观赏向日葵腋芽组织培养及植株再生体系的研究

以4种不同基因型观赏向日葵的腋芽作为外植体建立离体培养再生体系,研究了不同腋芽日龄以及不同基因型和不同6-苄氨基嘌呤(6-BA)浓度对不定芽诱导的影响。结果表明:低日龄的腋芽更容易诱导出不定芽,腋芽在含有适宜浓度的α-萘乙酸(NAA)、6-BA等激素的培养基中诱导愈伤组织的能力较弱,但是可以直接诱导出不定芽,诱导不定芽再生的6-BA适宜浓度为0.6～1.5 mg/L。不同基因型观赏向日葵之间再生能力没有显著差异,但诱导不同基因型不定芽再生的6-BA最佳浓度略有差异。诱导白色普通花型观赏向日葵YAN1569腋芽的6-BA最佳浓度为0.6 mg/L,诱导黄色YAN1339和紫色YAN1328普通花型观赏向日葵腋芽的6-BA最佳浓度为0.6～0.9 mg/L,诱导黄色菊花型(重瓣型)观赏向日葵YAN1527腋芽的6-BA最佳浓度为0.9～1.2 mg/L。     

向日葵子叶节组织培养及其再生的研究

[目的]研究了向日葵子叶节的再生,为逐步建立起高效、稳定的向日葵遗传转化系统提供理论和实践依据。[方法]以不同基因型向日葵为材料,研究了向日葵子叶节在不同的培养基中诱导不定芽再生的情况。[结果]不同基因型向日葵子叶节在含适宜IAA、6-BA等激素的培养基中均较易形成愈伤组织;不同基因型向日葵子叶节不定芽诱导的适宜6-BA浓度存在差异,龙食葵为1.2mg/L,PR29则为1.8mg/L;不同基因型向日葵不定芽的诱导能力不同,其中基因型PR29再生能力较强。[结论]培养基配方MS＋0.03mg/LIAA＋1.2mg/L6-BA可用于向日葵子叶节再生体系的培养。     

向日葵(Helianthus annuus L.)不同外植体组织培养及其再生的研究

【目的】建立向日葵不同外植体离体培养再生体系，为向日葵遗传转化、突变体筛选奠定基础。【方法】以不同基因型向日葵为材料，研究了向日葵不同外植体在不同的培养基中诱导不定芽再生的频率。【结果】向日葵不同基因型外植体在含适宜吲哚-3-乙酸（IAA）、6-苄氨基嘌呤（6-BA）等激素的培养基中均较易形成愈伤组织，但愈伤组织诱导不定芽的能力则较弱；不同基因型向日葵外植体的不定芽诱导率依次为子叶节＞下胚轴＞子叶＞真叶；诱导子叶节不定芽再生的适宜6-BA浓度为1.2～1.8 mg•L-1， 下胚轴为1.8 mg•L-1，子叶为0.6 mg•L-1，真叶却未见到诱导出不定芽；MS + 0.03 mg•L-1 IAA + 1.2～1.5 mg•L-1 6-BA培养基可用于向日葵子叶、子叶节和下胚轴再生体系；不同基因型向日葵诱导不定芽的能力差别较大，其中，基因型PR29再生能力较强。【结论】本研究成功地建立了向日葵不同外植体离体培养再生途径，并获得了再生植株。     

利用甘蓝游离小孢子不定芽叶片再生DH植株技术研究

【目的】探索一种能将有限的DH株快速扩繁的植株再生技术,扩大DH株数量以提高育种效率。【方法】以甘蓝小孢子胚状体不定芽叶片为试材,MS为基础培养基,分别添加不同质量浓度的6-BA(1.0,2.0,3.0,4.0 mg/L)和NAA(0.05,0.1,0.2,0.4 mg/L),筛选出最优质量浓度组合;在6-BA和NAA最优质量浓度组合上,继续添加不同质量浓度的GA-3(0.5,1.0,1.5,2.0 mg/L),比较筛选小孢子不定芽叶片的最佳再生方法。最后,在MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L不定芽诱导培养基上,研究不同生长日龄DH株叶片的诱导效果。【结果】 在MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L中,不定芽再生频率最高,为64.29%,分化系数4.03;添加6-BA、NAA和 GA-3 3种激素,对不定芽再生频率促进作用更大,其中MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+GA-3 1.5 mg/L诱导效率最高,不定芽再生频率达到了80.36%,分化系数为4.15。当DH株叶片生长日龄为25 d时,不定芽再生频率相对最大,达到68.76%,分化系数为3.62,35 d后诱导效果下降。【结论】 甘蓝DH株叶片诱导植株再生的适宜培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L +NAA 0.1 mg/L+GA-3 1.5 mg/L;以生长日龄为25 d左右的甘蓝DH株叶片作为外植体诱导植株再生效果较好。     

利用甘蓝游离小孢子不定芽叶片再生DH植株技术研究

【目的】探索一种能将有限的DH株快速扩繁的植株再生技术,扩大DH株数量以提高育种效率。【方法】以甘蓝小孢子胚状体不定芽叶片为试材,MS为基础培养基,分别添加不同质量浓度的6-BA(1.0,2.0,3.0,4.0mg/L)和NAA(0.05,0.1,0.2,0.4mg/L),筛选出最优质量浓度组合;在6-BA和NAA最优质量浓度组合上,继续添加不同质量浓度的GA3(0.5,1.0,1.5,2.0mg/L),比较筛选小孢子不定芽叶片的最佳再生方法。最后,在MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L不定芽诱导培养基上,研究不同生长日龄DH株叶片的诱导效果。【结果】在MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L中,不定芽再生频率最高,为64.29%,分化系数4.03;添加6-BA、NAA和GA33种激素,对不定芽再生频率促进作用更大,其中MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA31.5mg/L诱导效率最高,不定芽再生频率达到了80.36%,分化系数为4.15。当DH株叶片生长日龄为25d时,不定芽再生频率相对最大,达到68.76%,分化系数为3.62,35d后诱导效果下降。【结论】甘蓝DH株叶片诱导植株再生的适宜培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA31.5mg/L;以生长日龄为25d左右的甘蓝DH株叶片作为外植体诱导植株再生效果较好。     

不同基因型花椰菜通用再生体系的构建

以不同基因型花椰菜的薹茎段为试验材料,筛选适宜花椰菜快速繁殖的培养基配方,构建适用于不同基因型花椰菜的离体再生体系。结果表明:用75%C2H5OH消毒15s后,7%NaClO消毒10min处理不同基因型花椰菜的外植体,污染率为0,且茎段不变色、不影响后期分化;6-BA是理想的花椰菜不定芽诱导的细胞分裂素,6-BA 1mg/L+IBA 0.5mg/L是最佳的不定芽诱导培养基;ZT 2mg/L+NAA0.1mg/L是最佳的促进不定芽快速生长的激素组合;6-BA 1mg/L+NAA 0.5mg/L是最佳的不定芽继代增殖的激素组合;MS+IBA 0.1mg/L+IAA0.1mg/L是最佳的促进无菌苗生根的培养基。     

新疆哈密瓜子叶不定芽诱导与植株再生

分别以皇后和K7-3 2至6日苗龄的不同子叶切块作为外植体,分别在含有1.0,0.4,0.1 mg/L 6-BA的MS培养基上进行继代培养从而获得了完整的再生植株.实验表明采用子叶近胚轴部位是诱导不定芽的最佳部位,4日苗龄是实验进行不定芽诱导的最有利时期,1.0 mg/L 6-BA是诱导不定芽的最佳激素浓度.     

春甘蓝腋芽叶片离体培养及植株再生技术研究

【目的】探索一种能保留春季栽培春甘蓝亲本春性的育种方法。【方法】以春季田间栽培的春甘蓝MP01-11152、GB9266-18136、DT409-051213个亲本自交系为试材,选用其成熟叶球腋芽叶片为外植体,首先以MS为基础培养基,添加0,2,3,4,5mg/L6-苄基腺嘌呤(6-BA)、0,0.05,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5mg/Lα-萘乙酸(NAA)对MP01-11152亲本自交系进行筛选,筛选出6-BA和NAA的最佳质量浓度;然后利用已选出的6-BA和NAA最佳质量浓度,分别对供试3个品种进行腋芽叶片离体培养及植株再生研究。【结果】以MP01-11152为材料进行离体培养,筛选出6-BA和NAA的最佳质量浓度分别为2和0.4mg/L。3个亲本自交系中,GB9266-18136在MS+2mg/L6-BA+0.4mg/LNAA中诱导的不定芽分化率最高,为211%;MP01-11152次之,为122%;DT409-05121最低,为82%。将诱导出的不定芽在MS+0.3mg/LNAA生根培养基中诱导生根,不定根的诱导频率可达98%,并锻炼生长成苗。【结论】在MS培养基中添加适宜质量浓度的6-BA或NAA2种激素,能够有效地提高春甘蓝腋芽叶片不定芽的诱导分化率,基因型对不定芽诱导的分化率有一定影响。     

木薯良种GR891组织培养与快速繁殖技术

【目的】探讨木薯良种GR891的组织培养与快速繁殖技术。【方法】以越冬木薯种茎及其新长嫩茎的腋芽或顶芽为外植体,探讨不同消毒时间、6-BA和NAA浓度对木薯不定芽诱导或增殖、生根的影响。【结果】以带顶芽或腋芽的木薯幼嫩茎段作外植体进行不定芽诱导培养比较适宜;接种前采用0.1% 升汞消毒10~15 min,不定芽和愈伤组织诱导率均最高,分别为57.1%和61.9%。不定芽诱导培养基以MS+0.5 mg/L 6-BA最佳,不定芽诱导率最高（72.2%）,芽生长较好;丛生芽增殖培养基以MS+0.5~1.0 mg/L 6-BA为宜,其增殖倍数达3.0倍,并形成健壮的丛生芽;生根培养基以MS+0.3~1.5 NAA mg/L最佳,生根率可达90.0%以上。将生根苗移栽至混合基质（60%塘泥+40%河沙）中,约1周后可萌生新根,移栽成活率达95.0%以上。【结论】在MS培养基中添加低浓度6-BA,有利于不定芽的诱导和增殖;6-BA和NAA配合使用均不利于不定芽的诱导和增殖;不定芽的诱导和生长无需添加外源NAA。0.9 mg/L NAA对木薯不定芽生根效果较好,而6-BA对不定芽生根有一定抑制作用。     

颠茄高频再生体系的建立及卡那霉素抗性筛选（摘要）

[目的]建立颠茄高频再生体系及筛选卡那霉素（Kan）抗性。[方法]以颠茄叶片及腋芽为外植体,研究了培养基中6-BA和NAA不同配比对其不定芽分化的影响以及叶片不定芽对Kan的敏感性。[结果]MS＋4.5mg/L6-BA＋0.2mg/LNAA为叶片不定芽分化的最佳培养基,不定芽分化率达100%,在1.0cm×1.0cm叶块上的不定芽分化数平均达5.85;MS＋3.0mg/L6-BA＋0.1mg/LNAA为腋芽不定芽分化的最适培养基,不定芽分化率达100%,每个腋芽不定芽分化平均数为4～8个;400.0mg/LKan为颠茄叶片遗传转化的最佳筛选浓度。[结论]为颠茄无菌苗的快速繁殖以及基于叶盘法的遗传转化奠定了基础。     

木薯良种GR891组织培养与快速繁殖技术

【目的】探讨木薯良种GR891的组织培养与快速繁殖技术。【方法】以越冬木薯种茎及其新长嫩茎的腋芽或顶芽为外植体,探讨不同消毒时间、6-BA和NAA浓度对木薯不定芽诱导或增殖、生根的影响。【结果】以带顶芽或腋芽的木薯幼嫩茎段作外植体进行不定芽诱导培养比较适宜;接种前采用0.1%升汞消毒10~15min,不定芽和愈伤组织诱导率均最高,分别为57.1%和61.9%。不定芽诱导培养基以MS＋0.5mg/L6-BA最佳,不定芽诱导率最高（72.2%）,芽生长较好;丛生芽增殖培养基以MS＋0.5~1.0mg/L6-BA为宜,其增殖倍数达3.0倍,并形成健壮的丛生芽;生根培养基以MS＋0.3~1.5NAAmg/L最佳,生根率可达90.0%以上。将生根苗移栽至混合基质（60%塘泥＋40%河沙）中,约1周后可萌生新根,移栽成活率达95.0%以上。【结论】在MS培养基中添加低浓度6-BA,有利于不定芽的诱导和增殖;6-BA和NAA配合使用均不利于不定芽的诱导和增殖;不定芽的诱导和生长无需添加外源NAA。0.9mg/LNAA对木薯不定芽生根效果较好,而6-BA对不定芽生根有一定抑制作用。     

金边北海道黄杨再生体系的建立及其快繁初探

[目的]探索金边北海道黄杨再生体系建立的方法和条件。[方法]以MS为基本培养基,配置不同种类和不同浓度激素的培养基,对金边北海道黄杨幼嫩叶片和腋芽进行不定芽诱导培养、增殖培养和生根培养。[结果]MS可作为金边北海道黄杨再生体系的基本培养基。6-BA配合NAA有利于叶片、腋芽愈伤组织和不定芽的诱导,以MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L培养基效果最佳,腋芽诱导率高达66.67%。较高浓度的6-BA配合较低浓度的NAA有利于丛生芽的增殖,以MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.2 mg/L培养基增殖效果较理想,增殖率高达328.57%。MS+IAA0.5 mg/L+蔗糖3%或1/4MS+IAA0.5 mg/L+蔗糖2%可获得最佳生根效果。[结论]该体系的建立为金边北海道黄杨种苗快速繁殖提供参考依据。     

龙选蕉组培快繁技术

【目的】探讨不同灭菌剂对外植体的灭菌效果及不同激素浓度和组合对不定芽诱导和增殖的影响,建立龙选蕉的高频再生体系。【方法】以龙选蕉吸芽为外植体,以升汞和0.2%次氯酸钠对外植体灭菌;采用0～6.0 mg/L 6-BA、0.1～0.2 mg/L NAA激素组合对不定芽进行诱导或增殖培养。【结果】相对于升汞,次氯酸钠对龙选蕉外植体灭菌的效果更理想,灭菌率达到90.47%,且外植体生长良好,无中毒现象。在不定芽诱导培养基中,随着6-BA浓度的升高,不定芽萌发率呈先增加后降低趋势,其中以添加6-BA 3.0 mg/L的诱导效果最理想,萌发率为66.67%;随着6-BA和NAA浓度的提高,不定芽的增殖系数也随之增加,其中以4.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA为最佳组合,不定芽增殖效果最理想,增殖系数为4.05,芽苗粗壮,叶片颜色正常。【结论】次氯酸钠对龙选蕉吸芽的消毒效果优于升汞,操作简便,易于获得无菌外植体并利于不定芽生长;不定芽诱导最佳培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA;不定芽增殖最佳培养基为MS+ 4.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA。     

两种油葵自交系再生体系的建立

【目的】取两种自交系油葵(1538-3和1573-2)的不同外植体,建立组织再生培养体系,选出最适品系,为遗传转化奠定基础。【方法】分别取两种自交系油葵的不同组织,采用不同激素配比,从器官间接和直接发生两个方面分别诱导油葵不定芽再生。【结果】以油葵自交系1538-3的不同外植体为材料,在含有1-萘乙酸(NAA)、6-苄氨基嘌呤(6-BA)、激动素(KT)的培养基中都易形成愈伤组织,但均表现为白色、水渍化程度高,无分化能力;6-BA浓度在0~1.0 mg/L时,子叶节可诱导出不定芽,其他激素配比中未见此现象;以胚轴为外植体时,油葵1573-2自交系不定芽诱导的最佳培养基为MS+0.6 mg/L 6-BA+0.1 mg/L GA3;1538-3自交系不定芽诱导的最佳培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L GA3;两种自交系诱导不定芽生根时NAA的最佳浓度为0~0.2 mg/L。【结论】两种基因型油葵诱导不定芽的能力差别较大,其中自交系1538-3再生能力较强,遗传转化时选用1538-3的胚轴作为转化受体时较好。     

菊花2个品种高效再生体系的建立

以地被菊花2个品种‘铺地金’和‘北林红’的叶片为外植体,以MS为基本培养基,以不同浓度配比的6-BA,NAA为生长调节物质进行离体培养,直接分化出不定芽获得再生植株.试验表明:‘铺地金’叶片外植体再生的最适培养基为MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 1.0 mg/L,再生率高达96%,其叶柄在此培养基上的再生率为90%;‘北林红’再生的最适宜培养基为MS 6-BA 1 mg/L NAA 0.5 mg/L,再生率为96%,但其茎段和叶柄在此培养基上不能高效再生.‘铺地金’腋芽增殖的最佳培养基为MS 6-BA 0.5 mg/L NAA 0.01 mg/L,每腋芽外植体平均增殖不定芽数达到5.5个.‘北林红’腋芽增殖的最佳培养基为MS 6-BA 0.5 mg/L NAA 0.05mg/L和MS 6-BA 0.5mg/L NAA 0.01mg/L,腋芽外植体平均增殖不定芽数达到6.3个和5.6个,二者之间的差异不显著.     

火龙果(Hylocereus undatus)快速繁殖技术研究

组织培养是火龙果(Hylocereus undatus)进行快速繁育的有效途径。本实验以火龙果幼嫩茎作为实验材料,通过筛选其最适培养基,使其快速繁殖,获得最大的经济效益。本论文通过研究不同激素配比对其不定芽诱导的影响、不同激素配比对其不定芽增殖的影响、不定芽生根培养,再生植株移栽来建立火龙果的再生体系。实验结果表明,MS + 6-BA 5.0mg/L + NAA 0.08 mg/L培养基为最佳不定芽诱导培养基;MS + 6-BA 6.0mg/L + NAA 0.08 mg/L为最佳不定芽增殖培养基,培养基MS + NAA 0.9mg/L +IBA 0.1mg/L + IAA 0.9mg/L最适于火龙果生根,此外采用继代4-5代的材料能提高其增殖率。     

龙选蕉组培快繁技术

【目的】探讨不同灭菌剂对外植体的灭菌效果及不同激素浓度和组合对不定芽诱导和增殖的影响,建立龙选蕉的高频再生体系。【方法】以龙选蕉吸芽为外植体,以升汞和0.2%次氯酸钠对外植体灭菌;采用0～6.0mg/L6-BA、0.1～0.2mg/LNAA激素组合对不定芽进行诱导或增殖培养。【结果】相对于升汞,次氯酸钠对龙选蕉外植体灭菌的效果更理想,灭菌率达到90.47%,且外植体生长良好,无中毒现象。在不定芽诱导培养基中,随着6-BA浓度的升高,不定芽萌发率呈先增加后降低趋势,其中以添加6-BA3.0mg/L的诱导效果最理想,萌发率为66.67%;随着6-BA和NAA浓度的提高,不定芽的增殖系数也随之增加,其中以4.0mg/L6-BA＋0.2mg/LNAA为最佳组合,不定芽增殖效果最理想,增殖系数为4.05,芽苗粗壮,叶片颜色正常。【结论】次氯酸钠对龙选蕉吸芽的消毒效果优于升汞,操作简便,易于获得无菌外植体并利于不定芽生长;不定芽诱导最佳培养基为MS＋3.0mg/L6-BA;不定芽增殖最佳培养基为MS＋4.0mg/L6-BA＋0.2mg/LNAA。     

葡萄砧木99R再生体系的建立

以99R葡萄无菌苗叶片、叶柄和茎段为外植体诱导不定芽再生,在MS培养基中附加不同浓度的6-BA与IBA、TDZ与IBA、6-BA与2,4-D组合。结果表明,叶片和叶柄较适宜的再生培养基为MS 5.0 mg/LBA 0.1 mg/L IBA,再生率分别为40.54%和50.00%,茎段适宜培养基为MS 2.0 mg/L BA 0.02 mg/L IBA,再生率达62.50%;一定时间的暗培养处理利于99R葡萄不定芽再生,3周为最适暗培养时间;不同节位外植体不定芽再生率随叶片节位下降而降低;卡那霉素浓度>3.0 mg/L时显著抑制叶片不定芽的发生,头孢霉素浓度<300 mg/L对叶片再生不定芽影响很小。     

野生梭梭的离体培养和植株再生

以野生梭梭带腋芽茎段为外植体进行离体再生研究,探讨不同植物生长调节剂、硝酸银和蔗糖的质量浓度对其愈伤组织诱导、不定芽分化和生根的影响。结果表明,野生梭梭带腋芽茎段愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.0 g/L,诱导率为100%;不定芽分化的最佳培养基为MS+NAA 0.5 mg/L+TDZ 1.0 mg/L+AgNO33.5 mg/L+蔗糖26 g/L+琼脂6.5 g/L,不定芽分化率为97.8%;影响野生梭梭再生的最主要因素是NAA,其次是TDZ和AgNO3,蔗糖影响最小。     

频繁开花高产小桐子组织培养的初步研究

为了奠定频繁开花型高产小桐子的快繁及转基因基础,通过对小桐子茎段腋芽培养、叶片和叶柄愈伤诱导及不定芽分化的不同激素组合培养进行研究。结果表明：适合该高产品种的茎段培养的最佳培养基为MS＋6-BA0．5mg／L＋IBA0．1mg／L．叶片愈伤诱导及不定芽分化培养基为Ms＋6-BA2．5mg／L＋IBA0．5mg／L．叶柄愈伤诱导及不定芽分化培养基为MS＋6-BA1．0mg／L＋IBA0．2mg／L．生根培养以1／2MS＋IBA0．5mg／L＋AC0．1％较为适宜。引起小桐子组培苗玻璃化现象的主要原因之一是BA浓度过高：在不定芽的分化培养中．愈伤过多会严重影响不定芽的数量及质量。