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1.
用微量肉汤稀释法测定了215株猪源沙门氏菌对4种抗菌药物的敏感性,用PCR方法测定了多药外排泵基因oqxA、oqxB和氟苯尼考耐药基因floR,并用ERIC-PCR方法分析了猪源沙门氏菌菌株之间的相关性和遗传关系。结果显示:分离菌株对喹乙醇、痢菌净、氟苯尼考和恩诺沙星的耐药率分别为32.56%、20.93%、92.56%、16.74%;有152株菌同时携带oqxA和oqxB,另有7株菌单独携带oqxB;有156株菌携带floR基因; oqxA或oqxB阳性菌株可分为A~Q 17个ERIC型,oqxA和oqxB基因分布于不同的ERIC型菌株中。  相似文献   

2.
鸡源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因floR的分子检测   总被引:1,自引:0,他引:1  
对豫北地区临床分离的102株鸡源大肠杆菌进行生化鉴定、MICS值测定及氟苯尼考耐药基因floR的检测.最敏感的是头孢喹肟,敏感率为93.1%;其次为阿米卡星和氟苯尼考,敏感率分别为59.8%和54.9%;而对复方新诺明的耐药率达到100%;此外,对四环素,多西环素,氨苄西林,恩诺沙星和沙拉沙星的耐药率为78.4%~94.1%.氟苯尼考耐药基因的分子检测显示,有45.1%的菌株显示floR基因阳性.对其中4株大肠杆菌的氟苯尼考耐药基因floR进行了克隆和测序.结果表明,克隆的floR基因所推导的氨基酸序列与其它12-跨膜外输泵家族在共同的基序上是保守的,在克隆的floR序列与报道的floR序列间仅存在1~3个氨基酸替代.  相似文献   

3.
为探索杠板归对猪源耐氟苯尼考大肠杆菌耐药基因floR表达量的变化,采用二倍稀释法测定杠板归59.92%乙醇提取物对大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC),同时测定提取物处理后氟苯尼考的MIC,利用荧光定量PCR法建立标准曲线检测耐药基因floR的表达量。结果发现,杠板归提取物对5株大肠杆菌的MIC介于2.48~9.64 g/L之间,氟苯尼考对亚抑菌浓度药物处理后的大肠杆菌MIC值可下降至76.76%,floR基因荧光定量PCR反应的线性回归方程为CT=-3.02×lg拷贝数+28.77,r2=0.9 992,杠板归提取物对5株耐药菌floR基因表达量分别下降13.02%、10.00%、15.21%、10.25%和8.84%。试验结果表明提取物具有较好的耐药消除作用,对floR基因表达量有明显抑制作用,提示在中药提取物中寻找耐药性大肠杆菌floR基因抑制剂有一定前景。  相似文献   

4.
吴华  冯建坤  贺志沛  刘保光  胡功政 《安徽农业科学》2012,40(28):13828-13829,13834
[目的]了解我国部分地区鸭源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因floR在临床菌株中的流行情况。[方法]采用美国临床实验室标准化委员会(CLSI)推荐的肉汤微量稀释法测定22株鸭大肠杆菌对氟苯尼考等9种药物的敏感性,并应用PCR方法检测氟苯尼考耐药基因floR。[结果]22株鸭源大肠杆菌对氟苯尼考和四环素全部耐药,耐药率达100%,呈现多重耐药性特点;其氟苯尼考耐药基因floR检出率为90.9%,与耐药表型基本一致。[结论]氟苯尼考在我国部分地区呈现高耐药性,对其耐药基因的监测为临床抗菌药物的合理使用提供了理论依据。  相似文献   

5.
氟苯尼考是一种特效动物专用抗菌药,随着临床用药量加大,其耐药菌株的数量也呈逐年上升的趋势,因而其传播机制亟需研究。收集新疆乌鲁木齐市周边养殖场的猪直肠和鼻腔样品,采用琼脂稀释法对样品中分离出的葡萄球菌进行临床9种常用抗菌药物的药敏试验,通过PCR方法对耐氟苯尼考的葡萄球菌进行耐药基因cfr、fexA和fexB的检测和物种鉴定,并对引起其传播的插入序列IS21-558和Tn558转座酶基因进行检测分析,探究引起上述耐药基因在菌群间可能的传播机制。结果显示鼻腔和直肠分离的葡萄球菌对克林霉素和氧氟沙星的耐药率较高,而对庆大霉素耐药率较低;鼻腔葡萄球菌主要以6耐(19.9%)和7耐(19.9%)为主;而直肠葡萄球菌主要以8耐(27.1%)为主;直肠葡萄球菌比鼻腔葡萄球菌耐药情况更加严重。筛选出两株均携带cfr和fexA基因的葡萄球菌,分别鉴定为松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri)和木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus),1株携带fexA基因的葡萄球菌鉴定为腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus),未检出携带fexB基因的菌株。通过PCR扩增发现3株阳性菌携带部分IS21-558移动元件基因和Tn558转座酶基因,可能会增加cfr和fexA基因的水平传播风险,使多药耐药细菌的产生成为可能。本研究揭示应加强畜牧兽医临床对cfr和fexA基因的检测和监测工作,为进一步分析阳性耐药菌株的传播和流行提供基础数据。  相似文献   

6.
【目的】了解新疆乌鲁木齐市宠物犬源沙门氏菌和葡萄球菌的耐药性及耐药基因携带情况。【方法】从77份宠物犬直肠粪便样品中分离沙门氏菌和葡萄球菌,采用琼脂稀释法对分离的菌株进行药敏试验,通过PCR方法对沙门氏菌6类23种耐药基因和葡萄球菌5类9种耐药基因进行检测。【结果】从77份宠物犬粪便样品中分离到沙门氏菌36株,葡萄球菌75株。除头孢噻呋、安普霉素、阿米卡星、硫酸庆大霉素和多黏菌素外,宠物犬源沙门氏菌对其他被捡抗菌药物的耐药率高达97.0%以上,多重耐药以8耐为主,tetB、blaTEM、blaOXA、qnrS、oqxA、oqxB、aac(6′)-Ib-cr、ant(3″)-Ia和floR基因检出率在97.0%以上。宠物犬源葡萄球菌对左氧氟沙星(93.5%)、苯唑西林(90.7%)和氟苯尼考(82.9%)耐药率在80.0%以上,多重耐药集中在4耐、6耐和9耐,主要检出的基因为fexA(40.0%,30/75)和femA(18.7%,14/75),其次为tetM(16.0%,12/75)、ermB(14.7%,11/75)和mecA(1.3%,1/75)。【结论】宠物犬源沙门氏菌和葡萄球菌耐药情况严重,耐药基因携带率高,使宠物犬的细菌性疾病治疗难度加大,应加强耐药菌的监测,降低宠物犬源耐药菌转移给人的潜在风险。  相似文献   

7.
【目的】了解新疆乌鲁木齐市宠物犬源沙门氏菌和葡萄球菌的耐药性及耐药基因携带情况。【方法从77份宠物犬直肠粪便样品中分离沙门氏菌和葡萄球菌,采用琼脂稀释法对分离的菌株进行药敏试验,通过PCR方法对沙门氏菌6类23种耐药基因和葡萄球菌5类9种耐药基因进行检测。【结果】从77份宠物犬粪便样品中分离到沙门氏菌36株,葡萄球菌75株。除头孢噻呋、安普霉素、阿米卡星、硫酸庆大霉素和多黏菌素外,宠物犬源沙门氏菌对其他被捡抗菌药物的耐药率高达97.0%以上,多重耐药以8耐为主,tetB、blaTEM、blaOXA、qnrS、oqxA、oqxB、aac(6′)-Ib-cr、ant(3″)-Ia和floR基因检出率在97.0%以上。宠物犬源葡萄球菌对左氧氟沙星(93.5%)、苯唑西林(90.7%)和氟苯尼考(82.9%)耐药率在80.0%以上,多重耐药集中在4耐、6耐和9耐,主要检出的基因为fexA(40.0%,30/75)和femA(18.7%,14/75),其次为tetM(16.0%,12/75)、ermB(14.7%,11/75)和mecA(1.3%,1/75)。【结论】宠物犬源沙门氏菌和葡萄球菌耐药情况严重,耐药基因携带率高,使宠物犬的细菌性疾病治疗难度加大,应加强耐药菌的监测,降低宠物犬源耐药菌转移给人的潜在风险。  相似文献   

8.
穆瑞瑞  蔺芳  张可  吴健 《广东农业科学》2012,39(12):154-156
为了探讨外排泵基因和志贺菌多耐药性之间的关系,对临床耐多药志贺菌H24进行药敏试验,并分析外排泵基因的表达情况。采用琼脂平皿二倍稀释法对多耐药志贺菌进行药敏测定,用实时荧光定量RT-PCR检测H24的外排泵基因emre、cmr、acrb、ydhe的表达水平。药敏结果显示,H24对红霉素、四环素、氯霉素和硫酸链霉素呈高度耐药,对硫酸新霉素、环丙沙星、庆大霉素呈轻度耐药。实时荧光定量RT-PCR结果显示,4个外排泵基因均有表达,emre、cmr外排泵表达量明显高于acrb、ydhe外排泵的表达量。  相似文献   

9.
为掌握新疆某养殖场羊源沙门氏菌对常用抗菌药物的耐药情况,并了解其携带部分相关耐药基因的流行现状及β-内酰胺酶、16SrRNA甲基化酶和喹诺酮类耐药基因(Plasmid mediated quinolone resistance,PMQR)的共存情况。使用琼脂稀释法对分离的沙门氏菌进行药敏试验,通过PCR方法进行blaTEM、blaCMY-2、blaCTX-M、blaLAP-1、blaKPC、blaOXA、blaSHV等β-内酰胺酶和armA、rmtB等16SrRNA甲基化酶及qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、qepA、oqxA、oqxB和aac(6′)-Ib-cr等PMQR基因检测,分析阳性菌株携带的基因型与耐药表型之间的关系。结果显示新疆该羊养殖场分离的沙门氏菌对被检的12种抗菌药物耐药率超过80%的有6种。47株菌携带blaTEM基因,34株菌携带blaOXA基因;未检出armA和rmtB等16SrRNA甲基化酶。33株菌携带qnrS,46株菌携带oqxA,46株菌携带oqxB,47株菌携带acc(6′)-Ib-cr基因。新疆该养殖羊场分离株耐药现象严重,携带耐药基因以blaTEM、blaOXA、qnrS、aac(6′)-Ib-cr、oqxA和oqxB为主,耐药基因型复杂多变、呈多样化发展,应该加强对β-内酰胺酶及PMQR因子的监控。  相似文献   

10.
根据Gen Bank中猪源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因floR的序列设计1对特异性引物,扩增出floR基因片段,克隆到p MD-18T载体上,构建p MD-18T-floR阳性标准质粒。通过SYBR GreenⅠ荧光定量PCR反应条件的优化、荧光定量PCR标准曲线的建立、熔解曲线的分析及敏感性、特异性、重复性试验,建立针对猪源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因floR的荧光定量PCR检测方法,并研制出检测试剂盒,同时对从养殖场分离的156株大肠杆菌进行耐药表型和耐药基因检测。结果显示,研制的试剂盒灵敏度可达1.0×101拷贝,重复性好,特异性强,对大肠杆菌磺胺类耐药菌株、β-内酰胺类耐药菌株、大环内酯类耐药菌株检测均为阴性,熔解曲线分析,扩增产物的熔解温度为88.8~89.2℃,没有引物二聚体和非特异性扩增峰出现,耐药表型与耐药基因检测符合率为96.7%。表明研制的试剂盒适合于临床样品猪源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因的检测。  相似文献   

11.
为了解新疆乌鲁木齐市宠物源沙门氏菌耐药及耐药基因携带情况,对分离的39株宠物源沙门氏菌采用琼脂稀释法进行药敏试验,PCR方法进行PMQR因子、β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类基因、四环素类基因、酰胺醇类基因及多肽类基因检测。结果表明:乌鲁木齐市宠物源沙门氏菌对环丙沙星和阿莫西林的耐药率均高达97.4%(38/39),对诺氟沙星、恩诺沙星、氨苄西林、卡那霉素、四环素和氟苯尼考的耐药率均高达100%(39/39),对头孢噻呋、安普霉素、阿米卡星和庆大霉素100%敏感;耐药菌株以8耐为主,其主要耐药谱型为CIP-NOF-ENR-AMLAMP-KANA-TE-FFC;主要检出的β-内酰胺酶基因有blaTEM和blaOXA;主要检出的PMQR因子有qnrS、oqxA、oqxB和aac(6′)-Ib-cr;主要检出的氨基糖苷类基因有aadA2和ant(3″)-Ia;主要检出的四环素类基因有tetB;主要检出的酰胺醇类基因有floR。耐药基因以blaTEM+blaOXA+qnrS+oqxA+oqxB+aac(6′)-Ib-cr+aadA2+ant(3″)-Ia+tetB+floR共存类型为主。因此临床治疗宠物疾病时应尽量少用人用药物特别是人用新药,多使用兽用敏感药物,避免人发病时无药可用事件的发生。  相似文献   

12.
应用PCR扩增猪源沙门氏菌GyrA基因的喹诺酮耐药决定区,并对扩增产物进行SSCP分析,比较SSCP图谱与耐药性之间的相关性.同时对GyrA基因扩增产物进行测序,分析氨基酸的变异情况.结果显示,猪源沙门菌GyrA基因的喹诺酮耐药决定区PCR扩增产物的大小为317 bp,敏感菌株与标准菌株SSCP图谱相一致,耐药菌株与标准菌株的SSCP图谱差异明显,GyrA基因QRDR的突变位于第83和87位氨基酸位点.通过SSCP可早期、准确、快速地检测出猪源沙门氏菌是否对氟喹诺酮耐药.  相似文献   

13.
新疆多源喹诺酮类耐药大肠杆菌耐药基因检测及分析   总被引:4,自引:0,他引:4  
【目的】了解新疆不同动物源喹诺酮类耐药大肠杆菌携带质粒介导的喹诺酮耐药因子(plasmid mediated quinolone resistance,PMQR)的流行现状,及其与主要的β-内酰胺酶基因和 16S rRNA 甲基化酶基因的共存情况。【方法】通过 PCR 方法对猪源(79 株)、牛源(8株)和羊源(96株)喹诺酮类(环丙沙星,诺氟沙星和恩诺沙星)耐药大肠杆菌进行 PMQR(qnrA, qnrB, qnrC, qnrD, qnrS, qepA, oqxA, oqxB, aac(6’)-Ib-crβ-内酰胺酶基因(blaTEM, blaCTX-M, blaSHV, blaKPC, blaCMY-2, blaLAP-1)及16S rRNA(armA, rmtB)等基因检测,对目的条带进行DNA测序,确定阳性菌株,对检出携带 β-内酰胺酶基因和16S rRNA 甲基化酶基因的大肠杆菌进行β-内酰胺类及氨基糖苷类药敏试验,分析其携带的基因型与耐药表型之间的关系。【结果】猪源大肠杆菌中检出的PMQR因子为qnrS(5/79,6.33%),oqxA(35/79,44.30%),oqxB(40/79,50.60%)和aac(6’)-Ib-cr(4/79,5.06%),检出的β-内酰胺酶基因为blaTEM(79/79,100%),检出的16S rRNA 基因为rmtB(3/79,3.80%);牛源大肠杆菌中检出的PMQR因子为qnrS(1/8,12.50%),oqxA(1/8,12.50%),oqxB(1/8,12.50%)和aac(6’)-Ib-cr(1/8,12.50%)和qepA(1/8,12.50%),检出的β-内酰胺酶基因为blaTEM(8/8,100%)和blaSHV(1/8,12.50%);羊源大肠杆菌中检出的PMQR因子为qnrS(6/96,6.25%),oqxA(32/96,33.3%),oqxB(37/96,38.5%)和aac(6’)-Ib-cr(22/96,22.91%),检出的β-内酰胺酶基因为blaTEM(96/96,100%)和blaCTX-M(2/96,2.08%),检出的16S rRNA 基因为rmtB(2/96,2.08%);未检出qnrA,qnrB,qnrC,qnrD,blaKPC,blaCMY-2blaLAP-1被检基因。不同动物源大肠杆菌中存在基因共存现象,携带β-内酰胺酶基因和16S rRNA 甲基化酶基因的喹诺酮类耐药大肠杆菌对β-内酰胺类和氨基糖苷类药物耐药呈一定的相关性。【结论】不同动物源喹诺酮类耐药大肠杆菌中存在PMQR因子,可与主要的 β-内酰胺酶和/或16S rRNA 甲基化酶基因共存。此外,首次在羊源大肠杆菌中检出PMQR 因子、β-内酰胺酶及16S rRNA甲基化酶基因。  相似文献   

14.
以氨基糖苷类、四环素类、磺胺类和氯霉素类四大类抗生素的11种耐药基因为靶基因,构建了耐药基因的检测芯片.确定芯片点样温度为25℃,湿度为65%;各样点中心距离为1000 μm,样点直径为220 μm.芯片点样结束后,室温干燥6 h,60℃水合处理30 s,80℃干燥10 s,254 nm波长紫外交联10 min.以532 nm(绿光)波长扫描采集杂交信号,激光扫描分辨率为10 μm,激光功能90%,PMTG 85%.选用tetA基因进行杂交动力学研究,确定靶基因的点样浓度为100 ng·μL-1,探针最适浓度为3600 pg·μL-1,系统检测灵敏度为3 pg·μL-1.基因芯片杂交的主要参数为:44℃预杂交2 h,52℃杂交6 h.杂交信号的判读标准为:样点信噪比(S/N)≥1.5及信号强度中位值≥1000.芯片杂交特异性高,重复性好,实现了11种耐药基因的同时检测.  相似文献   

15.
【目的】 研究新疆阿克苏地区某规模化猪场猪源大肠杆菌对临床常用抗菌药物的耐药情况及相关耐药基因携带情况,分析耐药表型与耐药基因之间的关系。【方法】 采用琼脂稀释法,对分离鉴定的443株猪源大肠杆菌进行猪场常用6大类13种抗菌药物最小抑菌浓度的测定。采用PCR方法,检测13种抗菌药物相应的4大类10种耐药基因。【结果】 该猪场猪源大肠杆菌对被检的8种抗菌药物耐药率超过70.0%,其中对恩诺沙星、链霉素、大观霉素、金霉素、土霉素的耐药率高达90.0%以上,对阿米卡星、安普霉素、头孢噻呋、多黏菌素E具有较好的敏感性,耐药率未超过25.0%;多药耐药结果以7~9耐为主,占63.6%。除tetK外,对被检的其他9种耐药基因均有检出,以携带floR(66.4%)和ant(3″)-Ia(66.4%)耐药基因为主。【结论】 新疆阿克苏地区某规模化猪场猪源大肠杆菌至少对被检的1种抗菌药物表现为耐药,且多药耐药情况严重,耐药谱广,耐药基因携带率高,应从基因水平对耐药大肠杆菌进行传播机制的监测。  相似文献   

16.
为了调查规模养殖场沙门氏菌中Ⅰ类整合子的流行情况,采用聚合酶链式反应检测了从贵州省规模养猪场分离的57株沙门氏菌中Ⅰ类整合子的携带率以及整合子中耐药基因盒的种类;采用微量肉汤稀释法测定了57株沙门氏菌对12种抗菌药物的敏感性;并应用χ2检验检测Ⅰ类整合子阳性菌株与阴性菌株耐药性的相关性。结果显示,57株沙门氏菌中Ⅰ类整合子检出率为40.4%(23/57);耐药基因盒检出率为31.6%(18/57);整合子中携带可分别介导对氨基糖苷类和磺胺类药物耐药的aad A2、aad A5、aad A22、aad A23b、dfr A1、dfr A12和dfr A17基因;57株沙门氏菌对12种抗菌药物的耐药率不同,Ⅰ类整合子与多重耐药之间有明显的相关性。  相似文献   

17.
PCR-RFLP检测猪源致病性沙门氏菌gyrA基因点突变的研究   总被引:5,自引:0,他引:5  
测定了16株猪源致病性沙门氏菌对5种常用氟喹诺酮类药物的最低抑菌浓度(MIC),结果表明,对5种氟喹诺酮类药物的耐药率在31.2%~56.2%。分别以质粒和染色体为模板,应用PCR扩增16株沙门氏菌的gyrA基因,结果表明,所有菌株均获得以染色体为模板的扩增产物,并从1株鼠伤寒沙门氏菌获得了以质粒为模板的扩增产物。对PCR扩增产物进行RFLP分析,氟喹诺酮高敏菌株没有检出突变位点,中敏菌株和耐药菌株检测出了gyrA基因的点突变。  相似文献   

18.
为掌握新疆乌鲁木齐市周边鸡场鸡源沙门氏菌对常用抗菌药物的耐药性及耐药基因的携带情况。从新疆乌鲁木齐周边养鸡场共采集950份鸡泄殖腔拭子,从中分离出沙门氏菌80株,采用琼脂稀释法对其进行最小抑菌浓度测定;通过PCR方法对耐药沙门氏菌进行PMQR(qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、oqxA、oqxB、qepA和aac(6')Ib-cr)、β-内酰胺酶(bla_(TEM)、bla_(CTX-M)、bla_(SHV)、bla_(KPC)、bla_(CMY-2)、bla_(LAP-1)和bla_(OXA))及16S rRNA甲基化酶(armA和rmtB)共18种耐药基因的检测。耐药结果显示:鸡源沙门氏菌对环丙沙星(83.6%)和恩诺沙星(77.5%)呈现高水平耐药;对阿米卡星的耐药率(20.0%)较低。耐药基因检测结果为:(1)qnrS检出率为12.5%,qnrB检出率为13.8%,oqxA检出率为51.3%,oqxB检出率为51.3%,aac(6')-Ib-cr检出率为37.5%,未检出qnrA、qnrC、qnrD和qepA;(2)bla_(CTX-M)检出率为5.0%,bla_(TEM)检出率为67.5%,bla_(SHV)检出率为13.6%,bla_(OXA)检出率为37.5%,未检出bla_(KPC)、bla_(LAP-1)和bla_(CMY-2)。(3)rmtB检出率为7.5%,arm A检出率为1.3%。乌鲁木齐周边鸡场分离的鸡源沙门氏菌对环丙沙星和恩诺沙星耐药严重,对阿米卡星比较敏感。共检出11种耐药基因,基因类型较多,使养鸡场细菌的多药耐药风险加大。  相似文献   

19.
【目的】为了解四川省猪源呼吸道疾病支气管败血波氏杆菌的流行情况及菌株生物特性。【方法】采集56份病料进行支气管败血杆菌的分离纯化、药敏及相关耐药基因和毒力基因的筛选。【结果】分离到10株支气管败血波氏杆菌,分离率为17.86%。分离菌对青霉素、氨苄西林、羧苄西林、林可霉素、复方新诺明和头孢氨苄的耐药率为100%,对新霉素、氯霉素、氧氟沙星和左氧氟沙星高度敏感。共检出耐药基因9种,其中gyrA、sul1和tetC的检出率超过50%;共检出毒力基因6种,其中fla、dnt、prn和fhaB的检出率高达100%。小鼠致病试验结果显示大部分菌株具有较强的致病性。【结论】四川省主要流行的支气管败血波氏杆菌多重耐药情况严重,耐药机制复杂,耐药基因和耐药表型符合率较低,毒力基因检出率较高,且对小鼠呈现较强的致病性。研究结果可为四川省支气管败血波氏杆菌的防控和治疗提供参考。  相似文献   

20.
禽源沙门氏菌对四环素耐药分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
为检测分析辽宁省东部地区禽源性沙门氏菌对四环素的耐药情况,采样分离来自健康鸡群34株沙门氏菌,分别进行四环素药敏试验,及四环素基因tet(A)、tet(B)、tet(C)、tet(D)检测。结果表明,34株沙门氏菌中有30株对四环素产生耐药,30株沙门氏菌对4种耐药基因的检出率大小顺序为tet(A)tet(C)tet(B)tet(D),该试验为家禽合理使用四环素提供依据。  相似文献   

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