禽流感病毒基因组编码蛋白功能及抗原变异分析

禽流感(Avian Influenza,AI)是由禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)引起的一种急性高度接触性传染病.AIV在世界范围内广为流行,给养禽业造成巨大的经济损失,是危害养禽业最重要的传染病之一.……     

羊口疮病毒主要基因组编码蛋白及其功能

羊口疮(Orf)是由羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)引起的一种接触性传染病,绵羊与山羊是主要宿主.该病属于自限性疾病,当不发生继发性感染时,机体调节就可以控制疾病发展,逐渐恢复痊愈.该特性可能与病毒的基因组结构有关,因此,重点阐述了羊口疮病毒基因组编码的蛋白及其功能.此外,还对羊口疮病毒的流行病学、病原学、临...     

禽流感病毒非结构蛋白NS1的分子生物学特性与功能

禽流感严重威胁着世界养禽业及人类健康.随着对流感病毒研究的逐渐深入,人们已经从对流感病毒结构蛋白的研究转移到对非结构蛋白即NS1蛋白的研究上来.研究发现流感病毒的NS1蛋白与流感病毒所诱导的细胞凋亡之间存在一定的联系,其对凋亡的调节作用与流感病毒感染的细胞是否产生干扰素及其所感染的细胞系直接相关.NS1蛋白能够抑制病毒感染细胞干扰素的产生,在流感病毒颉颃干扰素的抗病毒效应中发挥了重要的作用.随着疫苗的广泛使用,无法区分野毒感染和疫苗免疫的禽群,干扰了禽流感的诊断,掩盖了禽流感的流行,增加了禽流感的预防难度.NS1蛋白作为流感病毒的非结构蛋白,具有高度的保守性,在临床应用中作为鉴别诊断免疫禽和自然感染禽的检测抗原具有广阔前景.     

禽流感病毒非结构蛋白的研究进展

流感病毒含8个负链单股独立的RNA片段,共编码10种蛋白。每种蛋白具有不同的结构和功能。其中NS基因合成NS1和NS2两种蛋白质,NS1为非结构蛋白,NS2为结构蛋白,这两种蛋白质大量存在于感染的细胞中。NS1蛋白在病毒转录及感染过程中起重要作用,与禽流感病毒的致病性密切相关,其主要功能是以多种方式解除宿主干扰素防御系统。随着分子生物技术的快速发展,关于NS1蛋白在禽流感病毒致病性方面的作用的研究也取得了一定的进展。文章主要对流感病毒NS基因的特点及其编码蛋白质功能进行综述。     

禽流感病毒NSl蛋白的作用机制研究进展

NS1蛋白属于RNA结合蛋白,是禽流感病毒唯一的非结构蛋白。它分为RNA结合区和效应区,在抑制宿主细胞蛋白质的合成、诱导细胞凋亡和拮抗干扰素α,的产生等方面具有重要的调节活性作用。此外,βNS1蛋白在野毒感染的鉴别诊断、外源基因的载体及抗病毒药物设计等方面,都有良好的应用价值。     

牛病毒性腹泻病毒基因组结构与蛋白功能研究进展

牛病毒性腹泻病毒为黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)的代表种,这个属的成员中还包括羊边界病毒(BDV)和猪瘟病毒(CSFV)。病毒基因组为单股正链RNA。论文就牛病毒性腹泻病毒已定位的4种结构蛋白、8种非结构蛋白以及3′和5′非翻译区的基因结构特征及其编码蛋白的合成与功能研究进行了综述,为牛病毒性腹泻的防控和疫苗研制提供参考。     

流感病毒基因组结构及其编码蛋白研究进展

由流感病毒引起的流感是严重危害人类和畜禽健康的一种传染病。此病的暴发给世界上许多国家和地区造成了巨大的经济损失。对流感病毒基因组结构及其编码蛋白质的研究有助于进一步加强对流感的治疗和预防。流感病毒含 8个负链单股独立的 RNA片段 ,共编码1 0种蛋白。每种蛋白具有不同的结构和功能。文章主要对流感病毒不同基因片段的结构特征及其编码的结构蛋白及非结构蛋白的形态结构、功能、免疫学特性等方面的分子生物学最新研究进展进行了综述     

禽流感病毒NS1蛋白的作用机制研究进展

NSl蛋白属于RNA结合蛋白，是禽流感病毒唯一的非结构蛋白。它分为RNA结合区和效应区,在抑制宿主细胞蛋白质的合成、诱导细胞凋亡和拮抗干扰素α，β的产生等方面具有重要的调节活性作用。此外，NSl蛋白在野毒感染的鉴别诊断、外源基因的载体及抗病毒药物设计等方面，都有良好的应用价值。     

禽流感病毒核蛋白研究进展

禽流感病毒 (Ａｖｉａｎｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ,ＡＩＶ)属Ａ型流感病毒 ,主要引起禽类以呼吸系统疾病、产蛋下降乃至急性致死和高死亡率等为特征的烈性传染病 ,常给养禽业造成毁灭性打击。ＡＩＶ亚型众多 ,极易发生基因突变、重组和重排 ,使其变异发生很快 ,加上该病缺乏典型症状 ,易与其它禽病混淆 ,给禽流感的免疫和诊断带来极大的困难。近年来发展起来的分子诊断技术将禽流感诊断向前推进了一步 ,这也导致了对ＡＩＶ核蛋白 (ＮＰ)及其基因研究的高度重视[1] 。研究内容主要是针对ＮＰ结构的保守性进行了诊断和免疫方面的研究。本…     

禽流感病毒M2蛋白的原核表达及免疫原性研究

基质蛋白M2是流感病毒的3种表面抗原之一,也是流感病毒中最为保守的蛋白之一,被认为是具有交叉保护能力的流感疫苗的理想候选抗原。论文从H9N2亚型禽流感病毒感染的狗肾传代(madindarby canine kidney,MDCK)细胞中克隆全长M2基因,并采用OE-PCR(overlap extension,PCR)得到缺失跨膜区的M2基因(sM2)。将sM2基因克隆到pGEX-KG原核表达载体,在大肠埃希菌中获得表达量较高的融合蛋白GST-sM2,而且以可溶形式存在。利用亲和层析的方法纯化蛋白,经Western blot证明,GST-sM2蛋白具有良好的免疫原性。ELISA检测发现GST-sM2能与H9、H5和H7亚型禽流感病毒抗体均发生反应。进一步将纯化蛋白与佐剂混合后免疫Balb/c鼠,结果在免疫小鼠体内产生了较高滴度的特异性抗体,为开发具有交叉保护力的禽流感疫苗奠定了基础。     

两株不同亚型禽流感病毒NS1基区的表达及抗原性检测

为进一步研究禽流感病毒非结构蛋白NS1的功能及其在临床中的应用，本试验分别对H5N1、H9N2两株不同亚型禽流感病毒的NS1基因进行了原核表达及抗原性检测。实验分别用限制性内切酶EcoRI和XhoI消化不同亚型NS1基因的重组质粒pMD-18T-NS1（H9N2）和pMD-18T-NS1（H5N1），获得目的片段NS1．然后将NS1基因克隆到原核表达载体pProEXHTc中。将重组质粒pProc-NS1（H9N2、H5N1）转化DH5α感受态细胞，用1mmol／L IPTG诱导表达，表达产物进行SDS-PAGE检测，目的蛋白分子量大小为30ku．与预期结果相符。Westera-blot检测表明所表达的蛋白能与NS1的多克隆抗血清反应．并且存在交叉反应。     

禽流感病毒分子生物学特性及其诊断进展

禽流感是由A型禽流感病毒 (AIV)引起的禽类全身感染性传染病。本病自 1878年在意大利暴发 ,迄今在世界上已流行 10O多年[1] ,每次发生除直接经济损失外 ,所采取的措施都耗费大量的人力、物力造成极大的经济损失 ,故国际兽医局动物流行病组织 (OIE)和我国《家畜家禽防疫条例》都将此病列为一类传染病。高致病性禽流感 (HPAI)可以造成鸡群75 %～ 10 0 %死亡。 1983年美国禽流感和 1995年墨西哥禽流感分别造成了相当于 10亿多美元的直接经济损失 ,1992年我国证实鸡群中有禽流感流行[2 ] ,1997年香港禽流感的发生又带来了严重的公共卫生问…     

口蹄疫病毒前导蛋白结构及功能研究进展

口蹄疫病毒前导蛋白为一种木瓜蛋白半胱氨酸酶,用一个半胱氨酸区作为亲和试剂.由于结构上的特殊性,使其能够进行自身切割,从正合成的多聚蛋白中游离自己,并通过切割宿主蛋白eIF的两种相似因子4GⅠ和4GⅡ减弱宿主细胞转录自身mRNA的能力,尤其使α/β干扰素的翻译受到抑制,从而为病毒的复制及感染创造有利条件.文章从结构特点、功能特性方面对其进行阐述.     

禽流感病毒AM2蛋白相互作用宿主蛋白的筛选及初步验证

采用酵母双杂交系统筛选与禽流感病毒AM2相互作用的宿主蛋白,可为研究AM2蛋白的生物学新功能提供依据。将检测无毒性与自激活作用的诱饵质粒pGBKT7-AM2与淋巴文库质粒进行融合杂交,然后对经选择性培养基筛选到的阳性克隆进行酶切鉴定和测序分析,阳性克隆进行酵母回转试验验证。经酵母双杂交筛选与验证最终获得2个与AM2相互作用的蛋白。选择线粒体细胞色素C氧化酶亚单位Ⅱ(COXⅡ)蛋白进行进一步研究,构建真核表达载体pcDNA3.0-HA-COXⅡ,并进行GST-pull down和免疫荧光试验验证。结果表明,COXⅡ与AM2存在相互作用,且在细胞质中存在共定位现象,为进一步研究禽流感病毒的致病机理和病毒-宿主相互作用机制提供了理论基础。     

禽流感病毒致病性的分子生物学基础及研究近况

禽流感病毒为A型流感病毒 ,呈球形或丝状 ,抵抗力不强且有多种血清亚型。病毒粒子含有 8个独立RNA片段、几种病毒内部蛋白质和表面蛋白质以及外层脂质膜。 8个RNA片段分别编码HA、NA、NP、M1M2、PB1、PB2、PA、NS1和NS2共 10种蛋白质 ,其中HA在病毒吸附和穿膜过程中以及决定病毒致病力方面起着关键的作用。禽流感病毒可以通过抗原漂移、抗原转变、RNA重组和缺损性病毒颗粒的产生等方式使其毒力发生改变     

猪瘟病毒非结构蛋白功能的研究进展

近年来,人们对猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的结构蛋白研究比较透彻,而对非结构蛋白功能的研究相对较少。非结构蛋白对病毒的复制、致病性及对宿主细胞功能的调节均发挥重要作用,这些研究成果对于揭示CSFV的致病机理和新型疫苗的开发具有十分重要的意义。作者全面综述了CSFV非结构蛋白的生物学功能,以期为研究者提供参考。     

禽流感病毒NS1蛋白亚细胞定位研究

为深入研究NS1蛋白的生物学功能,了解NS1蛋白在哺乳动物细胞中的分布和亚细胞定位情况.采用RT-PCR扩增出禽流感病毒NS1基因片段,克隆至载体pEGFP-N1,经酶切和测序鉴定后,将构建的重组质粒pEGFP-N1-NS1经脂质体介导转染293T细胞和Hela细胞,在荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜下观察NS1在细胞...     

禽流感病毒NP蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

为获得禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)NP蛋白的单克隆抗体,将构建的重组表达质粒pET-30a-NP转化BL21细胞,经IPTG诱导表达、纯化后作为免疫原,免疫8周龄Balb/c雌性小鼠,并按常规方法制备杂交瘤细胞。通过ELISA方法、Western-blot方法进行筛选,获得3株杂交瘤细胞株,命名为3A6、2H12、5F7,并进行了培养特性、分泌抗体活性、分泌抗体亚类的鉴定。结果显示：3株细胞株连续传10代均稳定分泌单克隆抗体,分泌的单克隆抗体亚型均为IgG2b,轻链类型均为Kappa。制备并纯化了以上3株单克隆抗体,浓度分别为2.9、2.5、2.8 mg/mL,纯度不低于90%。West-blot检测,单抗与H7血凝抑制试验抗原、H5血凝抑制试验抗原、H9N2病毒能发生特异性反应,说明单抗具有广谱性,且与IBDV、REV、IBV、MDV、ALV、AE、ILT、NDV、EDSV等均无特异性条带出现,说明特异性良好。本研究制备的3株针对禽流感NP蛋白的单抗,具有较好的特异性、保守性和广谱性,为下一步开展AIV诊断试剂如IFA检测试剂盒、ELISA检测试...     

H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的克隆与表达

根据GenBank中收录的H5N1亚型禽流感病毒NS1基因序列设计合成了一对引物AI-N1/AI-N2,利用RT-PCR方法扩增AIVNS1基因并克隆到pMD18-T载体上,对所得到的重组质粒进行酶切分析及序列测定,与GenBank中收录的其他分离株NS1基因进行序列比较分析,同源性达96%~99%,含有NS1基因的1个开放性阅读框(ORF)。将该基因克隆到pET-28a中构建NS1基因原核表达质粒pET/NS1,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,在IPTG诱导下获得了预期的蛋白表达,所表达的蛋白质分子质量约为30kD。Western-blotting结果表明表达的NS1蛋白有良好的生物学活性,与H5N1 AIV感染鸡血清发生特异性反应,而与H5N1 AIV灭活疫苗免疫鸡血清无反应,为建立区分野毒AIV感染家禽与AIV灭活疫苗免疫家禽ELISA方法的建立提供了生物学材料。