猪外周血单个核细胞增殖反应影响条件的探讨

应用 Ｌ１６ （４５） 正交试验, 对影响猪 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 增殖反应的几个因素, 包括培养时间、 Ｐ Ｈ Ａ 浓度、细胞浓度等三个因素四个水平进行了比较和探索。试验表明几个因素对 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 的增殖反应均有显著的影响（ Ｐ＜ ００５） , Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 增殖反应的 Ｍ Ｔ Ｔ 比色法的最佳反应条件组合为 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 浓度为１ ×１０６／ｍｌ, 植物血凝素 Ｐ Ｈ Ａ 的浓度为１２５μｇ／ ｍｌ, 细胞培养时间为２４ 小时; 影响增殖反应的先后顺序为 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 浓度、 Ｐ Ｈ Ａｐ 浓度及细胞培养时间。同时确定了最有利于 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 增殖的犊牛血清浓度为１０ ％ 。     

猪sCD2对其天然配体及SRBC培养上清液促淋转效应的影响

以２、４、１６、３２倍稀释猪血清ｓＣＤ２或５、１０、１００、５００倍稀释猪ＰＢＭＣｓＣＤ２，分别替代最优水平组合中的ｓＣＤ２，进行淋转抑制试验。试验结果提示，２、４倍稀释猪血清ｓＣＤ２或５、１０倍稀释猪ＰＢＭＣｓＣＤ２，分别对猪血清ｓＣＤ２配体或ＳＲＢＣｓＣＤ２配体促淋转及协同ＰＨＡ－Ｐ促淋转效应有显著或极显著的掏作用（Ｐ〈０．０５或Ｐ〈０．０１）。在ＳＲＢＣ培养上清液和猪血清中可能存在一定量的ｓ     

超排山羊卵巢卵母细胞体外成熟和体外受精的研究

以ＴＣＭ１９９＋１０ｍｍｏｌ／ＬＨＥＰＥＳ＋青霉素（６ｍｇ／Ｌ）＋链霉素（５ｍｇ／Ｌ）为基础培养液（ＢＭ），再分别加入不同成分，配成５种卵母细胞成熟液：（Ａ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ；（Ｂ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ＋ＨＣＧ（２．５ｍｇ／Ｌ）；（Ｃ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ＋ＨＣＧ＋Ｅ２（１ｍｇ／Ｌ）；（Ｄ）ＢＭ＋１０％ＦＣＳ＋ＨＣＧ＋Ｅ２；（Ｅ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ＋ＨＣＧ＋Ｅ２＋颗粒细胞（１．５×１０６～３．０×１０６个／ｍＬ）。在３８．５℃、５％ＣＯ２下培养２６ｈ，排卵后第１天卵巢卵母细胞体外成熟率分别为６７．６７％（２０／３０），６０．４２％（２９／４８），８３．６７％（４１／４９）和８０．８２％（５９／７３），排卵后第５天卵巢卵母细胞，在培液Ｄ中体外成熟率为７１．４３％（４５／６３）。排卵后第１天的９８枚卵巢卵母细胞，体外成熟体外受精卵裂率为２１．４３％，２１枚２细胞胚移植５头受体获２头羔羊。研究表明，超排山羊卵巢卵母细胞经体外成熟可获得大量廉价的成熟卵母细胞，并可通过体外受精获得试管山羊     

次黄嘌呤对猪卵母细胞体外自发成熟抑制作用的研究

利用猪卵母细胞体外无血清培养技术,研究了次黄嘌呤（ＨＸ）对猪卵母细胞体外自发成熟的抑制作用。猪卵丘－卵组细胞复合体（ＣＯＣ）和裸卵母细胞（ＤＯ）取自初情期猪卵巢,培养在Ｍ－１９９培养液中,并施以各种自理培养不同时间后,观察卵母细胞核成熟（ＧＶＢＤ）情况。实验结果表明：⑴ＨＸ（１－４mmol/Ｌ）对猪ＣＯＣ的自发成熟具有抑制 作用,且具有剂量领事关系。４mmol/Ｌ的ＨＸ对ＣＯＣ和ＤＯ自发成熟的抑制作用,且具     

山羊红细胞膜表面CD58的制备与鉴定

应用胰蛋白酶消化、三氯乙酸沉淀、透析等方法,提取山羊ＲＢＣ同ＣＤ５８。玫瑰花环抑制试验表明,８．０ｇ／Ｌ提取物对猪淋巴细胞的Ｅｔ花环抑制率达到 ６８．６％,且该活性可被ＣＤ２封闭;淋巴细胞转化试验证明,提取物能刺激活化猪ＰＢＭＣ,与绵羊ＲＢＣ源ＣＤ５８的作用间无显著差异（Ｐ〉０．０５）,经ＰＢＬ吸收后,其活性显著降低（Ｐ〈０．０１）。     

5种免疫增强剂对猪PBMC增殖反应的影响

采用胸腺素、黄芪多糖、人胎盘组织液、人重组白细胞介素 2 ( r IL-2 )及左旋咪唑 ,以不同浓度刺激体外培养不同时间的猪外周血单个核细胞 ( PBMC) ,结果证明这几种佐剂均对猪 PBMC有明显刺激作用 ,且与浓度有依赖关系 ,浓度过高时对其有抑制作用 ,适宜的浓度为 1 0 4倍稀释度。时间因素的影响较小 ,但培养 36h加入各种佐剂后 PBMC增殖反应未见增强。 PBMC代表机体总的细胞免疫水平 ,通过佐剂对体外培养的PBMC增殖反应水平影响的测定 ,为动物用免疫佐剂和免疫增强剂的筛选提供了一种有效方法。     

应用噻唑蓝法初步研究兔外周血单个核细胞转化的条件

应用噻唑蓝法研究了ＰＨＡ－Ｐ引起兔外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）转化的最适条件,培养时间为４８ｈ,ＰＢＭＣ密度为５×１０１２／Ｌ,ＰＨＡ－Ｐ的终浓度为０．５ｍｇ％。并测定了在此最适条件下的吸光值（ＯＤ）,为０．２７６±０．１４２。     

猪卵母细胞在玻璃化冷冻液中的培养效果

本试验的目的是要选择较好的用于猪卵母细胞玻璃化冷冻的玻璃化冷冻液，玻璃化液由ＴＣＭ－１９９、ｍＰＢＳ、Ｋｉｅｖ液分别加２０％的犊牛血清与３种抗冷冻剂（丙三醇、１，２──丙二醇和乙二醇）组成。猪卵母细胞采自屠宰厂的卵巢并培养在ＴＣＭ－１９９＋２０％犊牛血清、ｍＰＢＳ＋２０％犊牛血清和Ｋｉｅｖ＋２０％犊牛血清中，在３７℃、湿度１００％条件下培养至少５个小时。５小时后逐渐加入抗冷冻剂，使其终浓度达５０％。培养５分钟后，将猪卵母细胞依次移至抗冷冻剂浓度为２５％，１２．５％和０％的培养液中，培养５分钟，而后进行台盼蓝死活染色。结果表明猪卵母细胞在各组培养后的存活率没有显著性差异（Ｐ＞０．０５），但乙二醇结果优于其它抗冷冻剂，而ＴＣＭ－１９９好于其它两类培养液。     

英国BOCM PAULS乳猪料和正大551乳猪饲喂对比试验

英国ＢＯＣＭＰＡＵＬＳ乳猪料和正大５５１乳猪饲喂对比试验李承开，宁志华，来文林，徐建生，上官恒娥，朱年华，丁晓菲，王修荣，张年福，徐景山（江西省民星企业集团）（东乡县畜牧研究所）１试验目的ＢＯＣＭＰＡＵＬＳ公司是英国最大的动物饲料公司，年产各种饲料２...     

受精用液种类对牛狼母细胞体外受精的影响

比较了应用改良Ｔｙｒｏｄｅ＇ｓ液与０．６％ＢＳＡ－ＴＣＭ１９９作为受精液（实验１）、这两种受精液的不同配比作为受精液（Ｔ：ＢＴ分别为３：１、１：１和１：３；Ｔ为对照组，实验２）和在不同精时间采用不同受精液（先用Ｔ，ＩＶＦ２４ｈ后改用ＢＴ或ＴＣＭ１９９＋１０％发情牛血清，实验３），对经体外成熟培养（ＩＶＭ）后的牛卵母细胞体外受精（ＩＶＦ）效果的影响，结果，应用成分复杂的ＢＴ作为受精液，可以提高受精卵     

类固醇激素对牛输卵管上皮细胞分泌的调节及其分泌物对小鼠胚胎发育的影响

模拟发情期（０～６ｄ）母牛外周血浆雌激素和孕酮变化水平，在添加相应水平１７β－雌二醇和孕酮的ＴＣＭ－１９９液中，培养间情期牛输卵管上皮细胞（ＢＯＥＣ）。５％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析ＢＯＥＣ分泌物，发现上皮细胞受类固醇激素作用分泌的２类蛋白质分子量与自然发情期（０～６ｄ）分泌的特异蛋白相似。证明类固醇激素可以调节和启动间情期ＢＯＥＣ的分泌活动。当雌二醇浓度高达１ｍｇ／Ｌ时，即使不加孕酮，ＢＯＥＣ仍能分泌这２类蛋白质。在培养小鼠原核胚的ＣＺＢ培养液内添加牛输卵管上皮细胞分泌蛋白（ＢＯＥＰ），与添加间情期牛输卵管冲洗蛋白（ＢＯＰ）和小牛输卵管冲洗蛋白（ＣＯＰ）相比，能显著提高通过２－细胞阶段胚胎的百分率和桑囊形成率，表明ＢＯＥＰ能较好地促进胚胎的分裂和发育。但ＢＯＥＰ组的桑囊形成率显著低于对照组，表明ＢＯＥＰ中可能缺少某些低于Ｍｒ１．０×１０４的蛋白因子的协调作用，以及含有Ｍｒ３．０×１０４～５．６×１０４的分泌蛋白的抑制作用而阻碍胚胎分裂与发育。     

牛体外受精胚胎一步脱防冻剂冷冻方法的研究

为了研究适合于牛体外受精胚胎的一步除防冻剂的冷冻方法，特进行两个试验。试验１分别用１．５Ｍ甘油＋０．２５Ｍ蔗糖、１．５Ｍ乙二醇和１．５Ｍ丙二醇作防冻剂冷冻体外受精后第７天，已发育至囊胚阶段的牛胚胎。使胚胎降温至－７℃后，植冰，然后以０．３℃／分的速率降温至－３０℃，立即将胚胎投入液氮中冷冻保存。在３７℃水中解冻胚胎后，使其直接在含１５％胎犊血清（ＦＣＳ）的磷酸缓冲液（ＰＢＳ）中脱去防冻剂。经体外培养７２ｈ后，３组胚胎的孵化率分别为７７．２７％（１０２／１３２）、７３．２４％（１０４／１４２）、４７．９０％（５７／１１９），第１、２组的孵化率极显著高于第３组（Ｐ＜０．０１），说明用１．５Ｍ丙二醇溶液冷冻的胚胎，在解冻后不宜直接在ＰＢＳ中脱防冻剂。试验２比较用不同浓度（１．０Ｍ０１．５Ｍ，２．０Ｍ）的乙二醇和不同投液氮温度（－２５℃，－３０℃，－３５℃）冷冻胚胎的效果。结果表明乙二醇浓度和投液氮温度对胚胎孵化率均无显著影响（Ｐ＞０．０５），各组胚胎的孵化率变动于７４．４４％－８５．４８％之间。     

有丝分裂原对离体boPBMC增殖和分泌Ig的作用

应用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法，ＥＬＩＳＡ和ＦＡＣＳ研究了离体奶牛外周血单核细胞（ｂｐＰＢＭＣ）对有丝分裂原的免疫应答。ＰＷＭ和ＣｏｎＡ能不同程度地诱导ｂｏＰＢＭＣ增殖和分泌Ｉｇ；而ＳＥＢ只能使ｂｏＰＢＭＣ高度增殖而不分泌Ｉｇ（Ｐ〉０．０５）。ＰＷＭ诱导的ｂｏＰＢＭＣ经１２ｄ培养，其中ＣＤ４＋／ＣＤ８＋细胞的比率为２．９：１；而ＳＥＢ诱导的细胞为０．３：１。离体ｂｏＰＢＭＣ主要分泌ＩｇＭ和ＩｇＧ１，只有     

在玉米─大麦─豆粕型饲粮中添加β-葡聚糖酶对生长猪生产性能及营养物质表观消化率的影响

共采用３０ 头２０ 公斤重的杜×长×大生长猪,均分入３ 个处理组,分别饲以玉米－ 豆粕（ＣＳ） 、玉米－ 大麦－ 豆粕（ＣＢＳ） 和玉米－ 大麦－ 豆粕＋ ０－１ ％ β－ 葡聚糖酶（ 酶活性为２－８ 万Ｕ／ 克）（ＣＢＳＥ） 饲粮,饲喂至５０ 公斤,分别测定了猪的生产性能及总能（ＧＥ） 粗蛋白（ＣＰ） 、粗纤维（ＣＦ） 的表观消化率。结果表明：在生长猪的ＣＢＳ饲粮中添加β－ 葡聚糖酶后,对猪的日增重、料重比有改善的趋,从而接近ＣＳ 饲粮的效果,但差异不显著（Ｐ＞ ０－０５） ;但可显著提高猪对饲粮ＧＥ、ＣＦ 的表观消化率（Ｐ≤０－０５） ,对ＣＰ 的表观消化率没有显著的改善作用（Ｐ＞ ０－０５） 。     

雏鸡在感梁IBDV后血浆cAMP,cGMP和IL—2水平变化

在经ＩＢＤ弱毒苗免疫和未免疫的３０－５９日龄ＡＡ鸡研究了感染ＩＢＤＶ后血浆ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ和ＩＬ－２水平动态变化。结果表明：示免疫攻毒鸡（Ａ组）、免疫攻毒鸡（Ｂ组）和未免疫未攻毒鸡（Ｃ组）在ＩＢＤＶ攻毒前１天血浆ＣＡＭＰ和ＣＧＭＰ水平Ｂ组明显高于Ａ和Ｃ组,ＣＡＭＰ／ＣＧＭＰ幽会同样是Ｂ组高于或明显高于Ａ和Ｃ组,ＩＬ－２水平三组之间无明显差异。在攻毒后的头５天内,Ｂ和Ｃ组ＣＡＭＰ明显升高,而Ａ组     

猪安氟醚麻醉时血气变化的研究

研究了猪在不同浓度安氟醚麻醉时血气的变化，结果显示：随着吸入浓度的升高，呼吸频率减慢，终末呼气二氧化碳分压（ＰcｔＣＯ_２）、动脉血二氧化碳分压（ＰａＣｏ_２）和二氧化碳总量（ＴＣＯ_２）明显上升，碱超、标准碳酸氢盐和动脉血氧分压无明显变化。经相关分析，ＰｃｔＣＯ_２与ＰａＣＯ_２呈显著正相关（ｒ＝０．９８７０），并可用ＰｃｔＣＯ_２判断麻醉深度。     

猪核移植重组胚胎的发育能力

以ＭｃＧｒａｔｈ－Ｓｏｌｔｅｒ（１９８３）提供的去（注）核方法，将猪胚胎的单个卵裂球细胞注入去核的次级成熟卵母细胞，借助电融合的方法（ＡＣ；５Ｖ，１．５ＭＨｚ，１２－１５ｓ；ＤＣ：２ｋＶ／ｃｍ，４０μｓ。电激活／融合液：０．３ｍｏｌ／Ｌ甘露醇＋－．１ｍｍｏｌ／ＬＭｇＳＯ４＋０．１ｍｍｏｌＣａｃＬ２＋７．５ｍｇ／ｍｌＣＣＢ）融入受体胞质构成重级胚，体外培养（培养液为改衣ＴＣＭ－１９９；培养条件为５％     

香猪血浆Cu,Zn,Mn含量变化与生长速度关系的研究

本研究应用ＩＣＰ—ＳＰＥＣＩ型等离子发射光谱仪对两个不同月龄的香猪血浆Ｃｕ、Ｚｎ、Ｍｎ含量进行了分析，结果表明：不同月龄香猪血浆中Ｃｕ、Ｚｎ、Ｍｎ含量不同，二月龄香猪血浆中Ｃｕ含量低于１月龄的香猪，统计学ｔ检验证明两者间存在显著差异（ｐ＜０．０５）．二月龄香猪血浆Ｚｎ、Ｍｎ含量略高于１月龄，差异不显著（ｐ＞００５）．本研究还对１—４月龄香猪的相对生长速率进行了研究，结果表明：２月龄香猪的相对生长率最高，３月龄香猪的相对生长率最低，４月龄香猪的相对生长率为中等水平．实验证明血浆中ＣＵ对香猪有促进生长的作用．     

分泌抗猪伪狂犬病毒(鄂A株)单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

将本室分离鉴定的猪伪狂犬病毒（Ｐｒｖ）鄂Ａ株纯化后免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取免疫鼠脾细胞与经８氮鸟嘌呤（８－ＡＧ）驯化的ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合。经间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）筛选,挑选强阳性孔进行亚克隆,获得５株能稳定分泌伪狂犬病毒单克隆抗体（Ｐｒｖ－ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株,分别命名为４１８、４８３、５７６、６０３、７４４。经体外连续传代及反复冻存、复苏,杂交瘤细胞均能稳体地分泌ＭｃＡｂ。培养上清液及小鼠腹水ＥＬＩＳＡ效价分别为２－５～２－７和１０－５～１０－１０。各株分泌的ＭｃＡｂ不与疱疹病毒科中的ＤＰＶ、ＩＬＴＶ、ＩＢＲＶ及ＰＰＶ发生交叉反应。阻断试验结果显示阻断率均大于５０％。其中６０３、７４４分泌的ＭｃＡｂ对用ＰＲＶ致敏的乳胶具有凝集特性。相加ＥＬＩＳＡ测定证实６０３、４８３、７４４特异性作用同一抗原位点或作用相关极为密切的抗原位点,另４种ＭｃＡｂ作用位点有部分相关性。     

氯霉素间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法的建立

以人工合成的氯霉素－牛血清白蛋白（ＣＡＰ－ＢＳＡ）为包被抗原,氯霉素（Ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ,ＣＡＰ）为竞争的半抗原,两者与一定量的抗ＣＡＰ单抗（ＣＡＰ－ＭｃＡｂ）反应。实验结果表明,理想的包被抗原浓度为１．２５μｇ／ｍｌ,抗ＣＡＰ－ＭｃＡｂ工作浓度为１：１２０００,酶标二抗工作浓度为 １： ５０００,可测最适范围为 １ｎｇ／ｍｌ－１００ｎｇ／ｍｌ,最小检测量为０．１ｎｇ／ｍｌ,批内和批间变异系数分别为３． ６２％和 ５． １９％。得到回归方程 ｙ ＝１．２７３０－ ０．６７４５ｘ（ｒ２＝ ０． ９７７９）和标准曲线,从而建立了快速定量测定 ＣＡＰ含量的间接竞争酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）。整个测定时间为６小时。