影响注射用白油佐剂免疫效果的因素分析

为分析影响白油佐剂免疫效果的主要因素,在前期研究基础上,参照国内大量进口白油GW1的馏分烃类组成及含量,制备出3批白油（JH）。以免疫效果较好的国内白油（GN1、GN2）和进口白油（GW1、GW2）作参照,首先分析了白油样品的馏分烃类组成含量和正碳数分布数据;然后分别制备新城疫灭活疫苗进行免疫,检测免疫鸡血清抗体效价和药物残留情况。结果显示,白油样品杂质含量由高到低的顺序是GW2＞GN2＞GW1＞GN1＞JH2＞JH3＞JH1,免疫效果由高到低的顺序是JH2＞GW1＞JH1＞GN2＞GN1＞GW2＞JH3。试验表明,影响白油佐剂免疫效果的主要因素是总芳烃含量和重金属含量,其次是白油的运动黏度。     

不同白油佐剂制备的H9N2灭活疫苗在SPF鸡上的免疫效果初试验

为了比较不同厂家的注射用矿物白油佐剂的免疫效果,试验采用3个不同黏度的国外白油样品,按照《中华人民共和国兽药典》进行注射用白油质量检验、制备3批H9N2油乳剂灭活疫苗,分别以0.3ml/只剂量,胸部肌肉注射接种28日龄SPF鸡,接种后14d、21d、28d、35d、42d分别进行疫苗的药物残留吸收检查和血清抗体效价检测。结果表明:3种佐剂疫苗的安全性、稳定性均良好;应用WG40白油佐剂的灭活疫苗,免疫SPF鸡产生的H9N2禽流感HI抗体水平优于其它两种佐剂,免疫3周后检测到的H9N2禽流感抗体水平均合格,WG40确定为最佳白油佐剂。     

不同白油佐剂制备的H_9N_2灭活疫苗在SPF鸡上的免疫效果初试验

为了比较不同厂家的注射用矿物白油佐剂的免疫效果,试验采用3个不同粘度的国外白油样品,按照《中华人民共和国兽药典》进行注射用白油质量检验、制备3批H_9N_2油乳剂灭活疫苗,分别以0.3ml/只剂量,胸部肌肉注射接种28日龄SPF鸡,接种后14、21、28、35、42d分别进行疫苗的药物残留吸收检查和血清抗体效价检测。结果表明:3种佐剂疫苗的安全性、稳定性均良好;应用WG40白油佐剂的灭活疫苗,免疫SPF鸡产生的H_9N_2禽流感HI抗体水平优于其它两种佐剂,免疫3周后检测到的H_9N_2禽流感抗体水平均合格,确定WG40为最佳白油佐剂。     

不同来源白油佐剂质量分析及其制备的禽流感疫苗安全性与免疫效力研究

通过抽取3种来源注射用白油LH、MC、HZ,按照<中华人民共和国兽药典>附录"注射用白油质量标准"及企业内控质量标准要求进行成分分析,3种白油在黏度、稠环芳烃含量等指标方面存在差异;将上述来源白油佐剂制备的共计6批禽流感灭活疫苗分别以0.3mL/只及0.6mL/只剂量,经胸部肌肉和颈部皮下注射途径接种SPF鸡,接种后8、13、20、31、41、48 d分别进行疫苗的安全性检查和免疫效力检测.疫苗安全性检验结果表明:疫苗免疫后均导致注射部位出现局部病变和不吸收现象,恢复较快的是黏度为5.7mm2/s的LHl、LH2组及黏度为11.2mm2/s的HZ组.黏度为7.26mm2/s、稠环芳烃含量偏高的MC组吸收稍差;疫苗效力检验结果表明:黏度较低的LH1～LH4组疫苗免疫后抗体产生时间、维持水平均优于MC组、HZ组.     

牛传染性鼻气管炎病毒LN01/08株灭活疫苗的研制

为研制牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)灭活疫苗,本研究以国内分离鉴定的IBRV LN01/08株为种毒,优化病毒增殖条件,获得病毒滴度达108.0TCID50/mL,将其灭活制备疫苗.为比较不同免疫佐剂的效果,分别以矿物质白油和Montanide ISA206佐剂配制灭活疫苗,进行牛体免疫试验.临床观察和血清中和抗体检测结果表明,Montanide ISA206佐剂乳化的疫苗在降低副反应和增强免疫效果方面优于矿物质白油佐剂.应用Montanide ISA206佐剂制备3批灭活疫苗,并对其安全性和免疫保护效果进行测定.结果表明该疫苗安全可靠,对强毒攻击可产生较好的抵抗力,攻毒保护率达80%.疫苗在2℃～8℃保存12个月后仍能保持良好的免疫效果.     

重组禽流感病毒三价灭活疫苗对鹅的免疫效果评估试验

为提高重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗的免疫效果,本试验采用三种不同注射用矿物白油佐剂制成的三批(试2020004批、试2020005批和试2020006批,分别编组为A、B和C)重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗,并对鹅进行腿部肌肉注射、胸部肌肉注射、颈部皮下注射.在免疫前、免疫后21d、免疫后28d、...     

不同型号白油ND油乳剂灭活苗免疫比较实验

用7#白油及兽用白油分别与乳化剂和ND尿囊液制备油乳剂灭活疫苗,疫苗检验合格后,免疫8周龄SPF鸡。免疫后每周检测血清中ND抗体滴度,并观察油苗的吸收情况。试验结果表明,与7#白油疫苗相比,兽用白油疫苗粘稠度稍低,但吸收速度快、抗体上升水平高,免疫效果较好。     

不同型号白油ND油乳剂灭活苗免疫比较实验

用7#白油及兽用白油分别与乳化剂和ND尿囊液制备油乳剂灭活疫苗，疫苗检验合格后，免疫8周龄SPF鸡。免疫后每周检测血清中ND抗体滴度，并观察油苗的吸收情况。试验结果表明，与7＃白油疫苗相比，兽用白油疫苗粘稠度稍低，但吸收速度快、抗体上升水平高，免疫效果较好。     

三种白油用于油乳剂灭活疫苗的安全性和有效性研究

为了研究三种国产白油用于油乳剂灭活疫苗时的安全性和有效性,试验对三种不同工艺生产的国产白油(004、006、009)及进口白油(Marcol 52)进行了检测,分别制备鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联油乳剂灭活疫苗,将四种疫苗以0.5 mL/只剂量经颈背部皮下免疫7日龄SPF鸡,分别于免疫后第14,21,28天剖检观察注射部位,并对注射部位进行组织病理学观察。四种疫苗以0.3 mL/只剂量经颈背部皮下免疫7日龄SPF鸡,分别于免疫后第14,28,60天采血测定鸡新城疫病毒和H9亚型禽流感病毒HI抗体效价。结果表明:006白油中C16～C20含量最高,009白油最低。四种疫苗均未引起免疫鸡出现精神及食欲下降等全身反应以及硬结、脓肿、溃烂等注射局部的不良反应,但C16～C20含量最高的006白油制备的疫苗吸收速度更快,在免疫后第14,21天注射部位疫苗残留最少。组织病理学观察可见,在免疫后第14～21天时,注射部位均有未吸收疫苗形成的空泡,空泡周围有炎性细胞浸润,但在免疫后第21天006白油制备的疫苗注射部位疫苗残留形成的空泡明显少于其他三种白油制备的疫苗。C16～C20含量最高的006白油制备的疫苗,抗体产生速度、抗体峰值及持续时间均优于其他三种白油制备的疫苗。说明白油中C16～C20含量越高,安全性和有效性越强,二者呈正相关。     

禽霍乱荚膜疫苗对SPF鸡免疫保护效果的研究

为了研究粗提的禽霍乱荚膜抗原对SPF鸡的免疫保护效果,试验选取了禽多杀性巴氏杆菌C48-1株,制备了粗提的荚膜抗原,将荚膜抗原和铝胶生理盐水按4∶1的比例混合,制备了两批疫苗(批号分别为2017001、2017002),在制备过程中检验了菌液的活菌数及荚膜抗原的蛋白质、SDS含量,并进行无菌检验。将制备的两批疫苗分别免疫21日龄SPF鸡,并于免疫后第21天用C48-1株进行攻菌,攻菌后连续观察7 d,每天记录鸡只死亡及发病情况。结果表明:经检验,两批疫苗蛋白质含量均在2. 0 mg/m L以上,SDS含量均为0. 03%,符合疫苗的质量标准。两批疫苗对42日龄SPF鸡的保护率为70%～80%。说明该疫苗对预防禽霍乱具有较好的效果。     

副猪嗜血杆菌灭活疫苗佐剂的筛选

为了评价铝胶、蜂胶及白油佐剂对副猪嗜血杆菌的免疫增强效果,我们将铝胶、蜂胶和白油3种佐剂分别与副猪嗜血杆菌血清5型菌株联合制备灭活疫苗,然后接种雄性成年家兔,采用ELSIA方法分别检测3种灭活苗在免疫期间副猪嗜血杆菌P5蛋白的抗体效价。结果显示:3次免疫后,白油佐剂免疫组的平均效价为1∶4000,铝胶佐剂免疫组的平均效价为1∶700,蜂胶佐剂免疫组的平均效价为1∶100,无佐剂对照组的平均效价为1∶100。说明这3种佐剂中免疫增强效果最好的为白油,铝胶次之。     

膜分离法纯化浓缩的猪细小病毒灭活疫苗效果研究

为了研究纯化浓缩的猪细小病毒灭活疫苗的免疫效果,应用微滤/超滤管式陶瓷膜分离系统对猪细小病毒细胞收获液进行纯化浓缩,使浓缩液病毒平均含量由10~(4.7)TCID_(50)/mL提高到10~(6.5)TCID_(50)/mL;将纯化浓缩的病毒液经检验合格后,进行甲醛灭活,与注射用矿物白油佐剂制成油包水灭活疫苗;按照猪细小病毒灭活疫苗的质量标准,对制备的灭活疫苗进行检验与免疫效果试验。结果显示:纯化浓缩的猪细小病毒液杂蛋白去除率平均达到71.6%左右;制备的三组灭活疫苗检验均合格;免疫至63 d时,免疫猪体内抗猪细小病毒抗体(HI)水平分别为:纯化浓缩的灭活疫苗平均高达9.62 log_2稀释倍数,常规疫苗平均为8.78log_2稀释倍数,差异显著(P0.05)。试验表明:疫苗病毒细胞收获液进行膜纯化技术处理后,免疫效果显著优于未经纯化的常规灭活疫苗。     

A:L1型鸭源多杀性巴氏杆菌灭活疫苗制备及免疫效力研究

【目的】制备鸭多杀性巴氏杆菌灭活疫苗,有效控制贵州省鸭多杀性巴氏杆菌发生和流行。【方法】以实验室分离保存的A:L1型多杀性巴氏杆菌地方流行株为菌种,通过涂板法测定该菌株生长曲线,并采用改良寇氏法计算该菌株对鸭的半数致死量(median lethal dose, LD₅₀),将该菌培养至终浓度为1×10¹⁰ CFU/mL后分别制备白油佐剂灭活疫苗和卡波姆佐剂灭活疫苗,经疫苗质量检验后进行免疫雏鸭试验;通过攻毒保护试验评价比较两种疫苗的保护率,并对攻毒试验鸭肝脏、肺脏、脾脏进行病理组织学观察。【结果】A:L1型多杀性巴氏杆菌疫苗株培养至18 h到达峰值,活菌数可达1.0×10¹⁰ CFU/mL;LD₅₀为5 CFU;制备的两种疫苗安全性良好;攻毒保护试验结果显示,一免后卡波姆佐剂灭活疫苗免疫保护率可达62.5%,高于白油佐剂灭活疫苗(50.0%)及商品灭活疫苗(50.0%)。二免后卡波姆佐剂灭活疫苗优势更为明显,免疫保护率可达87.5%,高于白油佐剂灭活疫苗(75.0%)及商品灭活疫苗(62.5%)。病...     

中药黄芪多糖的免疫佐剂作用

分别将黄芪多糖提取物、白油-吐温、氢氧化铝作为佐剂制备金黄色葡萄球菌灭活苗混合免疫家兔和奶牛,观察家兔免疫前后血清抗体滴度变化以及攻毒后白细胞数目变化和淋巴细胞百分比变化。对奶牛免疫后测其血清抗体和乳汁中体细胞数变化,结果注射疫苗后乳汁中体细胞数都有所下降,黄芪多糖组较其它组下降较快,幅度较大。黄芪多糖和抗原混合物免疫动物后未见不良反应,且抗原免疫血清抗体比氢氧化铝和白油-吐温佐剂组的抗体滴度增加快,幅度显著增高且抗体维持一个较高水平,而攻毒后家兔白细胞数和淋巴细胞数也较氢氧化铝和白油-吐温佐剂组增加较多。因此黄芪多糖是一种有效的佐剂。     

4型禽腺病毒HLJ1701株灭活疫苗的研制

利用4型禽腺病毒HLJ1701株进行灭活疫苗的研制,并对疫苗的免疫效果进行评价,为家禽4型禽腺病毒的防控提供数据及参考。将HLJ1701株用灭菌生理盐水作10~4倍稀释后,接种9日龄SPF鸡胚,37℃孵育72 h后收获感染鸡胚尿囊液,经甲醛灭活后,加白油佐剂乳化制成油乳剂灭活疫苗,对制备疫苗的性状、安全性、免疫效力等进行检验。结果显示,制备的3批4型禽腺病毒灭活疫苗(HLJ1701株)均为油包水型,黏度均在50 cP以内,对3批疫苗取样,样品经3000 r/min离心15 min,管底无水相析出。安全性试验结果显示,将疫苗按1 mL/只超剂量接种3周龄SPF鸡,试验鸡在观察期内全部健活,未出现局部或全身不良反应,表明疫苗对SPF鸡具有良好的安全性;免疫效力及攻毒保护试验结果显示,用疫苗按0.2 mL/只的剂量免疫接种3周龄SPF鸡1次,免疫接种后21d试验鸡血清中HLJ1701株的抗体平均效价可达2~8以上,使用4型禽腺病毒(HLJ1701株)接种0.2 mL/只(100 LD_(50))对免疫鸡进行攻毒,疫苗对免疫鸡的保护率均为100%。研究表明,实验室条件下研制的4型禽腺病毒(HLJ1701株)灭活疫苗的各项指标均符合标准。     

膜分离法纯化浓缩猪繁殖与呼吸综合征灭活病毒的效果试验

将效力检验不合格的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病毒灭活液采用不同孔径的微孔滤膜、超滤膜滤除杂蛋白、超滤浓缩、除菌处理得到纯化浓缩的PRRS灭活病毒液;将检验合格的纯化浓缩的病毒灭活液与注射用矿物白油佐剂制成油包水灭活疫苗;对制备的灭活疫苗进行各项检验及免疫效果试验。结果显示,纯化的PRRS灭活病毒液杂蛋白去除率平均达到66.8%以上;灭活疫苗的物理性状与无菌检验、安全检验、效力检验均合格,免疫猪体内抗PRRS病毒抗体消长幅度比同时期未纯化的常规灭活疫苗明显,其中免疫至63 d时中和抗体效价(ELISA)平均高达245.7稀释倍数,比常规疫苗中和抗体效价平均高出66.3稀释倍数。试验表明,灭活病毒进行膜纯化技术处理后,免疫效果显著高于传统的灭活疫苗。     

不同生产工艺的重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对鸡的免疫效果对比试验

为评价不同生产工艺制备的重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)(简称"H5+H7二价灭活疫苗")对SPF鸡的免疫效果,将3批不同生产工艺制备的(H5+H7)二价灭活疫苗,分别为2017001批(试行规程组)、2017002批("生物工艺"组)和2017003批("生物工艺"+增强剂组),免疫21~28日龄的SPF鸡,免疫后14、21、28、35天采血测定各免疫组的HI抗体效价。在免疫后14~35天,3批不同生产工艺制备的H5+H7二价灭活疫苗组的HI抗体几何平均滴度(GMT)均高于规程要求的6 log_2,在免后14天HI抗体效价开始逐渐升高,在免疫后14~35天,可维持较高的HI抗体水平;2017002批的HI抗体几何平均滴度(GMT)居中,2017003批的HI抗体几何平均滴度最高。试验结果表明:不同生产工艺制备的重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗均符合产品的质量标准要求;用"生物工艺"制备的疫苗免疫效果优于按规程制备疫苗,说明该"生物工艺"可生产质量稳定、高效均一的(H5+H7)二价灭活疫苗;加入某公司增强剂后,免疫效果更好,说明该增强剂可提高疫苗免后的抗体水平。     

不同油佐剂及抗原含量制备的禽流感灭活疫苗(H9亚型)免疫效果研究

用不同来源油佐剂及不同抗原含量制备H9亚型禽流感灭活疫苗,接种适龄SPF鸡进行免疫抗体水平的研究,结果表明:6种国产或进口白油制备的禽流感灭活疫苗乳化稳定性较好,对SPF鸡在抗体效价及抗体水平持续方面均有较好的效果,复合佐剂的乳化稳定性及免疫效果较差;H9亚型禽流感灭活疫苗中抗原含量与抗体水平存在一定的相关性,当禽流感灭活疫苗每羽份抗原含量不超过150μL时,抗原含量与抗体水平成正相关;抗原含量为150μL/羽份时,平均抗体效价最高;抗原含量为180μL/羽份,抗体水平略有下降;抗原含量为240μL/羽份,抗体水平最低。     

猪圆环病毒2型灭活疫苗(YZ株)的制备及对仔猪免疫效力的评价

运用不同佐剂,并配合不同剂型,制备猪圆环病毒2型(PCV2)灭活疫苗(YZ株),然后评价各疫苗对仔猪的免疫效力。制备的灭活疫苗包括:用10号白油制备油包水(W/O)剂型疫苗;用Montanide~(TM)ISA 206 VG佐剂制备水包油包水(W/O/W)剂型疫苗;分别用Montanide~(TM) ISA 15A VG和ISA 35 VG佐剂,制备水包油剂型(O/W)剂型疫苗;用Montanide~(TM) IMS 251C VG佐剂,制备水(W)剂型疫苗。除白油组外,其余4组疫苗安全性较好。5组疫苗免疫效力试验表明,ISA 206 VG(W/O/W)疫苗组首免后2周和3周PCV-2荧光抗体水平显著高于白油(W/O)和IMS 251C VG(W)疫苗组(P0.05);攻毒后猪血清中病毒PCR检测,ISA 206 VG(W/O/W)疫苗组14 d均为阴性,其他免疫组21~28 d转为阴性;猪淋巴结免疫组化检测,ISA 206 VG(W/O/W)、ISA 15A VG(O/W)疫苗组均未出现PCV-2阳性,且该两组中仔猪均未出现连续2 d以上的高热症状。以上结果表明,ISA 206 VG(W/O/W)PCV2灭活疫苗(YZ株)对仔猪具有较好的免疫保护效力,可进行后续的临床扩大试验。     

鸡新城疫二价油乳剂灭活苗的研制及免疫效果观察

用NDLasota弱毒株、NDV地方分离株(F基因VII型)-HD1,分别接种鸡胚,收集尿囊液,制备病毒抗原液,福尔马林灭活后按一定比例混合,与白油佐剂乳化成油包水型乳剂疫苗。对二价苗各项技术指标进行了测定,证明本疫苗安全、无副作用,接种后3周产生免疫保护,攻毒保护率为100%,接种2周后通过免疫抗体检测,NDHI抗体效价达8log2。本疫苗在河南商丘一些种鸡场和蛋鸡场应用,获得了满意效果。