番茄溃疡病菌PCR快速检测技术

番茄溃疡病是一种严重危害番茄生产的细菌性病害，许多国家将其列为检疫性病害。利用ITS通用引物扩增了番茄溃疡病菌（Clavibacter michiganensis subsp．michiganensis）的ITS序列，并进行克隆测序。根据序列比较结果设计了引物BT1和BT2，该引物特异性好，能专一扩增出268bp电泳条带，而马铃薯环腐病菌等不同亚种、不同属的细菌及健康的番茄材料均无扩增条带。从接种但未显症番茄苗叶片及人工模拟染菌种子上提取总DNA，以此为模板均能稳定地扩增出特异性目的条带。该方法直接对种子或植株进行检测，不需进行病原菌分离培养，快速简便，适用于出入境检验检疫及种苗健康检测领域。     

ELISA及实时荧光PCR检测番茄细菌性溃疡病菌的方法比较

本文以番茄细菌性溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis)菌悬液和田间采集的病组织为材料,比较ELISA试剂金、常规PCR方法和实时荧光PCR方法检测番茄细菌性溃疡病菌灵敏度和适用性.结果表明,ELISA试剂盒检测灵敏度为105cfu/mL,具有简便、快速、易操作特点,适用于田间病害诊断;常规PCR检测灵敏度为105cfu/mL;TaqMan探针实时荧光PCR检测灵敏度为103～4cfu/mL,比常规PCR和ELISA检测灵敏度提高10～100倍,且不需要琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色和Southem杂交,但需要昂贵的仪器和试剂,适用于室内检测及相关研究.     

基于致病基因序列的LAMP方法检测番茄种子携带的溃疡病菌

本研究选取番茄溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis,Cmm)致病岛上的chpC基因的部分序列,作为环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)靶标片段进行LAMP引物设计。对反应体系优化后进行特异性测定,结果表明供试的89株番茄溃疡病菌中86株检测结果为阳性,3株为阴性,供试的14株非番茄溃疡病菌(其他重要植物病原细菌)均为阴性。检测番茄溃疡病菌菌悬液样品的阈值为4.8×10~5 CFU·mL~(-1),对DNA样品的检测阈值为1.8×10~(-2) ng·μL~(-1),并据此建立了番茄溃疡病菌的LAMP检测方法。将该方法应用于番茄种子携带Cmm的检测,通过提取种子浸提液样品的总DNA,实现了对番茄种子携带Cmm的直接检测。与普通PCR相比,该方法更加快捷简便,不依赖PCR仪等昂贵的仪器设备,可以丰富现有的番茄溃疡病菌分子检测体系,为口岸等检疫部门提供简单易行的检测初筛手段。     

番茄细菌性溃疡病及其防治

番茄细菌性溃疡病及其防治我们在莱阳作病害调查时，在繁种番茄上发现番茄细菌性溃疡病。受害植株叶小萎蔫、严重时全株枯死。茎上产生狭长条斑，后期纵裂，横切面髓部变褐中空。病果上产生“鸟眼状”病斑，中央褐色，表面粗糙，稍凸起，周缘白色。一般减产三至五成。番茄...     

解淀粉芽孢杆菌B6在番茄根部定殖及对番茄枯萎病盆栽防效初步研究

采用利福平选择标记解淀粉芽孢杆菌B6,于土培及水培条件下研究其在番茄根部定殖情况及对番茄枯萎病的防治效果。结果表明,番茄种子出芽后4～19 d,根表及根际均能成功检测标记菌株B6~R。在根表,标记菌株B6~R定殖密度4 d时达最高,后逐渐下降,16～19 d稳定在7.40×10~5 cfu/g。在根际,标记菌株B6~R定殖密度先升高后降低,菌体数量稳定在2.53×10~6 cfu/g。水培条件下,能够观察到标记菌株B6~R在番茄根部附着定殖。室内盆栽试验显示,解淀粉芽孢杆菌B6能够较好防治尖孢镰刀菌引起的番茄枯萎病,防治效果达64.35%。     

中国北方番茄细菌性溃疡病菌的rep-PCR基因指纹图谱分析

对来自全国若干省市的番茄细菌性溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis)的33个菌株进行rep-PCR分析。结果表明,用引物BOX分别扩增出6～15条多态性条带,条带大多数集中在500～2800bp之间;用引物ERIC扩增的条带不清晰,可能是反应条件不适合,也可能是其不适合对番茄细菌性溃疡病菌进行多态性分析;BOX-PCR表明番茄细菌性溃疡病菌菌株具有丰富的遗传多态性和较大的遗传变异,对产生的指纹图谱进行分析:在遗传距离为0.18时,测试的33个菌株可划分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和Ⅶ等7个遗传相似组群,其中Ⅵ组群包含的菌株最多。研究还表明番茄细菌性溃疡病菌的遗传分群与菌株的地理来源关系密切,但与该病的发病年份上没有必然联系,这也从另一侧面说明了该病害是土壤带菌引起的。     

番茄溃疡病菌拮抗链霉菌菌株23的鉴定

 番茄溃疡病(Tomato bacterial canker)是一种重要的世界性病害^[1]。近年来,该病在我国的发生呈上升趋势,严重时可减产25%~80%,甚至绝收。该病有逐渐向我国南方扩展蔓延趋势,迄今尚无化学药剂可控制其危害。     

番茄上两种细菌性病害的诊断与防治

番茄溃疡病和番茄细菌性叶斑病是两种可以由种子传播传染的细菌性病害，因此也是植物检疫上十分重视和关注的病害。在引种和调运种子、种苗时应该对种苗是否带菌进行检测，最好是实行产地检验，但常用的是种子检验。在种子检验中，通常采用的是分离培养和血清学检测。有条件的单位应该采用分子检测的方法，前者是经典的方法，比较费事；后者快速，但要求有一定的技术和设备。     

番茄溃疡病菌单克隆抗体的制备与鉴定

为制备并鉴定番茄溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis,Cmm)的单克隆抗体(McAbs),用全菌皮下免疫BALB/C小鼠,采用B细胞杂交瘤技术,经免疫、融合、间接ELISA筛选和克隆等,获得稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株,得到了抗番茄溃疡病菌的单克隆抗体。经免疫后获得3株单抗分别为1A4、1C3和1B7,经亚类鉴定分别是IgM、IgG1、IgG1;纯化腹水间接ELISA效价分别为1:3.2×106、1:8.1×105、1:3.2×106;与其他同属不同亚种无交叉反应。结果表明:3株单克隆抗体均具有较高特异性和敏感性,可作为番茄溃疡病菌的检测抗体,其中,1A4的效果最好。番茄溃疡病菌单克隆抗体的获得为进一步研发番茄溃疡病检测试剂盒奠定了基础。     

淮南市番茄溃疡病的发生与综合防治对策

安徽省淮南市于2003年6月在本市田家庵区蔬菜基地发现番茄溃疡病,发病面积26.7 hm2,田间病株率达45%～55%,病果率20%～30%。这是安徽省首次鉴定发现此病害。番茄溃疡病是番茄上重要的危险性病害,其传播速度快、为害严重,已被我国列为国内检疫对象。经过几年的综合防治,目前已基本控制了该病的蔓延、为害。1为害情况番茄溃疡病是一种由病原细菌棒杆菌属密执安棒杆菌密执安亚种(Clavibecter michiganensesubsp.michiganense)通过种子传播的维管束系统病害。该病从幼苗至坐果期都可以发生。幼苗期发病,低位叶片小叶或植株一侧部分小叶出现萎蔫…     

泉州市番茄常见病害的田间诊断及其防治技术

番茄是泉州市蔬菜直控基地的主栽品种之一,特别在泉州市辖的鲤城区、丰泽区、石狮市一带,其种植面积正逐年扩大.但随着栽培面积的扩大,番茄的病害也日益加重和扩大.大田中番茄常见的病害主要有真菌性病害、细菌性病害、病毒性病害和生理性病害等.为了最大限度防止番茄病害的发生,达到高产、优质、高效的目的,现将大田中番茄常见病害的诊断及防治技术介绍如下:     

强酸性电生功能水对番茄白粉病和细菌性叶斑病防治效果初探

为探索强酸性电生功能水对番茄白粉病和番茄细菌性叶斑病的防治效果,分别以1×10~6孢子/g寡雄腐霉菌可湿性粉剂和46%氢氧化铜水分散粒剂为对照药剂,采用不同浓度的强酸性电生功能水在番茄缓苗期和发病初期进行叶面喷施。结果表明,在缓苗后用50 mg/L强酸性电生功能水进行预防,在病害发生初期改用80 mg/L浓度进行防治,对番茄白粉病和番茄细菌性叶斑病均有较好的防治效果,防效分别为64.10%和66.14%,而且可使番茄增产2.80%;仅在病害发生初期开始使用80 mg/L强酸性电生功能水进行叶面喷施,对番茄有一定增产效果。但是,对番茄白粉病和番茄细菌性叶斑病的防治效果与对照差异不显著。     

番茄细菌性叶斑病菌RPA检测技术

番茄细菌性叶斑病菌(Pseudomonas syringae pv.tomato,Pst)是我国进境植物检疫性有害生物,可随种子进行远距离传播。快速简便的检测对于防止该病害的扩散传播具有重要意义。依据番茄细菌性叶斑病菌的hrpZPst基因序列,设计并筛选出特异性扩增引物,建立了番茄细菌性叶斑病菌的重组酶聚合酶等温扩增(RPA)检测方法。该方法可从10种不同的植物病原细菌中特异性地检测到3个参试番茄细菌性叶斑病菌株。对病菌DNA的检测灵敏度为75fg/μL,与PCR凝胶电泳相当。该方法扩增核酸时间短、效率高、对设备的要求低,适合于基层简易实验室的快速检测。本文为该病原菌的检测提供了新方法。     

猕猴桃园区坡度和晴雨天对猕猴桃溃疡病传播的影响

猕猴桃溃疡病是由丁香假单胞菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae pv. actinidiae,Psa)引起的细菌性病害,严重影响猕猴桃产业发展。明确猕猴桃溃疡病在田间的传播对其防治具有重要意义。本研究于2020年4月16-22日和2021年3月24-30日,在湖北省赤壁市调查了半岛南猕猴桃种植园区内猕猴桃溃疡病的发病情况,通过孢子捕捉器在猕猴桃园区的不同地势(坡度为10°、30°和45°的区域)和不同天气环境下进行24 h连续病原捕集,并据猕猴桃叶片上溃疡病显症所需时长反映不同地势和天气环境对病害传播的影响。结果表明,在坡度10°区域进行病原捕集的猕猴桃叶片显症所需时间比坡度30°和45°区域晚1~2 d。雨天在孢子捕捉器内的叶片上显症所需时长仅需7 d,而晴天显症时长则需10~12 d。明确了露地栽培猕猴桃园区坡度和雨天显著促进了猕猴桃溃疡病的传播。对猕猴桃溃疡病防治技术制订和实施有一定意义。     

利用环介导等温扩增方法快速检测瓜类细菌性果斑病菌和番茄细菌性溃疡病菌

为建立简单、快速和灵敏地检测瓜类细菌性果斑病菌Acidovorax avenae subsp. citrulli(Aac)和番茄细菌性溃疡病菌Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis(Cmm)的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,以Aac的ugpB基因和Cmm的micA基因为靶标,分别设计、合成和筛选特异性引物,摸索和优化各项反应条件和反应体系,成功建立了以钙黄绿素颜色为指示且只需要金属浴恒温反应30～60 min的LAMP扩增体系。特异性分析表明该LAMP方法可以快速检出5株不同的Aac菌株和2株不同的Cmm菌株,其它对照菌株如燕麦嗜酸菌燕麦亚种A. avenae subsp. avenae、丁香假单胞菌Pseudomonas syringae、水稻黄单胞菌水稻致病变种Xanthomonas oryzae pv. oryzae和茄科雷尔氏菌Ralstonia solanacearum则呈现阴性反应;引物比目前报道的LAMP引物有更高的DNA样品检测灵敏度,Aac和Cmm的灵敏度分别为1.72×10~2fg/μL和1.26×10~2fg/μL。研究结果表明,所设计的Aac和Cmm引物特异性好、灵敏度高,更有利于从源头上控制这2种检疫性细菌病害的流行和传播。     

PCR技术快速检测玉米内州萎蔫病菌研究

玉米内州萎蔫病是北美玉米生产中的严重病害,为防止其传入我国,本研究采用Clavibacter michiganensis不同亚种的转录间隔区序列,设计了特异性的PCR引物,对C.michiganensis种下不同亚种的DNA进行了PCR扩增反应,结果表明,只有玉米内州萎蔫病菌的特异性扩增得到大小为170bp的目标片段,且仅有此一条明显的PCR扩增产物,C.michganensis种下其他亚种无扩增产物。PCR反应的灵敏度为4.36×105cfu/mL和1.56×102pg,可以满足检疫的要求。     

番茄常见病害的发生与防治技术

玉屏县番茄常见病害有灰霉病、早疫病、晚疫病、细菌性斑点病、溃疡病和青枯病等,在防治过程中,贯彻“预防为主、综合防治”的植保方针,采取生物防治、物理防治、农业防治、化学防治的综合防治方法．改善番茄品质,提高农民收入。     

番茄细菌性斑点病病原菌鉴定

 1998~1999年在吉林省、辽宁省、黑龙江省等地的大棚番茄上发现一种番茄病害,并从其病叶、病茎杆上分离得到了23个细菌菌株。接种番茄幼苗上,发病症状与自然发病症状完全一致,并从接种病株上重新分离到此病原细菌。各菌株致病力无明显的差异。经革兰氏染色反应、菌体形态、培养性状、生理生化反应、G+C mol%等鉴定,确认该病原菌为丁香假单胞杆菌番茄致病变种(Pseudomonas syringae pv.tomato(Okabe)Young,Dye&Wilkie)。该病菌引起番茄细菌性斑点病(又称叶斑病)。病菌除侵染番茄外,尚能侵染茄子、辣椒、龙葵、白花曼陀罗和毛曼陀罗。该病害尚属我国大陆首次报道。     

番茄细菌性溃疡病菌的实时荧光PCR检测

 由Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis(Cmm)引起的番茄细菌性溃疡病是一种严重危害番茄生产的种传细菌性病害。根据ITS序列多态性设计引物及TaqMan探针进行实时荧光PCR检测的结果表明,这组引物一探针能检测出所有供试的Cmm菌,对照菌均未检测到荧光信号。用接种但未显示症状的番茄苗叶片及人工处理的带菌种子提取的核酸作为模板,均能检测到病菌,其检测灵敏度比常规PCR高约100倍。实验中不需病原菌的分离培养及PCR的后续处理。该方法快速、简便、安全、准确,适用于出入境检验检疫及种子、种苗健康检测领域。     

番茄叶片上美洲斑潜蝇幼虫种群密度的零频率估计法

为了在一定精度保证的前提下,简便、快捷地估计番茄叶片上美洲斑潜蝇田间发生情况,本文基于番茄叶片上美洲斑潜蝇幼虫种群发生的田间调查数据,用种群密度m和零频率p0分别拟合Gerrard Chiang模型、线性函数、二次函数、双曲函数、指数函数、幂函数和对数函数7种不同模型。结果表明,以Gerrard Chiang模型m=1.322 5×(-ln p0)1.075 9为最优（理论抽样数187.3叶）,用其可根据零频率有效地估计番茄叶片上美洲斑潜蝇幼虫种群密度。