1株犬源大肠杆菌的分离鉴定与耐药性分析

为检测北京市某动物医院1例宠物犬顽固性腹泻的原因,通过采集肛门拭子进行细菌分离鉴定试验,分离出1株大肠杆菌,命名为37-Canine株。通过细菌形态学观察、生化鉴定、16S rDNA序列分析、大肠杆菌荧光PCR致泻型检测等方法对该病原菌进行分析,并采用K-B药敏纸片法及耐药基因PCR检测测定其耐药情况。结果表明:37-Canine株经PCR电泳试验,16S rDNA测序分析,与GenBank中大肠杆菌参考株16S rDNA基因序列的同源性达到99%,进化树显示与AP018488.1参考株被划为一支;经大肠杆菌致泻型荧光PCR检测为EIEC-EPEC-EHEC的杂合型菌株,具有致泻性;对临床常用药物头孢曲松钠、头孢噻肟、诺氟沙星3种药物敏感,对多黏菌素B、庆大霉素2种药物中度敏感,对阿莫西林、磺胺嘧啶、氨苄西林3种药物耐药;经耐药基因PCR检测显示,37-Canine株携带氨基糖苷类、四环素类、氯霉素类耐药基因,出现多重耐药。本试验为临床宠物犬顽固性腹泻病例合理使用抗生素及犬源大肠杆菌的防治提供了参考依据。     

新疆维吾尔自治区和田地区规模化羊场腹泻羔羊源大肠杆菌的分离鉴定及毒力基因和耐药基因分析

[目的]了解新疆维吾尔自治区和田地区规模化羊场腹泻羔羊源大肠杆菌的毒力基因和耐药基因携带情况。[方法]从和田地区3个规模化羊场收集70份腹泻羔羊肛拭子,采用传统的细菌分离培养、染色镜检、生化鉴定以及细菌16S rDNA序列PCR扩增、测序等方法对样本进行大肠杆菌的分离鉴定,利用PCR法对分离菌株进行大肠杆菌系统发育群分型以及毒力基因、耐药基因检测。[结果]经形态学观察、生化鉴定、16S rDNA序列分析,从70份腹泻羔羊肛拭子中分离鉴定出38株大肠杆菌,分离率为54.3%(38/70)。系统发育群分型鉴定分析显示,分离菌株以B1群为优势群（68.4%,26/38）,其次是A群（26.3%,10/38）和D群（5.3%,2/38）,未检测出B2群。毒力基因检测结果显示,在8种大肠杆菌毒力基因中检测出4种,携带fimC基因的菌株比例最高,为92.1%(35/38);其次是irp2基因47.4%(18/38)、hlyF基因36.8%(14/38)和fyuA基因34.2%(13/38),未检测出eaeA、ST、LT和Stx1基因。耐药基因检测结果显示,在8种大肠杆菌耐药基因中检测到6种,以磺胺...     

竹鼠源棒状杆菌分离鉴定及致病性分析

从病死竹鼠体内分离到1株细菌,通过形态学观察、生化试验鉴定、16S rDNA基因测序分析及系统进化树构建等方法对分离菌种属进行确定,并采用纸片扩散法进行药敏试验,PCR方法检测耐药基因和毒力基因,人工感染小鼠试验确定分离菌的致病力。病原鉴定显示,分离菌为革兰阳性杆菌,16S rDNA基因测序及BLAST比对显示其与棒状杆菌序列相似度达92.1%～99.2%,结合生理生化鉴定结果确定分离菌为棒状杆菌;药敏试验显示,该分离菌对氟苯尼考、头孢氨苄和青霉素等药物敏感,对复方新诺明、四环素和红霉素等药物表现耐药,耐药基因检测结果显示为oqxB、tetX、sul1和ermF阳性,与药敏试验表型一致;该菌对小鼠有致病性,毒力基因检测发现,分离菌携带fyuA和papA。本研究为竹鼠棒状杆菌病预防及合理用药提供依据。     

新疆和田地区羊源绿脓杆菌的分离鉴定与药敏试验

为了解新疆和田地区某规模化羊场羔羊腹泻病例主要感染的病原菌及其耐药情况,试验采集腹泻羔羊肛拭子进行细菌的分离培养、革兰氏染色,挑取纯化后的单菌落进行生化鉴定和16S rRNA基因鉴定,并对分离菌株进行药敏试验和小鼠致病性试验。结果表明：分离菌株革兰氏染色镜检可见单个存在或成对排列的革兰氏阴性短杆菌,结合生化试验结果初步鉴定为绿脓杆菌,命名为6f。该菌株16S rRNA序列在NCBI中进行BLAST比对发现,与绿脓杆菌菌株核苷酸相似性达到100%,高度同源,最终鉴定分离菌株6f为绿脓杆菌。分离菌株6f对头孢拉定、卡那霉素、氨苄西林等14种抗生素高度敏感,对头孢他啶、多黏菌素B中度敏感,对青霉素、克林霉素、麦迪霉素、万古霉素耐药。分离菌株6f对小鼠具有强致病性。说明引起该规模化羊场羔羊腹泻的病原菌是绿脓杆菌,该菌对大多数抗生素敏感。     

兔大肠杆菌的分离、鉴定及药敏试验

为了研究引起兔腹泻的病原种类、致病性以及耐药性情况,试验采用细菌分离培养、生化鉴定、16S rRNA序列测定、血清型鉴定及动物致病性试验等方法进行检测。结果表明:所分离到的细菌为大肠杆菌,血清型为O6型;对小白鼠有致病性;对羧苄青霉素、青霉素等5种药物为中度敏感,对氟苯尼考磺胺六甲、头孢噻肟等11种药物高度敏感。     

羔羊腹泻病原菌常规分离鉴定及药敏试验

从安微省合肥、滁州地区的肉羊养殖场中共采集到羔羊腹泻粪样11份,进行细菌分离培养与镜检,将分离的细菌进行纯培养,并进行生化鉴定、药敏试验和小鼠攻毒致病性检验。结果显示:在检测的11份粪样中,共检测出大肠杆菌11株、奇异变形杆菌7株;致病性试验显示大肠杆菌和奇异变形杆菌均对小鼠有致病力,但奇异变形杆菌致病性弱于大肠杆菌;药敏试验显示分离菌株对恩诺沙星、氟苯尼考、卡那霉素、丁胺卡那霉素、菌必治、复方新诺明、丙氟哌酸、头孢唑啉等敏感,对庆大霉素、氟哌酸等常规药物均表现出一定的耐药性,对青霉素、链霉素、克拉霉素、红霉素和强力霉素等完全耐药。结果表明,大肠杆菌和奇异变形杆菌都有一定的致病性,上述地区羔羊腹泻是由混合感染引起,且混合感染致病性更强。     

杂交鲟维氏气单胞菌的分离鉴定及其耐药性分析

试验旨在对贵州省某养鱼场发病杂交鲟体内分离的优势菌株进行鉴定、致病力探究及耐药性分析。本试验通过革兰染色、生化鉴定、细菌16S rDNA基因分析、动物回归试验、药敏试验、部分毒力基因检测与耐药基因检测。结果显示:分离菌为革兰阴性短杆菌,细菌16S rDNA扩增测序与比对,得大小为1 477 bp的片段,其片段基因序列与GenBank中的维氏气单胞菌序列相似度达99.00%,药敏试验显示:分离菌对环丙沙星、氟苯尼考、头孢哌酮等药物敏感,对四环素、磺胺异唑、苯唑西林药物出现耐药,耐药基因检测显示:分离菌含有耐磺胺基因(Sul1,sul2)、Ⅰ类整合子(Intl1)3种耐药基因,毒力基因检测显示:分离菌含有气溶素(Aer)和粘附素(Aha)两种毒力基因。综合本试验结果,分离菌为维氏气单胞菌(A.veronii),含有毒力基因,并对环丙沙星、氟苯尼考、头孢哌酮等药物敏感。本试验对贵州地区鲟发病流行的病因做出准确诊断,为该地区细菌性鱼病预防与合理用药提供依据。     

一株仔猪腹泻大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验

从红河州某猪场采集腹泻仔猪粪便及肛门拭子样品,进行细菌的分离培养、生化试验、16S rDNA扩增、测序及序列同源性分析,确诊分离菌为大肠杆菌。致病性试验和药敏试验表明,分离菌对小鼠有致病性,对7种药高敏、8种药中敏、12种药有耐药性。为该猪场仔猪腹泻的临床防控提供了依据。     

致病性大肠杆菌所致犊牛腹泻的病原分析及治疗

采集36头腹泻犊牛的新鲜粪样,进行细菌的分离培养、生化和PCR鉴定,并进行致病性试验、血清型鉴定、药敏试验、耐药基因检测和治疗试验。结果显示,初步分离到25株疑似大肠杆菌菌株,经16S rDNA鉴定全部为大肠杆菌。致病性试验显示,分离株有较强的致病性,取死亡小鼠实质器官进行病原鉴定,均分离到大肠杆菌。25株分离株共覆盖6种血清型,其中O157和O152为优势血清型。25株分离菌对强力霉素、复方新诺明耐药率最高,达88%;对氨苄西林、链霉素、环丙沙星的耐药率分别为76%,72%,56%。所有分离株均携带大环内酯类ermB基因和四环素类tetB基因,大部分携带blaTEM(72%)、aaC2(64%)、aaC4(68%)和qnrB(60%)基因。治疗试验表明,新霉素与白头翁散结合治疗大肠杆菌所致犊牛腹泻的效果最佳。结果表明,犊牛源腹泻大肠杆菌菌株对临床常见抗生素产生了不同程度的耐药,并携带多种耐药基因,建议采用中西药结合治疗该病。本研究为大肠杆菌所致犊牛腹泻的合理用药和有效防治提供了依据。     

1株山鸡源致病性大肠杆菌的分离鉴定

为查明秦皇岛市某山鸡养殖场山鸡大批量死亡病因,试验对分离到的致病优势菌株进行生化鉴定和16S rRNA基因序列分析,并测试分离菌对21种抗生素的敏感性,进一步采用PCR方法检测分离菌的耐药基因。利用清洁级昆明小鼠和SPF鸡胚分别对分离菌进行致病性试验,并采用PCR方法检测分离菌的毒力基因。结果显示：分离菌为革兰氏阴性杆菌,在伊红美蓝培养基上生长出有金属光泽的菌落,生化特性与大肠杆菌生化特性符合率高达99%。BLAST分析发现,分离菌16S rRNA序列与大肠杆菌的基因相似性高达99.8%。分离菌对恩诺沙星和阿米卡星高度敏感,对青霉素、头孢曲松等15种药物耐药。分离菌的磺胺类、β-内酰胺类、四环素类的耐药基因与耐药表型基本相符,其余耐药基因与耐药表型不符,提示该分离菌可能存在其他的耐药机制。致病性试验结果显示,分离菌具有较强致病性,共检测到12种大肠杆菌主要毒力基因。研究表明,分离菌为山鸡源致病性大肠杆菌,且耐药情况复杂,具有较强的毒力和致病性。     

一株鸡源性肠球菌的鉴定及耐药机制分析

本试验旨在鉴定一株从肉鸡体内分离的广谱耐药菌,并从分子生物学角度对该株细菌的耐药机理进行探讨。根据《常见细菌系统鉴定手册》标准对该菌进行培养特性、生化试验鉴定,设计1对16S rDNA通用引物扩增其16S rDNA并测序鉴定;根据该菌的药物敏感性试验结果设计了12对引物扩增其基因组上耐药基因。细菌培养特性和生化试验结果显示该菌为一株肠球菌,PCR扩增出大小为1465 bp的目的片段,药敏试验显示该株细菌耐受多种抗生素,PCR扩增其耐药基因发现存在ant(6)-iv、OXA-10、tetM、CTX-M-1、TEM基因。最终鉴定该株细菌为一株肠球菌,耐药基因的存在是其产生耐药性的原因之一。     

一起赛鸽腹泻病的诊断分析

为了确定一起赛鸽腹泻病病原及敏感药物,采用细菌分离鉴定和新城疫病毒RT-PCR检测方法对腹泻赛鸽的5份粪便进行检测,并对分离的细菌进行生物学特性研究。结果表明:新城疫病毒RT-PCR检测为阴性;分离到6株革栏氏阴性小杆菌,经生化鉴定为大肠杆菌,分离株对小白鼠具有较强致病性,对头孢克罗、头孢唑啉、卡那霉素和氟苯尼考高度敏感,对磺胺甲唑耐药。     

猪粪便中致病性病原菌检测与耐药性分析

为了检测猪粪便中的致病微生物并分析其耐药性,试验采用细菌分离培养、生化试验、16S rRNA PCR检测与测序、致病性试验等方法对从镇江地区不同养猪场采集的100份粪便样品进行病原菌鉴定,采用K-B药敏纸片法测定致病性病原菌的耐药性。结果表明:从100份粪便样品中分离得到大肠杆菌25株、沙门氏菌17株、金黄色葡萄球菌15株,其中致病性大肠杆菌20株,致病性沙门氏菌15株,致病性金黄色葡萄球菌10株;分离菌16S rRNA PCR扩增得到大小约为1 492 bp的目的条带;57株分离株的PCR产物测序结果与GenBank中参考株基因序列的同源性高于97.0%;致病性大肠杆菌对阿莫西林、环丙沙星、磺胺间甲氧嘧啶等12种药物的耐药率在65.0%～95.0%之间,致病性沙门氏菌对阿莫西林、氟苯尼考、庆大霉素等12种药物的耐药率在46.7%～100%之间,致病性金黄色葡萄球菌对阿莫西林、庆大霉素、氟苯尼考等9种药物的耐药率在50.0%～100%之间,且存在多重耐药性。     

狐狸源小肠肠球菌分离鉴定与药敏试验

为确定某养殖场患病死亡狐狸的病原菌,本试验对病死狐狸进行剖检和细菌分离培养、生化鉴定以及16S rDNA鉴定、动物致病性试验和药敏试验。结果显示,分离菌株为革兰阳性球菌,经过生化鉴定和16S rDNA序列分析,确定分离菌株为小肠肠球菌,并命名为E.hirae QHD-1;动物回归试验结果显示,分离菌株E.hirae QHD-1对小鼠具有较强的致病性,LD_(50)为1.26×10~4 CFU;药敏试验结果显示,分离菌株E.hirae QHD-1对氨苄西林和恩诺沙星等药物敏感,对替米考星、阿米卡星等耐药;毒力因子检测结果显示,该分离株具有较强的致病力。毛皮动物小肠肠球菌的感染病例尚未见有报道,本试验丰富了狐狸病原菌相关的研究,并为防控该菌引起的疾病提供了重要参考资料。     

一株门多萨假单胞菌的分离鉴定及药物敏感性分析

试验旨在确定感染黄颡鱼的病原菌并探讨其耐药性。采用细菌培养、生理生化鉴定及16S rDNA序列分析方法进行菌株分离鉴定,运用PCR方法扩增耐药基因,用纸片扩散法对分离菌进行药敏试验。结果显示,分离菌与门多萨假单胞菌基本一致,16S rDNA基因长度为1 442 bp。同源性及系统进化树分析显示,该菌16S rDNA序列与门多萨假单胞菌NK-01同源性为99.6%,亲缘关系最近。综合判定分离菌为门多萨假单胞菌,命名为fsznc-01。耐药基因检测结果显示,分离菌fsznc-01含有β-内酰胺类耐药基因TEM,氨基糖苷类耐药基因aph（3'）-Ⅱa、aac（6）-Ⅰb、aac（3）-Ⅱa及磺胺类耐药基因Sul1和Sul2,未检测出磺胺类耐药基因Sul3。药敏试验结果显示,分离菌fsznc-01对头孢他啶、庆大霉素和哌拉西林等药物敏感,对头孢氨苄、头孢唑林和头孢拉定耐药。本试验结果可为预防门多萨假单胞菌感染导致的鱼类疾病提供参考依据。     

一例鸡大肠杆菌病的病原分离鉴定

为确诊某养鸡场发病的原因,采集临床病死鸡的肝脏、脾脏进行细菌分离培养,并通过细菌形态学观察、生化试验、分子生物学鉴定和药物敏感性试验.结果:分离细菌为革兰氏阴性杆菌,菌落形态和生化鉴定特征与大肠杆菌相符;16S rDNA PCR扩增及基因同源性分析确定为大肠杆菌;菌株对安普霉素、泰妙菌素、多西环素、硫酸粘菌素较敏感,对替米考星、泰万菌素、磺胺间甲氧嘧啶、泰乐菌素、阿莫西林存在耐药性.     

大肠杆菌分离鉴定及其耐药性试验

为了确定采集自内蒙古地区某牧场的病料内的病原菌,对其进行细菌的分离培养。将分离培养出的2株病原菌进行16S rDNA扩增、细菌生化鉴定、致病性试验以及细菌耐药性试验。结果表明,分离菌在伊红美蓝琼脂培养基上可生长出暗红色或黑色并且带有金属光泽的菌落;镜检可见,分离菌为革兰阴性杆菌;分离菌生化鉴定结果与大肠杆菌标准菌株ATCC 25922测定的结果相一致;分离菌的16S rDNA与大肠杆菌标准菌株16S rDNA PCR扩增结果相一致;分离到的2株大肠杆菌均具有致病性,对多种抗生素均有耐药性。结果提示,该次分离得到的病原菌主要为具有多重耐药性的致病性大肠杆菌。     

一株门多萨假单胞菌的分离鉴定及药物敏感性分析

试验旨在确定感染黄颡鱼的病原菌并探讨其耐药性。采用细菌培养、生理生化鉴定及16S rDNA序列分析方法进行菌株分离鉴定,运用PCR方法扩增耐药基因,用纸片扩散法对分离菌进行药敏试验。结果显示,分离菌与门多萨假单胞菌基本一致,16S rDNA基因长度为1 442 bp。同源性及系统进化树分析显示,该菌16S rDNA序列与门多萨假单胞菌NK-01同源性为99.6%,亲缘关系最近。综合判定分离菌为门多萨假单胞菌,命名为fsznc-01。耐药基因检测结果显示,分离菌fsznc-01含有β-内酰胺类耐药基因TEM,氨基糖苷类耐药基因aph(3′)-Ⅱa、aac(6)-Ⅰb、aac(3)-Ⅱa及磺胺类耐药基因Sul1和Sul2,未检测出磺胺类耐药基因Sul3。药敏试验结果显示,分离菌fsznc-01对头孢他啶、庆大霉素和哌拉西林等药物敏感,对头孢氨苄、头孢唑林和头孢拉定耐药。本试验结果可为预防门多萨假单胞菌感染导致的鱼类疾病提供参考依据。     

猪源耐药性大肠杆菌的分离与鉴定

为了弄清某猪场猪腹泻的病原,试验采用染色与形态观察、培养特性观察、生化试验、16S rRNA序列比对等方法进行细菌鉴定,构建16S rRNA系统发育树,采用纸片扩散法测定分离细菌的药物敏感性。结果表明:从腹泻猪的十二指肠中分离到1株细菌,分离细菌的染色与形态特征、菌落特征、培养特性和生化特征与大肠杆菌基本符合,16S rRNA基因序列与猪肉源(CP025318株)、犬源(CP023359株、CP010134株)、人源(CP022407株、CP018948株、CP023349株)的同源性均高达99.8%,确定该分离菌株为大肠杆菌。该株大肠杆菌与猪大肠杆菌CP025753株的亲缘关系最近,对所测试的21种抗生素均耐药。说明临床中猪大肠杆菌的耐药性愈发严重。     

犊牛腹泻大肠杆菌的分离鉴定及系统进化树分析

为犊牛腹泻病的预防提供理论依据,试验无菌采取犊牛腹泻病牛粪便,进行细菌的纯培养及动物试验筛选致病菌株,利用16S rRNA基因测序,建立病原菌系统进化树,结合致病菌O抗原检测和BD Phoenix~(TM )100全自动微生物鉴定及药敏系统对病原菌进行分析鉴定,最终确定该致病菌的种类并进行治疗与后期防控。结果显示,根据致病茵的O抗原单因子血清检测、 16S rRNA基因测序,构建的系统进化树以及BD Phoenix~(TM )100全自动微生物鉴定及药敏系统鉴定,确定该致病菌株为大肠杆菌O132型并命名为DG;药敏结果显示,该大肠杆菌对阿米卡星、亚胺培南、美洛培能、哌拉西林4种药物敏感,对庆大霉素、头孢唑肟和头孢他啶等13种药物耐药;进化树分析显示该菌与人腹泻的肠膜分离(CP024978.1)、患者粪便分离(CP024992.1)大肠杆菌的亲源性达100%。结果表明,该例犊牛腹泻是由大肠杆菌O132型导致。