紫外线对枯草芽孢杆菌生产菌株的诱变与筛选

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一种革兰氏阳性菌,具有种类多、分泌蛋白能力强、安全性好等优点,是一种重要工业酶和工业制剂的菌种,被广泛应用于医药、食品、农业、饲料、造纸和纺织等多种领域。为了进一步提高枯草芽孢杆菌的发酵能力,采用紫外线照射的方法诱导筛选高产菌株。对通过紫外线诱导提高枯草芽孢杆菌产淀粉酶、蛋白酶、α-乙酰乳酸脱羧酶(α-acetolactate decarboxylase,简称α-ALDC)、3-羟基丁酮(Acetoin)和葡萄糖-1-磷酸(Glucose-1-phosphate,简称G-1-P)能力的条件进行了比较。     

一株胶质芽孢杆菌的筛选和鉴定

从河南铝土矿中分离到菌株LV1-2,将其接种到含伊利石矿粉的浸矿液中，170r／min摇床30℃培养7d，离心后测得接种LV1-2的溶液中的硅浓度比对照液中的增加110．02％，说明LV1-2对伊利石有脱硅作用．通过扫描电子显微镜、革兰氏染色、荚膜染色、鞭毛染色和芽孢染色的观察，生理生化特性的测定，以及16S rDNA序列的比对分析，菌株Lv1-2鉴定为胶质芽孢杆菌．     

利用紫外线和EMS诱变选育高产枯草芽孢杆菌

以豆豉溶栓酶产生菌株蜡状芽胞杆菌LD-8567为出发菌株,通过紫外线和甲基磺酸乙酯（EMS）的复合诱变选育高产枯草芽孢杆菌．用正交试验法优化EMS的诱变条件,得到最佳诱变条件,即在1mL体系中,EMS用量20μL,诱变时间20min,菌液浓度1×10^8个·mL-1,最终经过初筛和复筛得到了1株产酶活性较高的菌株,对该菌株连续传代发酵培养5代,发现其产酶能力稳定,酶活力保持在16351U·mL-1左右．     

一株产聚谷氨酸芽孢杆菌的分离与鉴定

从超高压灭菌的瓜汁中筛选出 1株产高分子聚合物的芽孢杆菌B53 。经紫外扫描、高效液相色谱分析及SDS PAGE分子量表征 ,确定该高分子是由谷氨酸单一成分组成的聚合物 ,最大吸收波长为 2 12nm ,分子质量集中在 5 70～ 6 6 9ku ,呈多分子质量聚集体形式 ,不具备典型肽或蛋白质特征。依据B53 的菌株形态、生理生化特征、G +C含量 (摩尔分数 )及 16SrRNA基因序列分析结果 ,将芽孢杆菌B53 菌株鉴定为枯草芽孢杆菌。     

芽孢杆菌诱变育种研究进展

芽孢杆菌作为一种重要的工业微生物菌种,越来越引起人们的普遍关注和青睐。目前,关于芽孢杆菌诱变育种的方法多种多样,诱变育种丰富和拓宽了菌种的变异类型,但还存在不少问题。从物理诱变育种、化学诱变育种、生物诱变育种、复合诱变育种4个方面对芽孢杆菌诱变育种方法进行了总结,以期为生产中选取优良芽孢杆菌提供实用有效的诱变育种方法。     

一株芽孢杆菌的分离、鉴定及其抗菌效果研究

从健康牙鲆肠道内分离到一株芽孢杆菌(H-1)和鳗弧菌W-1株进行拮抗实验,表明该菌对鳗弧菌具有较强的拮抗作用(抑菌直径33.05 mm)。应用形态学、生理生化及16S rDNA序列分析方法对该菌进行了综合鉴定,结果显示,菌株H-1与枯草芽孢杆菌标准菌株同源性高达98%,故将其确定为Bacillus subtilis。     

两株芽孢杆菌的鉴定

通过对2株芽孢杆菌的形态学、生理生化试验及16S rDNA序列同源性分析,发现B02号菌株与Ba-cillus cereus的同源性为100%,系统发育树分析与Bacillus cereus遗传关系最近,确定该菌株为Bacillus ce-reus。而B03号菌株与Bacillus cereus的同源性为98%,要确定其种还需进一步DNA杂交;该2株芽孢杆菌的芽胞数在1.0×1012个/kg体重以下安全无毒。2株芽孢杆菌的药敏性试验和拮抗性试验结果表明,参试菌对5类抗菌药物大多数都很敏感;对4种动物肠道病原菌无明显拮抗作用。通过酶系测定,参试菌都具有一定SOD酶活性。喂养实验结果表明,2株菌对雏鸡具有一定的防病治病效果。以上结论初步证明该菌株的抑病促生机理主要是生物夺氧和有益代谢产物的作用,而非优势种群、生物拮抗作用。     

一株产黑色素芽孢杆菌的分离与鉴定

从人的头发样品中筛选出1株产黑色素芽孢杆菌ZH168.对该菌株形态、生理生化特征、16S rDNA基因序列及全细胞蛋白电泳研究结果表明,ZH168菌株为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis.该菌产生的胞外黑色素在可见-紫外光区均有吸收,紫外区光吸收强,随着波长的减小,吸收增强,在210 nm左右有1个吸收高峰;红外光谱与合成的多巴黑色素很相近,具有黑色素吲哚结构的吸收峰.电子自旋共振谱是轻微不对称的典型单线一次微商波谱.综合以上结果确定该菌所产生的色素为黑色素.     

一株益生芽孢杆菌的分离与鉴定

[目的]为优良益生菌的开发提供理论依据。[方法]以采自中国农业科学院北京畜牧兽医研究所鸡舍附近的土壤样品为材料,采用稀释平板法对其中的菌株进行分离与纯化培养,并对分离菌株的生理生化特性和淀粉酶活性进行测定。[结果]从土壤样品中分离到一株芽孢杆菌（编号为P-31）,结合16S rDNA测序、系统发育树分析和生理生化鉴定结果,确定该菌株为巨大芽孢杆菌,其16S rDNA GeneBank登录号为GU271136;水解酶活性测定结果显示,该菌株具有产蛋白酶和淀粉酶的活性。[结论]该研究所分离的菌株P-31具有良好的益生菌开发前景。     

苏云金芽孢杆菌诱变育种的初步研究

苏云金芽孢杆菌(Bt)是世界上适用范围最广杀虫效果最理想的生物农药,但是Bt存在着发酵效率低、杀虫谱窄、毒力效价低的问题,严重制约着其发展推广.为了提高Bt菌种毒力效价,增强其杀虫活性.该文采用了紫外照射以及硫酸二乙酯(DES)、亚硝酸钠两种化学试剂对菌株Bt HD-1进行诱变育种,得到各诱变优化条件,结果表明,在最佳诱变条件下伴孢晶体含量都有了明显的增加,其中紫外照射条件最为明显,通过优化试验,筛选到一株伴孢晶体含量OD值增加34.2%菌株,得到产伴孢晶体能力明显提高菌株.     

高絮凝活性芽孢杆菌的筛选及其絮凝特性研究

采用平板分离法从土壤中分离芽孢杆菌,以发酵液对高岭土悬液絮凝效果为指标筛选高絮凝活性菌株,并通过细菌形态、生理生化特性和16S rDNA序列分析进行鉴定;同时考察发酵液加入量、Ca2+浓度和pH对絮凝效果的影响以及微生物絮凝剂在发酵液中的分布.结果表明:从土壤中分离筛选到1株具有高效絮凝活性的芽孢杆菌MBFF6,其絮凝率可达95.7％;根据细菌菌落形态、生理生化特性和16S rDNA序列分析,确定该菌株为巨大芽孢杆菌;其最佳絮凝条件为加入的菌液体积分数2％,Ca2+浓度4.5 mmol· L-1,pH 7.0;该微生物絮凝剂是细菌在生长过程中产生的胞外代谢产物,存在于发酵液中.     

菠菜内生细菌SEB的鉴定及拮抗作用

[目的]从菠菜上筛选内生细菌,防治菠菜主要病害。[方法]用稀释分离法从菠菜植株内分离内生细菌,培养基平板对峙法测定内生细菌的拮抗作用,并依据形态特征和生理生化特性,使用B iolog细菌鉴定系统鉴定。[结果]从菠菜植株根分离到具有生防活性的细菌SEB,对菠菜枯萎病菌等5种病原菌有较强的拮抗作用,鉴定为芽孢杆菌属。[结论]SEB菌株对多种病原真菌有拮抗作用,对菠菜枯萎病菌抑制率最高,具有开发成微生物制剂,防治园艺作物和农作物病害枯萎病的价值。     

Kira与Holdridge热量指标对常绿树种耐低温能力的评价

广泛收集了南京地区分布或栽培的14种常绿阔叶树种的分布资料,利用目前被国际公认的研究植被—气候相互关系的2种指标,K ira热量指标与Holdridge热量指标,以及年平均气温,计算了14种树种的寒冷指数以及生物温度的最适范围、全范围与均值,分析了这些树种的耐低温能力.结果表明2种热量指标基本能很好地反映树种本身耐低温能力高低,如大叶冬青,其自然分布于亚热带北纬32,°运用上述2种热量指标都表示大叶冬青耐低温能力强,这与大叶冬青本身引种到南京地区的越冬表现相一致.因此该研究结果对常绿阔叶树种耐低温评价以及在高纬度地区园林中的合理运用有一定的指导意义.     

水稻不同低温敏感期的耐冷性研究进展及前景

本文概述了水稻发芽期、芽期、幼苗期、孕穗期和开花期耐冷性的遗传、基因定位、耐冷性鉴定方法的研究进展及不同时期耐冷性的相互关系,展望了水稻耐冷性的研究前景。     

功夫菊酯降解菌GF-3的筛选鉴定及其降解特性研究

菊酯类农药广泛用于农业害虫的防治,但对生态环境与食品的污染也是十分严重的,微生物降解菊酯类农药是消除其污染的主要途径.从农药厂废水排放口附近的活性污泥中分离到一株能利用功夫菊酯为惟一碳源生长的细菌.命名为GF-3.根据其生理生化特征和16S rDNA序列相似性分析,将该菌株鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.).采用室内培养与液相色谱测定方法,研究了GF-3对功夫菊酯的降解特性.结果表明,GF-3能有效地降解浓度为50～600 mg·L-1的功夫菊酯,在24 h内对100 mg·L-1.功夫菊酯的降解率达到98.4%.降解功夫菊酯的适宜温度为30℃左右,适宜pH为7～10.酶的定域试验表明,降解功夫菊酯的酶属于胞外酶.GF-3除了降解功夫菊酯外,还能降解甲氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、高效氯氰菊酯等.GF-3中有2个质粒,但质粒消除试验表明降解功夫菊酯的基因不在质粒上,而是在其染色体DNA上.     

普施特降解菌Bacillus sp. zx2和zx7生长及降解特性

芽孢杆菌zx2和zx7是普施特高效降解菌,研究其生长和降解特性旨在为普施特污染土壤的生物修复提供科学依据.采用瓶培养法,对芽孢杆菌zx2和zx7的生长特性及单菌和复合菌对普施特的降解特性进行了研究.结果表明,zx2和zx7均可在普施特初始浓度≤200 mg· L-1的无机盐培养液中生长良好,zx2在温度25～35℃和pH4.0～7.0时生长良好,而zx7适宜在温度30～35℃和pH5.0～8.0时生长,可见在适应性上二者互补.在最佳条件(温度32℃、pH6.0和普施特初始浓度为200 mg· L-1)下,zx2和zx7在无机盐培养液中对普施特降解动态均符合阻滞动力学,半衰期分别为3.8 d和2.8 d,培养6d时普施特降解率分别为85.81％和90.27％.在培养过程中,zx2的pH是降低的,而zx7的pH基本不变,可初步表明二者降解机理不同;zx2和zx7复合菌(1:1)对普施特降解率比单菌低,为82.70％,这可能是因为zx2或zx7降解普施特的过程中利用了对方产生的降解产物.     

抗香蕉枯萎病放线菌的筛选及菌株DA07408的鉴定

从土壤样品中共分离放线菌398株,用纸片法对其进行抗古巴尖孢镰刀菌4号生理小种活性筛选,结果发现共有8株具有活性,其中分离于海南儋州植物园土壤的菌株DA07408活性最强.经形态与生理生化特征、16SrDNA序列测定及其系统发育分析,将菌株DA07408初步鉴定为橄榄产色链霉菌Streptomyees olivochromogenes.     

薄皮甜瓜种质资源苗期耐低温弱光鉴定及形态指标选择

对20份薄皮甜瓜种质材料在幼苗期进行低温弱光处理,测定薄皮甜瓜幼苗的株高、茎粗、地上部鲜质量、根系鲜质量、地上部干质量、根系干质量、叶片数、根长、根表面积、根体积、根尖数、根投影面积等12个形态指标,通过相关性分析、主成分分析和聚类分析对20份甜瓜种质材料进行耐低温弱光评价和耐胁迫指标的筛选。相关性分析结果表明,12个甜瓜形态指标之间均呈正相关性,其中,根长与根系干质量之间相关性不显著。通过聚类分析筛选出7个耐低温弱光胁迫强的品种和1个不耐低温弱光品种,并通过逐步回归分析建立甜瓜幼苗期耐性方程,其中,薄皮甜瓜相对根系鲜质量、相对根长、相对叶片数、相对根表面积和相对根投影面积对低温弱光胁迫响应敏感,可以作为鉴定甜瓜耐低温弱光指标。     

2009年自然低温下优质稻种质资源耐冷性初步鉴定评价

[目的]从供试水稻种质材料中筛选耐冷性强的优良种质,为水稻耐冷性研究和利用积累材料,为优质稻耐冷品种选育提供优良亲本.[方法]利用早春低温和晚稻寒露风自然低温条件,采用早播早植法及晚播晚植法,对458份优质稻种质资源材料分别进行发芽期、幼苗期和抽穗扬花期的耐冷性初步鉴定与评价.[结果]在458份优质稻种质资源材料中,发芽期、幼苗期、抽穗扬花期表现耐冷性极强和强的种质分别有21份、15和76份、5和80份,分别占鉴定份数的4.59%、3.28%和16.59%、1.48%和23.74%.不同种质在不同生育期耐冷性表现不完全一致,但发芽期耐冷性强的种质在幼苗期也表现较强的耐冷性.筛选出在自然低温条件下各生育期均表现强或极强耐冷性的优质稻种质6份,如TKM10、三粒寸、湘晚籼13号、恢968选、649/五大稻种//649///649、253/P117//253///253.[结论]利用自然低温条件,可初步区分不同生育期耐冷性强与弱的优质稻种质资源,其适合对大量稻种资源进行耐冷性筛选鉴定;筛选出的耐冷性极强或强的种质具有较好的应用价值.在不同生育期均表现强耐冷性的6份优质稻种质,可作为耐冷亲本材料在水稻的耐冷性研究及优质稻耐冷育种中加以利用.