部分效检，免疫21～28d后攻毒保护率达80％～100％，IBHI效价≥1：64；EDS76效检。免疫后21d HI效价≥1:128;AE效检,保护率达80%～100%。     

植物疫苗无致病力青枯雷尔氏菌胁迫

为探讨植物疫苗无致病力青枯雷尔氏菌FJAT-1458对番茄防御酶系统的影响,本研究以无致病力青枯雷尔氏菌FJAT-1458作为外源微生物胁迫接种番茄植株,接种后于不同时间取样分析番茄植株株高、根系长度、根系干重及植株不同器官（根、茎、叶）的防御酶系SOD（superoxide dismutase）、POD（peroxidase）、PPO（polyphenol oxidase）活性动态变化。结果表明,植物疫苗无致病力青枯雷尔氏菌FJAT-1458胁迫接种对番茄植株株高、根系长度、根系干重影响不显著（P>0.05）,但对番茄植株不同部位的抗氧化酶影响较明显。植物疫苗无致病力青枯雷尔氏菌FJAT-1458胁迫接种能导致番茄植株不同器官的POD、PPO和SOD酶活性总和显著高于对照植株,并且在胁迫处理植株与对照植株之间,POD、PPO和SOD的活性变化动态也有所不同。这说明,无致病力青枯雷尔氏菌FJAT-1458的接种可提高植株对病原物入侵的防御能力。     

水库网箱养殖“老头鳗”的初步研究

为挖掘“老头鳗”的生产潜能,进一步提高养鳗效益。课题组于2011年10月-2012年7月,在福建省长汀县四都镇的彼下水库开展了利用网箱养殖“老头鳗”试验研究。结果显示:（1）本次试验放养2种不同规格的“老头鳗”共9.5 t,至7月28日出箱产量为15.6 t,平均成活率为85.53%;（2）对于不同规格的鳗鱼,日平均投饲率均不到1%,饵料转化率均值为48.5,饵料系数平均为2.07,网箱养殖“老头鳗”的饵料系数达到利用精养池塘养殖正常鳗鱼的水平;（3）试验期间网箱养殖未发生过虫害,但暴发的弧菌病造成13.7%的鳗鱼死亡,数量达1.3 t。综合结果显示：水库网箱养殖“老头鳗”与同期当地精养池塘养殖“老头鳗”统计结果相比,具有个体生长快、养殖周期短、病害少、单位面积产量高、养殖生产成本低等优势。     

鸡IBD蜂胶囊毒组织灭活苗的研制与应用

为了预防鸡IBD的区域性流行,以当地典型发病鸡群的法氏囊为组织源,以蜂胶为佐剂,研制鸡IBD蜂胶囊毒组织灭活苗。室内试验表明,对10日龄AA肉鸡接种后,20、50d血清AGP抗体阳性率和对强毒攻击的保护率均达100%;田间试验表明,对6批7~15日龄,3万多只不同品种的雏鸡免疫,未发生一起IBD;常规检验表明,该苗安全、无毒副作用,保存期内性质稳定。     

新城疫-传染性支气管炎-减蛋综合症三联油乳剂苗的研制

以ＮＤ Ｌa Sota株,呼吸道型,ＩＢ（ＲＩＢ）Ｈ１２０株或肾型ＩＢ（ＫＩＢ）ＳＮ９３０１株和ＥＤＳ ＸＮ９２０３株制苗毒株,分别经鸡胚和鸭胚增殖后甲醛灭活。灭活毒液依毒价按比例混合加入油佐剂中,乳化剂成“ＮＤ－ＲＩＢ－ＥＤＳ”和ＮＤ－ＫＩＢ－ＥＤＳ两种三联油乳剂苗。测试结果表明：三联疫苗安全性好,无毒副作用;乳化度、稳定性和通针性良好;免疫效果即,用三联苗免疫２０日龄鸡,免疫后１４、２８、５８d、ＮＤ、ＲＩＢ、ＫＩＢ、ＥＤＳ的ＨＩ抗体均可达７．０和９．２log2以上,于免疫后６０d用相应强毒攻击,８３．３％－１００％的鸡获有效保护。疫苗保护期长,常温避光１８０d和4℃左右３６０d,免疫效果与新制苗无明显差异。     

溶藻弧菌HY9901转运蛋白TolB的原核表达及条件优化和纯化

为研究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus) HY9901转运蛋白TolB作为疫苗候选抗原的可能性,根据已发表的溶藻弧菌HY9901转运蛋白TolB序列(JQ846501),设计1对带酶切位点的引物,PCR扩增tolB基因,然后经酶切、连接等步骤,构建tolB基因的原核表达载体pET-TolB,并对其IPTG浓度、诱导时间、温度、洗脱浓度进行优化,以期获得较大量的目的蛋白。结果表明：IPTG诱导后经SDS-PAGE与Western-blot分析,成功表达了溶藻弧菌HY9901株TolB蛋白,分子量与预期相符,且表达的蛋白以包涵体的形式存在;TolB蛋白在大肠杆菌中诱导表达的优化条件为：0.2 mmol/L IPTG,37℃诱导4 h;最佳咪唑洗脱浓度为400 mmol/L。这些结果为进一步研究目的蛋白的免疫原性和疫苗制备奠定基础。     

3种组织固定液对大菱鲆肝脏切片质量影响和效果比较

为查明3种组织固定液对大菱鲆肝脏石蜡切片质量的影响,筛选效果最佳的固定液。本实验选用波恩氏(Bouin)、戴维森氏(Davidson)和4%多聚甲醛(Paraformaldehyde, PFA)3种组织固定液,对大菱鲆的肝脏进行固定,制作石蜡切片,通过苏木素-伊红(H-E)和免疫组织化学(Immunohistochemistry)染色,观察组织细胞形态学特征,利用统计学方法分析细胞完整度和免疫组化阳性率情况。结果发现,3种固定液对大菱鲆肝组织石蜡切片固定效果存在显著差异,Bouin固定液组织H-E染色细胞结构清晰、形态完整,Davidson固定液H-E染色组织溶解、细胞结构不清晰,但能分辨出核质界线,4%多聚甲醛组H-E染色鲜艳,但核质分界不清晰。完整肝细胞比例,4%PFA显著低于Bouin和Davidson固定液(P<0.05),且Bouin和Davidson固定液无显著差异(P>0.05)。肝组织增殖细胞核抗原(proliefrating cell nuclear antigen, PCNA)免疫组化染色阳性率3种固定液存在显著差异,Bouin固定液显著高于4%PFA和...     

水浸与赤霉素处理对荆条种子萌发影响研究

研究了水浸时间(1、2、3d)及水浸处理后再进行0.8‰赤霉素(2、4、6h)综合处理的方法对提高荆条种子萌发的影响.结果表明:2种处理方式对荆条种子萌发均具有明显促进作用.水浸3d处理显著提高荆条种子发芽率、发芽势和发芽指数,分别达到70.00％、65.33％和22.01,水浸1d效果不明显;水浸后再进行赤霉素处理对提高荆条种子的发芽率、发芽势及发芽指数作用明显,尤以发芽率变化最显著,表达发芽活力的发芽势和发芽指数与单纯水浸处理相比变化不明显.综合处理中以水浸2d后赤霉素处理4h的荆条种子发芽效果最理想,发芽率达到最高值,为87.33％,且显著高于其他处理及单用赤霉素处理,发芽势达到64.67％,发芽指数达到20.00.     

南美白对虾养殖系统中弧菌为主的致病菌群的分子比较

弧菌是最常见、最重要的细菌性病原菌,采用16 S rDNA克隆文库法对南美白对虾(Litopenaeus vannarnei)养殖系统中水体和底泥的弧菌为主的致病群落的组成进行分析研究。从水体和底泥16 S rDNA克隆文库中各随机挑选55个克隆子进行测序(约114 bp),对测序结果进行了BLAST比对。结果表明:水体样品有16个OTU,主要Vibrio(弧菌,33.3%)、Chloroflexi(绿屈挠菌,18.5%)和Pantoea(泛菌属菌,7.41%);底泥样品有14个OTU,主要是Vibrio(弧菌,50.0%)和Chloroflexi(绿屈挠菌,13.6%);2个文库比较来看,proteobacterium(变形细菌)仅在水体样品中,Aeromonas(气单胞菌)仅在底泥样品中。用MEGA 4从测序的克隆子中选出30个OTU进行系统发育分析。     

低温结合GABA处理对樱桃番茄果实采后品质的影响

探讨低温贮藏结合GABA处理对樱桃番茄果实采后品质的影响,为寻找樱桃番茄采后保鲜新技术提供理论依据。本研究以‘粉娇’樱桃番茄为试材,设置清水浸渍+常温(25℃)贮藏、清水浸渍+低温(8℃)贮藏和GABA(500 mg/L)浸渍+低温(8℃)贮藏3个处理,在樱桃番茄16天的贮藏期内,调查果实腐烂率,测定果实呼吸强度、果实硬度、可溶性固形物、维生素C、柠檬酸和类胡萝卜素含量。结果表明,与常温(25℃)贮藏相比,低温及其结合GABA处理均显著降低了樱桃番茄果实贮藏期间的腐烂率,其中在贮藏16天时,防治效果分别达到了45.81%和63.11%,低温结合GABA处理优于单独低温贮藏。同时,低温结合GABA处理显著降低了果实的呼吸强度,延缓了果实硬度的降低,保持了较高的可溶性固形物、维生素C和柠檬酸含量,抑制了番茄红素、β-胡萝卜素和叶黄素的积累。因此,低温结合GABA处理可有效延缓樱桃番茄果实的腐烂和衰老,并能保持果实的采后品质,在樱桃番茄果实保鲜上具有良好的应用前景。     

土霉素在大菱鲆体内药代动力学及残留消除规律研究

摘要：首次研究大菱鲆口服土霉素的药代动力学特征及残留消除规律。采用高效液相色谱法,对以80 mg/kg b.w.单剂量口灌土霉素的大菱鲆进行连续采样监测。结果表明,土霉素在大菱鲆血液、肌肉、肝脏中药代动力学特征分别符合带时滞的一级吸收二室开放模型、带时滞的一级吸收二室开放模型和带时滞的一级吸收一室开放模型。土霉素在大菱鲆体内消除速度较慢,16℃水温的实验条件下,在大菱鲆肌肉、肝脏中的休药期分别为28天和10天。     

多孔烧结陶片吸水特性实验方法

建筑被动蒸发降温效益以多孔材料吸水特性为基础。以广泛应用的多孔烧结陶片为例,相关参数测试方法标准并不一致。笔者参考国际标准采用“单面浸泡法”测试了3种多孔陶片的毛细吸水系数及毛细饱和含水率,实验结果表明,在第1吸水阶段,材料孔隙率与毛细吸水系数及毛细饱和含水率呈现显著正相关关系。参考中国标准,采用“整体浸泡法”和“真空饱和法”测试了上述3种材料在水中浸泡24 h后的含水率,并与“单面浸泡法”测试结果进行了对比研究,结果显示,后者实验结果分别比前两者低3.25%和21.58%。研究表明,第1阶段吸水速率高的材料具有更高毛细饱和含水率,此种陶片更适宜蒸发降温应用。测试方法上单面浸泡法优于整体浸泡法。采用重复性误差衡量实验精确度,分析结果表明上述实验的重复性误差均低于2.40%。     

不同条件对白术种子萌发特性的影响

为探究白术种子适宜萌发条件,将椰糠、滤纸、棉花和纱网4种材质作为发芽床,通过不同温度、不同浓度NaCl和GA对白术进行浸种处理。结果表明,白术发芽率在椰糠、滤纸和棉花处理下无显著差异,但显著高于纱网处理;浸种温度在20~25℃之间发芽率较高,霉变率较低;NaCl浓度低于0.1 g·L^-1时,其发芽相关指标与对照无显著差异,高于0.1 g·L^-1时,随浓度增加其发芽相关指标显著降低;GA浓度对白术种子发芽无显著作用。浸种温度为20~25℃、低浓度的NaCl以及保水性较好的发芽床适宜白术种子的萌发。