猪胚胎冷冻移植成功

将哺乳类动物的胚胎冷冻保存在液氮中的试验已经在一些动物成功,如小鼠(Whit-tingham等,1972),牛(Wilmut和Rowson,1973)、绵羊(Willadsen等,1976)、山羊(Bilton和Moor,1976)和马(Yamamoto等,1982)。牛的冷冻胚胎已经商业化生产。然而,猪胚胎的冷冻和解冻还未获得成功。据报道,猪的胚胎对于低温,即使是+10℃(Wil-mut,1972;Niemann,1985)都极敏感。本研究是检验由桑葚胚到孵出期囊胚各胚龄猪胚胎冷冻-解冻后能否存活。采用有性周期的8～24个月龄、体重120～     

猪胚胎的体外生产技术

应用体外受精技术,可以有效地利用屠宰的青年母猪卵巢中的未成熟卵,大量、廉价的实验室生产胚胎。这对加速我国良种猪群的繁殖是一项行之有效的胚胎工程技术。借鉴国内外实验室生产猪胚胎的经验及根据实验室的实践,文章较详细地叙述了体外受精猪胚胎的生产过程,包括卵母细胞的获得、培养、精子获能、体外受精以及受精后的体外培养、冷冻保存与移植等。     

猪胚胎的体外生产技术

应用体外受精技术,可以有效地利用屠宰的青年母猪卵巢巾的未成熟卵,大量、廉价地实验室生产胚胎。这对加速我国良种猪群的繁殖是一项行之有效的胚胎工程技术。借鉴国内外实验室生产猪胚胎的经验及根据我们实验室的实践,本文比较详细地叙述了体外受精猪胚胎的生产过程,包括卵母细胞的获得、培养、精子获能、体外受精以及受精后的体外培养、冷冻保仃与移植等。     

猪胚胎移植技术的应用及防疫

综述了猪胚胎移植及其相关的胚胎生物技术，包括猪的超数排卵、同期发情、胚胎移植、胚胎的体外培养与保存等的研究进展；阐述了猪胚胎移植技术的应用及防疫。     

猪胚胎移植

近二十年来,猪的胚胎移植作为试验手段被成功地应用于猪的繁殖生理和早期妊娠的各项研究中。由于猪排卵率高,在家畜中,猪是为体外试验提供卵子和胚胎的良好供体。现在的胚胎采集和移植技术简便而有效,因此在猪的育种中对这项技术也很感兴趣,应用胚胎移植技术可把新的遗传物质引入以控制疫病为目的的封闭猪群中,可用来提高优良种猪的繁殖效率和进行国际间的胚胎交换。超数排卵当供体需要超排时,最好在卵泡期早期(即发情开始后15或16天)以促性腺激素,像孕马血清促性腺激素(PMSG)处     

猪精液、胚胎和体细胞冷冻保存及应用研究进展

对猪精液、胚胎和体细胞的冷冻保存应用研究情况进行了综述,讨论了每种细胞形态的关键性技术的发展,重点关注他们的保存、运输和减少病菌传播。同时还讨论了采用冷冻保存的精液、胚胎和体细胞结合其他猪辅助生育技术如体外受精(IVF)、精子卵质显微注射(ICSI)、体细胞核移植(SCNT)复育猪遗传资源和模型的方法。这些采用冻存细胞的辅助生育技术(ART)的应用将会极大提高猪的遗传/模型保护、交换、复育的效率和生物安全。     

绵羊胚胎快速冷冻初步试验

<正> 哺乳动物胚胎的常规冷冻技术自1972年首次在小鼠获得成功以后,在兔、牛、绵羊、山羊、马、羚羊、猴、猪等动物也相继取得成功。胚胎冷冻过程目前已程序化。我国也已将胚胎冷冻技术在牛、绵羊、山羊、兔、猪、鼠等动物中推广应用,并已开展牛、羊和实验动物胚胎库的建立工作。但此项技术需昂贵复杂的冷冻仪,技术操作较繁琐,冷冻过程较长(约需2.5至3小时),从而限制了在产生产中的应用。     

家兔的超数排卵和胚胎冷冻方法的研究

哺乳动物胚胎冷冻是近十年在鲜胚移植基础上发展起来的一项新技术,冷冻保存胚胎首先于1972年在小鼠获得成功(Whittingham leibo and Mazur, 1972)以后,牛(Wilmat and Rowson, 1973),羊(Willadsen, Polge, Rowson and Moor, 1974),兔(Whittingham and Adams, 1974)和大鼠(Whittingham, 1975)的胚胎相继冷冻成功。应用冷冻保存技术不但能根据需要随时进行胚胎移植,而且还可以进行胚胎长途运输和建立基因库——长期保存有价值的遗传材料和珍贵的品种资源,它和精液冷冻一样在家畜的良种繁     

猪胚胎体外培养至囊胚阶段获得成功

绵羊(Wright等,1976)和牛(Wright等,1976)的胚胎培养发育至胚泡阶段最近获得成功。1～4细胞猪胚胎,在种种条件下,体外发育受到抑制(Polge和Frederick,1968)。Polge等(1972)将猪胚胎在兔输卵管中成功地培育了两天。本研究的目的是:1)验证各种不同培养     

中国科学家突破技术难关猪胚胎可超低温保存

上海市农业科学院畜牧科学家近日宣布，他们已经成功掌握在零下196℃的超低温中保存猪胚胎的技术。通过这种技术保存的28个胚胎复苏之后移植入母猪体内，产下10头小猪．成活8头。这是中国科学家在难度较高的猪胚胎超低温保存研究上的首次突破，为建立中国特有猪种胚胎库奠定了技术基础。     

猪孵出囊胚的冷冻保存

Polge等(1974)曾报道,猪胚胎对低温很敏感,低于15℃温度时就会受到损害。可是,最近有报道指出,猪的扩展(膨胀)囊胚、即将孵出的囊胚和已孵出的囊胚能耐受-20℃(Nagashim等,1989)、-35℃和-196℃     

猪胚胎的OPS玻璃化冷冻

以广西巴马小型猪为供体,采用超数排卵技术,采集5~6日龄具有完整透明带的胚胎(囊胚/桑葚胚),采用二步法OPS(Open pulled straw)玻璃化冷冻技术进行保存,即胚胎首先在冷冻液1(TCM199 20?S 10%EG 10%DMSO)中平衡3 min,然后立即转入冷冻液2(TCM199 20?S 20%EG 20%DMSO 0.4 mol/LSUC)中并在1 min内装管(每管含2~6枚胚胎),直接投入液氮保存;3个月后解冻移植给8头受体母猪(每头移入25~26枚胚胎),其中1头怀孕产仔(8头活仔),获得猪胚胎超低温(-196℃)冷冻后代。     

以长白猪为受体母猪的手术法胚胎移植的体会

<正>胚胎移植技术是克隆猪、转基因猪等研究进行的基础。随着猪的繁殖生物技术的需要,猪胚胎移植技术也得到了快速发展。猪胚胎移植于1951年获得成功~([1]),但因猪生理特点及其受精卵抵抗低温较弱等特点,直到1975年Cumock才将其应用于实际,胚胎移植技术作为一种猪群净化手段为世界所关注~([2])。1989年我国成功得到猪胚胎移植后代,之后相继得到试管猪、克隆猪和转基因猪。胚胎移植技术是猪生产中不可或缺的     

牛胚胎移植的发展概况(连载之二)

三、胚胎冷冻保存技术1．常规胚胎冷冻技术70年代，由于胚胎冷冻技术的缺乏，采集的胚胎必须在数小时内移植给受体，否则只有弃掉。对于特定的供体而言，能够获得的可用胚胎数是不可预测的，因此，难于准备同等数量的同期受体牛使胚胎不至浪费。尽管胚胎在室温和0℃以下能够培养保存，但也只能最长保存24小时。因此，在当时情况下，许多研究小组都在研究能够长期保存胚胎的方法。1972年，Whittingham等发现了在－196℃下保存2～8细胞期小鼠胚胎的冷冻技术，并将胚胎移植后产仔。该论文发表在当年的《科学》杂志上，他们冷冻的1000枚小鼠胚…     

长白猪和哈白猪超数排卵的研究

近几十年来，对单胎家畜的超排研究较为深入。但对猪超排研究相对较少，其超数排卵的意义也远不如单胎动物大，但猪却能给生物技术研究提供大量的胚胎。近年来，随着细胞核移植技术在畜牧科研和生产上的应用，猪的超数排卵技术开始受到应有的重视。此次试验对长白猪和哈白猪进行了超数排卵研究，其目的是建立有效的猪超数排卵技术，为进一步做好猪胚胎生物工程研究提供必要的方法和数据；为猪的细胞核移植研究，提供尽可能多的卵母细胞和胚胎。     

不同添加物质对猪卵母细胞体外成熟的影响

卵母细胞体外成熟(IVM)是胚胎工程的重要环节,在体外受精、体细胞核移植及转基因动物等多项操作的早期起决定性作用。IVM技术可有效回收利用屠宰家畜的卵巢,以解决哺乳动物胚胎工程中卵子来源不足的问题。目前,IVM技术已应用于牛、山羊、绵羊、猪等动物的繁殖技术中,并成功获得后代[1],     

单胚胎RT-qPCR对猪体细胞核移植囊胚全能性的分析

为了检测猪体细胞核移植囊胚的质量和全能性基因表达量,采用体细胞核移植技术制备克隆胚胎并于体外培养5 d后获得囊胚,对照组为从人工授精5 d后的长白母猪体内获取的体内囊胚。在高倍镜下检测两组囊胚的形态,用Hoechest 33342染色细胞核DNA,记录囊胚细胞总数;建立单胚胎cDNA的制备方法,并用qPCR检测囊胚中全能性基因(Oct4、Nanog、Sox2)的表达量。结果表明,与体内囊胚相比,猪体细胞核移植囊胚质量较差,细胞数目显著降低(分别为110±10.3和54±12.6);并且全能性基因表达量显著下降(P<0.05)。由此可见,全能性基因表达量偏低是影响猪体细胞核移植囊胚发育能力的因素之一。     

猪冷冻（—20℃）胚胎在我国移植成功

实验Ⅰ将129枚猪胚胎,用于冷冻-解冻-体外培养研究。以含有1.5M甘油的PBS液为冷冻液,以1℃/分的速率从35℃降至-7℃,在-7℃自动诱发给冰,然后以0.3℃/分的速率降至-35℃,再以0.1℃/分的速率降至-36℃,立即投入液氮(-196℃);胚胎解冻在37℃水浴中进行、分步脱出甘油后以改进的mBMOC-Ⅱ为培养液进行体外培养。结果,囊胚、扩张囊胚、刚孵出囊胚和孵化出后期囊胚、解冻后体外培养存活率分别为0％(0 /2)、64％(16/25)、0％(0/9)。在液氮中(-196℃)保存80～103天,扩张囊胚、刚孵出囊胚和孵出后期囊胚解冻后,体外培养存活率分别为41.6％(5/12)、63.7％(7/11)和0％(0/70)。结果表明,在液氮温度(-196℃)保存下,刚孵出囊胚有较高的耐冻性和存活能力。实验Ⅱ进行猪冷冻胚胎解冻后体内发育能力研究。96枚扩张囊胚和刚孵出囊胚,分批冷冻和保存在-20℃、-35℃和-196℃。解冻后移植3头受体,其中2头返情,1头妊娠并于1990年7月31日产仔2头,公母各1头,初生重均为1.35kg,妊娠期为116夭。该结果为我国首例猪冷冻(-20℃)胚胎移植成功,并为今后开展猪胚胎超低温(-196℃)冷冻保存技术研究奠定了基础。     

分子育种手段之微卫星技术的应用与前景

在国内，1995年，西北农业大学窦忠英等用胚胎细胞核移植产生了6头猪。1996年，湖北农科院魏庆信等得到了胚胎细胞核移植猪。1997年赵浩斌等和2000年Li等分别获得猪胚细胞核移植后代1998年，东北农业大学的李光鹏等把猪胚胎的细胞核通过电融合移植到去核的体内和体外成熟卵母细胞中，出生了2头克隆猪。2003年，西北农林科技大学冯秀亮等得到了人体细胞和猪卵母细胞异种核移植囊胚。     

应用胚胎移植防止家畜疾病的传播

预防胚胎移植传播疾病的动向Pursel 等(1980)提出了在进行猪的胚胎和精液国际交流时,应遵循的卫生防疫原则.指出就有关疾病发生地区、猪群类别和各个供体、需要检查的疾病以及卫生条件和是否给过抗菌药物等,应由国家出示证明。