影响动物胚胎干细胞克隆与分化因素的研究进展

系统介绍了在动物胚胎干细胞分离与克隆中使用的培养液和添加物的特性及培养液、添加物和遗传因素对动物胚胎干细胞克隆及分化的影响。在 DMEM培养基中添加优质血清、表皮生长因子、胰岛素生长因子、白血病生长因子等能显著提高胚胎干细胞的克隆率 ,生长因子通过促进细胞 DNA和蛋白质合成 ,抑制细胞程序性死亡来提高 ES细胞克隆率。叶酸、二甲基亚砜、神经生长因子、碱性成纤维细胞因子等可诱导动物胚胎干细胞在体外分化 ,形成神经细胞、造血细胞、心肌细胞和肌肉组织等。     

胚胎干细胞的分离克隆

从全能性或多能性细胞获取、分化抑制物选择、培养基、分离方法、鉴定、保存等６个方面，对胚胎干细胞的分离培养体系的建立进行了系统综述。     

胚胎干细胞与哺乳动物克隆

胚胎干细胞 (Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌ,ＥＳ细胞 )是从早期胚胎内细胞团 (Ｉｎｎｅｒｃｅｌｌｍａｓｓ,ＩＣＭ)或原生殖细胞 (Ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌｇｅｒｍｃｅｌｌｓ,ＰＧＣｓ)中分离出来的 ,能在体外培养并具有发育全能性的细胞[1 ,2 ] 。在发育阶段上 ,ＥＳ细胞类似早期胚胎的内细胞团 ,具有分化潜能和正常整倍体核型的特点 ,兼有胚胎细胞和体细胞的类似特征 ,既可以进行体外培养、增殖、转化和筛选 ,又可分化为包括生殖系在内的各种组织[3～ 5] 。因此 ,ＥＳ细胞具有十分重要的生物学意义 ,它已成为现今哺乳动物生物工程研…     

水产动物精原干细胞和胚胎干细胞冷冻保存技术研究进展

生殖细胞及胚胎的低温冷冻保存不仅是水产动物种质资源保存的重要技术手段之一,也是为水产动物优良新品种创制和培育提供基础育种材料的主要途径。精原干细胞和胚胎干细胞冷冻保存技术是近年来水产研究领域新兴的一种低温冷冻保存技术,与传统冷冻保存的精子或胚胎相比,冷冻保存的精原干细胞及胚胎干细胞具有自我更新及多向分化的潜能,同时还具有可以进行体外分化与移植等优势。本文综述了近年来水产动物精原干细胞和胚胎干细胞冷冻保存技术研究及其应用成果,以期进一步丰富和完善水产动物精子和胚胎冷冻及保存技术的资料体系,为充分利用低温冷冻保存技术提高水产经济动物优质种质资源保护和新种创制效率提供参考。     

动物胚胎干细胞的研究与应用

胚胎干细胞(Embryonicstemcells,ES细胞)是从早期胚胎内细胞团(innercellmassICM)或原始生殖细胞(Primordialgermcells,PGCs)经体外分化抑制培养分离克隆的。ES细胞在动物克隆、转基因动物生产、细胞工程、组织工程、临床克隆治疗和发育生物学等的研究应用中起着重要的作用。本文介绍了胚胎干细胞的生物学特性,国内外研究进展和研究动态。阐明了建立ES细胞系的技术要点以及ES细胞的应用及发展前景。     

哺乳类动物胚胎干细胞多能性和全能性研究进展

交ＥＳ细胞分离与克隆技术和分子生物学技术相结合就可将新的遗传物质导入家畜的生殖腺细胞。通过囊胚注入胚胎干细胞产生嵌合体小鼠表明对胚胎干细胞进行遗传操作是对物生殖细胞进行遗传改造的有效方法之一。     

从早期胚胎分离和培养兔胚胎干细胞

采用昆白系小鼠成纤维细胞（MEF）作为饲养层，低糖DMEM 10%NBS 10%FSC 10ng/mLLIF 10ng/mLSCF 0.1mmol/Lβ-巯基乙醇 100IU/mL青霉青 80IU/mL链霉素作培养基，从培养96h的胚胎中分离出1个兔类ES细胞集落，克隆传至4代，悬浮培养的兔类ES细胞团，可出现囊状胚，兔类ES细胞接种在衰老的饲养层上，出现滋养层细胞和上皮样细胞。     

山羊类胚胎干细胞的分离、克隆研究

从胚胎发育阶段、饲养层、生长因子等方面对影响山羊胚胎干细胞的分离、克隆的因素进行了研究。结果表明：囊胚期可作为分离山羊胚胎干细胞收集胚胎适宜阶段;小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)和山羊胚胎成纤维细胞(GEF)对山羊类ES细胞分离效果影响不明显;生长因子LIF和SCF配合使用可分离到山羊的类ES细胞,并传至第4代。     

LIF和IGF-1对牛胚胎干细胞分离的影响

比较了添加 L IF,IGF- 1和 L IF+IGF对牛胚胎干细胞 (ES)分离的影响。结果表明 :1添加10 ng/m L L IF能提高胚胎贴壁率 ,促进内细胞团 (ICM)和 ES细胞的增殖并抑制其分化 ;2添加 10 ng/m L IGF- 1既能提高胚胎贴壁率 ,又能使 ICM明显增殖的时间和传代后集落出现的时间提前 ;3添加 10 ng/m L L IF+10 ng/m L IGF- 1,可以同时发挥两种生长因子的作用效果 ,更有利于牛胚胎干细胞的分离。     

牛类胚胎干细胞的分离与克隆

 选用荷斯坦牛胚胎和小鼠胚胎 ,以 PMOL/ L EF细胞为饲养层 ,以 DMEM+ 15 ml/ 10 0 m l NBS+ 0 .1μm ol/L Na2 Se O3+ 0 .1mm ol/ Lβ-巯基乙醇 + 10 ng/ ml IGF+ 10 0 0 IU/ m l L IF为培养液 ,用消化法 ( ICM用 0 .2 5 g/ 10 0 ml胰蛋白酶 + 0 .0 4 g/ 10 0 ml EDTA) ,ES细胞集落用 ( 0 .12 5 g/ 10 0 ml胰蛋白酶 + 0 .0 2 g/ 10 0 m l EDTA)和机械剥离法离散ICM细胞集落和隆起明显的 ES细胞集落为细胞小块 ,获得了 9个传至 6代的牛类 ES细胞系和 2 2个传至 9代的小鼠类 ES细胞系。从形态特征、组织化学染色、核型分析和 ES细胞分化能力等方面对所分离与克隆的细胞进行鉴定 ,证明其具有 ES细胞的诸多特性     

Research on Isolation and Clone of Embryonic Stem Cell-Like in Bovine

Bovine embryonic stem cell would be invaluable for researching the aspect of animal cloning, production transgenic animal and discussion of gene function in vitro. With the object of establishing an effective culture system for isolation and clone of bovine pluripotent stem cell, we cultured bovine embryos and mouse embryos including morula blastula and hatached blastula and obtained animal ICM on Primary marine embryonic fibroblast (Primary murine embryonic fibroblast, PMEF) feeder layer with tissue medium(DMEM supplemented with 15ml/100ml NBS ,0.1μmol/L Na2SeO3, 0. 1mmol/L β-mercaptoethanol, 1 000ng/ml LIF,10 ng/ml IGF, 1mmol/L necessary amino acid and 1mmol/L L-glutamine), then, we obtained mouse ICM and bovine ICM. Moreover, we isolated and cloned the 6 passage bovine ES like cells(12 cell lines) and 9 passage marine ES like cells (52 cell lines) deriving from bovine ICM and murine ICM respectively on the feeder layer of PMEF by disaggregating ICM and ES cell clones of bovine and murine into smaller clumps through digesting with 0. 125g/100ml trypsin and 0.02g/100ml EDTA and scattering with a glass needle. The pluripotency of both murine and bovine ES like cells was identified with morphological character, histochemistry identification, karyotype analysis and differentiation of ES cells in vitro or in vivo. This result showed that bovine embryonic stem cell and murine embryonic stem cell had developmental pluripotency.     

哺乳动物胚胎干细胞分离与培养的研究进展

从胚胎干细胞的来源、分离方法和饲养层细胞等方面,总结了胚胎干细胞分离与培养在近年来所取得的进展。     

精原干细胞更新分化的影响因素*

 精原干细胞可以体外培养、冷冻保存、遗传操作及移植，因而在医学、生物学及动物科学方面均有广泛应用前景。根据现有资料阐述一些因素，包括c-Kit受体及其配体SCF、白血病抑制因子（LIF）、维生素A（V_A）、表皮生长因子（EGF）、胶质细胞源神经营养因子（GDNF）、激素和温度，对精原干细胞更新分化的影响。     

胚胎干细胞体外培养研究进展及设想

胚胎干细胞具有高度复制能力及多向性分化潜能,近年来由于胚胎干细胞的分离、培养技术的提高,尤其是对干细胞表面分子标记和诱导分化研究的深入,胚胎干细胞展示出很好的临床应用前景,同时也将为基因功能研究、药物研究提供良好的工具。但对基因组印迹、免疫排斥及干细胞的有效定向分化仍然是亟待解决的问题。     

胚胎干细胞体外分化研究进展

胚胎干细胞是来源于胚胎的、内细胞团的、具有多向分化潜能的细胞。随着胚胎干细胞,特别是分化机制研究的不断深入,胚胎干细胞分化为各种类型细胞的研究也取得了较大进展,从而为细胞移植、细胞治疗和组织工程等提供了一个新的途径。主要综述了小鼠和人胚胎干细胞向内、中、外三个胚层细胞类型分化的技术,以期为胚胎干细胞定向诱导分化的研究提供一些参考。     

蝴蝶兰克隆苗根系生长影响因素研究

通过对影响蝴蝶兰(Phalaenopsis) 克隆苗根系生长的相关因素进行试验研究,结果表明,蝴蝶兰组培苗生根培养阶段的培养基基本成分、培养基附加物、植物生长调节剂、培养时间以及培养阶段的光照条件对蝴蝶兰组培苗根系生长发育均有一定的影响.以改良Hyponex基本培养基+活性炭1 g/L+蛋白胨1 g/L+椰子汁10 %+IBA 1 mg/L,在前期1000～2000 lx、后期4000～8000 lx的光照强度下培养3个月的效果最佳,发根率可达100.00 %,平均根长3.3 cm,多根率(3条根以上的小植株所占比例)为84.0 %.     

胎鼠额叶皮质神经干细胞的分离培养与分化

目的:探索从胚胎小鼠额叶皮质分离培养神经干细胞的方法。方法:无菌条件下分离孕13～15d小鼠胚胎额叶皮质脑组织,经消化及机械吹打成单细胞后接种于含有B27、bFGF的DMEM/F12培养基,培养扩增;倒置显微镜观察比较生长状况;机械分离法传代;10%血清接种分化;免疫细胞化学方法染色鉴定神经干细胞及其子代细胞的分化方向,结果:培养的部分细胞体外分裂增殖,同时表达神经干细胞特异性抗原nestin,并向神经细胞和胶质细胞分化。结论:小鼠胚脑存在具有多分化潜能的神经干细胞,它们能在体外稳定培养、传代和分化,为细胞替代治疗提供了理想的细胞来源。