Porcine kobuvirus RT-PCR detection assay establishment and application in primary epidemiology investigation in Hubei Province

根据猪库布病毒的3D基因设计1对引物,建立了两步法RT-PCR检测方法,使用该方法分别对CSFV、PRRSV、JEV、SIV、PEDV、TGEV、GARV阳性模板及包含猪肠道病毒3D基因和口蹄疫病毒3D基因的重组质粒进行PCR检测,结果从以上9种常见猪病病原的阳性模板中均不能扩增出323bp大小的PCR产物,说明该检测方法的特异性很好,能够用作临床样品的检测.敏感性试验显示,本试验建立的检测方法能够检测到的模板最低质量浓度为180fg/mL.应用该方法对湖北省各大猪场进行了临床病料检测,在采集的165份病料中有118份样品检测为猪库布病毒阳性.在4个发生腹泻疫情的规模化猪场进行了分群抽样调查,结果显示,猪库布病毒在猪群中集中分布在发生腹泻疫情的猪群,说明猪库布病毒和现阶段的腹泻疫情有紧密的联系.     

猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒混合感染的调查

本试验通过RT-PCR方法对113份疑似病料进行了检测,用以调查猪群中猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病痛毒混合感染情况.实验结果表明:34份样品表现为猪传染性胃肠炎病毒与猪流行性腹泻病毒混合感染,占样品总数的29.2%.     

猪圆环病毒病的防治

猪圆环病毒病的病原为猪圆环病毒,为二十面体对称、无囊膜、单股环状DNA病毒。病毒粒子直径为17纳米,是目前发现的最小的动物病毒。现已知猪圆环病毒有两个血清型,即猪圆环病毒I型和猪圆坏病毒Ⅱ型。猪圆环病毒I型为非致病性病毒;猪圆环病毒Ⅱ型为致病性病毒,是断奶仔猪多系统衰竭综合征、     

SYBR Green I实时定量PCR方法检测2型猪圆环病毒

利用PCR技术扩增出2型猪圆环病毒(PCV)ORF2保守区基因107 bp片段,并克隆到pMD-19-T载体上,纯化的质粒作为PCR检测的标准模板,以10倍梯度稀释质粒为标准模板,进行荧光定量PCR,并绘制标准曲线。再以提取的PCV-2、PCV-1、猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病毒(PRV)的DNA作为模板,采用同样体系进行实时PCR检测。结果表明:建立的实时定量PCR方法,起始模板浓度与样本阈值循环数(Ct)值之间呈很好的线性关系,标准曲线斜率为-0.32,相关系数r2为0.997,Ct值为11.9~26.9。PCV-2能扩出S型荧光曲线,熔解曲线的峰狭窄单一,而PCV-1、PPV和PRV均不能扩出。对32份健康猪和32份断奶仔猪多系统消耗综合征(PMWS)可疑猪样品定量检测:健康猪阳性率为44%(14/32),病毒载量均小于104拷贝.μL-1;PMWS可疑猪阳性率96.8%(31/32),病毒载量均大于105拷贝.μL-1。实时荧光定量PCR方法可用于2型猪圆环病毒定性及定量的检测。     

猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体间接酶联免疫吸附测定方法的建立与应用

[目的]建立一种检测猪圆环病毒3型抗体的血清学方法.[方法]以猪圆环病毒3型衣壳蛋白为包被抗原,通过筛选和优化反应条件建立一种检测猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体的间接酶联免疫吸附测定方法,并进行特异性试验与重复性试验以及初步临床应用.[结果]确定检测猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体的间接酶联免疫吸附测定方法的各项最佳反应条件;仅有猪圆环病毒3型阳性血清的检测结果为阳性,显示出良好的特异性;批内变异系数和批间变异系数都小于5％,显示出良好的可重复性.在来源于北京地区与河北地区的318份猪的血清中检出猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体阳性率为32.70％,表明这两个地区存在较多的猪圆环病毒3型感染.[结论]建立了一种具有良好特异性和可重复性的检测猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体的间接酶联免疫吸附测定方法,可用于猪圆环病毒3型抗体的检测.     

猪细小病毒的症状及防御措施

猪细小病毒是猪场饲养管理过程中的大敌,一旦染上细小病毒,将会失去生殖能力,使猪场的生产不能按计划进行。另外当染病严重时,会造成猪的大量死亡,使猪场承受巨大的风险。本文针对猪细小病毒的生理生化特点,传染规律提供了一些预防,治疗的方案。     

冬季巧防猪传染性肠胃炎

猪传染性肠胃炎是一种高度接触传染性肠道疾病,以引起两周龄以下猪呕吐、严重腹泻和高死亡率为特征.虽然不同年龄的猪均易感染这种病毒,但5周龄以上的猪死亡率很低.传染性肠胃炎以病猪和带病毒猪为主要传染源,从粪便、呕吐物、乳汁、鼻分泌物以及呼出气体排出病毒污染环境,通过消化道、呼吸道而传染给易感猪.该病通常从11月中旬至翌年4月中旬呈季节性流行,该病毒冷冻时相当稳定.     

有问必答

关于猪病防治(一)问:猪呼吸道病综合征的病因主要有哪些?答:主要有两大类。一、传染性病因。1.病毒类,如:猪流行性感冒病毒、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒、猪繁殖—呼吸综合征病毒、圆环病毒等。2.支原体类,如:猪肺炎支原体。3.细菌类,如:巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、猪胸膜肺炎     

猪圆环病毒病原生物学研究进展

猪圆环病毒是单链环状DNA病毒,有2种不同的血清型:猪圆环病毒1型和猪圆环病毒2型.现有研究表明PCV1暂无致病性,PCV2则被认为是引起猪圆环病毒病的主要病原.许多国家养猪业的经济效益因此受到重大的影响.对PCV病原生物学的研究进展进行了综述.     

猪博卡病毒 N P1 基因特异性的PCR 方法建立及应用

该研究根据Genbank公布的猪博卡病毒Porcine bocavirus,PBoV的核苷酸序列,在其NP1保守区域设计一对特异性引物,建立一种能扩增多种猪博卡病毒亚型的PCR检测方法,并进行特异性试验,敏感性试验,重复性试验及可靠性检测.结果显示:所建立的PCR检测方法对猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型无交叉反应;敏感度可以检测到58pg/μL;经3次重复检测,结果一致,重复性好;对阳性产物测序,与Genbank公布的猪博卡病毒NP1序列同源性在97.3%以上,可靠性强.用建立的PCR方法对2011年重庆部分地区猪场的266份育肥猪血清样本进行检测,结果45份为猪博卡病毒阳性,证明了在重庆地区育肥猪中存在PBoV感染的情况.     

一种改良的猪圆环病毒2型荧光定量PCR检测方法的建立

[目的]利用SYBR Green Ⅰ荧光染料建立一种快速、灵敏的用于检测猪圆环病毒2型的荧光定量PCR方法.[方法]根据猪圆环病毒2型ORF2保守区的基因片段,扩增目的基因645 bp插入至PUC57载体,以重组质粒为模板进行荧光定量PCR反应条件优化及灵敏度、特异性等验证.[结果]建立的猪圆环病毒2型绝对定量检测方法与猪圆环病毒1型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪细小病毒、猪博卡病毒无交叉反应.检测猪圆环病毒2型的灵敏度是5.0×101 copies/μL,建立的标准曲线回归方程的相关系数0.999,扩增效率105.403％.[结论]成功建立一种特异性强、敏感性高、稳定性良好的绝对定量检测猪圆环病毒2型的荧光定量PCR方法,可以用于临床样品猪圆环病毒2型的检测.     

永安市规模猪场发生猪腹泻的调查

猪腹泻病具有流行范围广、发病地区多、发病率和死亡率高等特点.引起生猪腹泻的疫病有猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒病和伪狂犬病等.根据全国猪病持续监测和调查结果,当前造成生猪腹泻流行的主要病原是猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒.通过流行病学调查,了解猪腹泻的发生情况,为该病的防治提供科学依据,有着重要意义.     

抗猪FcγRⅡb多抗阻断猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体依赖增强作用研究

为验证猪FcγRⅡb在抗体依赖增强(ADE)作用中的功能,从猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性血清中提取IgG并制备F(ab′)2片段,将104 TCID50的PRRSV病毒与80μg/mL的F(ab′)2片段或抗PRRSV阳性血清(中和效价1/5.9,经128倍稀释)混合,共同感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)和Marc-145细胞,发现亚中和滴度的阳性血清能显著增强病毒对PAM的感染,但不能增强病毒对Marc-145细胞的感染;而F(ab′)2片断不能增强病毒感染;用兔抗猪FcγRⅡb多抗孵育PAM细胞,再用上述病毒与阳性血清复合物感染PAM,结果阳性血清对病毒感染的增强作用受到明显抑制。表明猪FcγRⅡb能够介导PRRSV ADE作用。     

猪传染性胃肠炎病毒SYBR-Green I荧光定量PCR检测方法的建立

为了建立猪传染性胃肠炎病毒SYBR-Green I荧光定量PCR检测方法,利用RT-PCR技术扩增出猪传染性胃肠炎病毒N基因中324 bp的片段,并克隆到pGEM-T Easy载体上,纯化的质粒作为模板进行SYBR Green I荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立了猪传染性胃肠炎病毒的荧光定量PCR检测方法.该方法检测灵敏度可达5×101拷贝数.μL-1,与猪伪狂犬病毒、猪蓝耳病毒、猪圆环病毒、猪瘟病毒、猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒均不发生交叉反应,具有良好的特异性和重复性.结果表明,建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床TGEVN基因的检测.     

引起猪繁殖障碍的常见传染病的分析和临诊要点

<正>1猪繁殖与呼吸障碍综合征本病是由动脉炎病毒属病毒引起的,是世界范围内多数国家猪的重要疾病。多数PRRS病毒株在妊娠90 d前不能通过胎盘,因此,多数流产都发生在猪妊娠末期。患猪产出的一窝仔猪中,有新鲜和自溶的死胎儿、受感染的弱仔以及未受感染的健康仔猪,这些健康猪常在生后的几d内     

猪传染性胃肠炎的防治

猪传染性胃肠炎是猪的一种急性肠道传染病.临床特征为腹泻、呕吐和脱水.可发生于各种年龄的猪,10日龄以内的子猪病死亡率很高,5周龄以上的猪病死亡率很低,较大的或成猪几乎没有死亡.其病原体为冠状病毒科的猪传染性胃肠炎病毒,主要存在于空肠、十二指肠及回肠的黏膜,在鼻腔、气管、肺的黏膜及扁桃体、颌下及肠系膜淋巴结等处,也能查出病毒.     

猪细小病毒SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测方法的建立

利用PCR技术扩增出猪细小病毒VP2保守区基因194 bp片段,并克隆到pGEM T载体上,纯化质粒作为PCR检测的标准模板,以10倍梯度稀释质粒为标准模板,进行SYBR GreenⅠ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立了猪细小病毒的荧光定量PCR检测方法.该方法检测灵敏度可达1.0×102拷贝/μL,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒、猪乙型脑炎病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒和猪流感病毒不发生交叉反应,具有良好的特异性和重复性;对10份疑似病料和阴性病料进行了检测,发现10份均为荧光定量PCR阳性,而常规PCR只能检测出7份阳性.结果表明,建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床猪细小病毒(PPV)的检测.     

仔猪病毒性腹泻的综合控制策略

正仔猪病毒性腹泻一直是养殖过程中的常见病,多发病。导致仔猪腹泻的病毒种类很多,临床上常见的有猪流行性腹泻病毒,猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒。腹泻一旦发生,将会导致仔猪病死率较高,即使耐受过的仔猪也会出现生长迟缓,易形成"僵猪",如果该病不能及时被治疗和控制,必会引起饲料报酬降低,猪增重下降,给养殖业带来很大的经济损失。本文主要针对仔猪病毒性腹泻的原因和临床诊断提出相应控制策略。1原因     

猪肠道冠状病毒检测技术研究进展

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的全球传播引发人们对动物冠状病毒的高度关注.猪肠道冠状病毒(swine en-teric coronavirus,SECoV)是一类能够引起猪腹泻、呕吐等症状的猪肠道病原体.本文就猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪德尔塔冠状病毒和猪急性腹泻综合症病毒四种SECoV检测技术的研究...     

猪蓝耳病的病因及防控

<正>猪蓝耳病(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株引起的一种急性高致死性传染病。2007年前被称作"猪高热病","三高"(高发病率、高体温、高死亡率)是高致病性猪蓝耳病的显著特点。2007年该病曾在我国多地暴发流行,对养猪生产危害极大,为国家强制免疫病种。1.病原体猪蓝耳病病毒为单股正链DNA病毒属新设立的动脉炎病毒科、动脉炎病毒属,为一种有囊膜的病毒,容易发生变异。我国发现的高致病性猪蓝耳病是由