猪卵丘-卵母细胞复合体(COCs)体外培养卵丘细胞凋亡检测

为了验证猪COCs在体外成熟过程中是否存在细胞凋亡的现象及其生物学特征,筛选快速、准确的检测卵丘细胞凋亡的方法,本试验将体外培养的猪COCs采用电子显微镜(EM)技术、苏木素-伊红(HE)染色技术、Hoechst33342-PI荧光染色技术、原位末端标记(TUNEL)法检测猪卵丘细胞凋亡,并对3种定量检测方法进行了比较与分析.试验结果表明:猪COCs在体外成熟过程中存在细胞凋亡的现象,TUNEL法检测卵丘细胞凋亡灵敏度最高,与Hoechst33342-PI荧光染色法、HE染色检测法相关系数分别为0.93、0.85.在本试验中Hoechst33342-PI荧光染色法可代替TUNEL法检测卵丘细胞凋亡.     

牦牛卵丘细胞体外培养方法优化

为改善牦牛卵丘细胞的体外培养方法,牦牛发情季节从屠宰场采集卵巢收集卵丘卵母细胞复合体,进行原代分离培养和传代培养。结果显示:牦牛卵丘细胞原代培养改良后,第二代细胞生长曲线呈“S”型。接种后,经过2d的潜伏期,第3天细胞开始迅速生长,进入对数生长期,到第7天细胞开始发生接触抑制,进入生长缓慢的平台期;细胞可传至15代以上不老化,可用于建立牦牛卵丘细胞株。而常规方法培养的牦牛卵丘细胞传至第7~8代就开始老化,表明建立的牦牛卵丘细胞的体外培养方法可行、有效,更具优势。     

卵丘细胞对牛体外受精效果的影响

[目的]探索卵丘细胞对牛体外成熟卵母细胞体外受精效果的影响.[方法]试验采用体外成熟后卵母细胞脱除卵丘细胞组、部分脱除组及不脱除组.[结果]与卵丘细胞共培养时,部分脱除组的卵裂率及囊胚率(74.4％±4.1、53.7％±5.1)好于不脱除组(72.7％ ±5.1、52.4％±3.5),差异不显著(P＞0.05)、两者都好于全部脱除组(39.6％±4.5、l8.8％±4.6),差异显著(P＜0.05),且都显著优于对照组.卵丘细胞与褪黑素两者联合使用时,效果最佳.部分脱除组的卵裂率及囊胚率(79.8％±3.7、56.5％±5.1)好于不脱除组(78.2％±2.6、55.8％±4.6),差异不显著,两者都好于完全脱除组(48.3％±5.5、22.7％±4.3)及对照组,且差异显著(P＜0.05).[结论]该研究对奶牛和肉牛的生产提供了技术支持.     

卵丘细胞凋亡与增殖对牛卵母细胞体外发育的影响

 【目的】探讨卵丘-卵母细胞复合体（COCs）形态、卵丘细胞凋亡与增殖状态和卵母细胞发育能力之间的相关性。【方法】根据卵胞质均匀程度和卵丘细胞层数等形态指标,对所挑选的未成熟COCs进行分组,随后利用体外受精技术和TUNEL技术,并结合流式细胞仪,评价各组COCs的体外发育能力及其卵丘细胞凋亡和细胞周期差异。【结果】 与包被5层以上致密卵丘且卵胞质均质的COCs相比,具有2—5层轻度扩散卵丘与颗粒化卵质特征的COCs显示较好的后续胚胎发育潜力、较高的卵丘细胞凋亡程度和较低的G2-M期细胞比率。【结论】 卵丘细胞凋亡程度与未成熟卵母细胞发育潜能呈正相关;COCs形态、卵丘细胞凋亡或者G2-M期细胞比率指标可以用来指示未成熟卵母细胞的发育潜力。     

牛胚胎体外培养体系的优化

将体外受精后的牛卵母细胞随机分组进行培养,比较了胎牛血清(FBS)和发情后7 d牛血清(E 7BS)、不同培养液(CR 1+3 m g/mL BSA、SOF+3 m g/mL BSA和SOF+0.1 m g/mL PVA)、共培养体系和不同培养液体积(0.1,0.5和2.0 mL)对胚胎发育的影响,优化了牛胚胎体外培养体系,并对该体系的稳定性进行了检验。结果表明,优化后的牛胚胎培养体系为:前48 h用CR 1+3 m g/mL BSA培养液,48 h后用CR 1+体积分数10%E 7BS培养液培养120 h,培养液体积为0.5 mL,并且采用共培养,受精后颗粒细胞保留48 h。用该培养体系培养的牛胚胎发育良好,平均囊胚率为44.9%,表明该优化培养体系较稳定。     

牛体外受精胚胎无血清培养的研究

以TCM199为基础液,对常规IVM/IVF牛早期胚胎进行了无血清（1mg/ml,PVA,聚乙烯醇）和有血清（20%FCS）培养的对比实验。通过在无血清培养液中加入9种添加物,初步筛选出了在5%CO#-2、95%空气、39℃、饱和湿度培养环境下的牛体外受精胚胎无血清培养体系为：TCM199+EDTA0.1mmol/L+I5μg/ml+T5μg/ml+S5ng/ml+EGF10ng/ml+牛磺酸7mmol/L+亚牛磺酸5mmol/L+PVA1mg/ml+青霉素100iu/ml+链霉素100mg/ml。无血清培养与有血清培养囊胚率（7.1%对14.3%）、扩展囊胚率（4.3%对7.1%）,均无显著差异(P > 0.05)。实验结果还表明,外源激素（雌激素和孕酮）对胚胎发育无促进作用;有血清组与无血清组胚胎的各发育阶段（桑椹胚、囊胚、扩展囊胚）细胞核数量无明显差异（P > 0.05）。     

序贯共培养体系对小鼠体外受精胚胎发育效果的影响

采用体外分离培养的兔输卵管上皮细胞和子宫内膜细胞构建了序贯共培养体系,并与体外受精得到的受精卵进行共培养。试验结果表明,HTF液受精率显著高于T6液(P<0.05),更适用于卵母细胞的体外受精。序贯共培养体系和输卵管上皮细胞培养组2-细胞率都显著高于单独培养液组和子宫内膜细胞培养组(P<0.05),二者均可克服2-细胞阻滞。序贯共培养体系胚胎的囊胚体外发育率显著高于其他共培养组(P<0.05)。表明序贯共培养体系比单一体细胞共培养体系能更好地模拟体内环境,提高早期胚胎的体外发育率。     

不同菌剂组合处理猪场沼液试验效果评价

规模化猪场沼液的深度净化处理是养殖污水无害化处理与资源化利用的必由之路。选取4种厌氧菌剂(a、b、c、d)和2种好氧菌剂(e、f),比较研究不同菌剂组合对猪场沼液的净化效果,旨在研制适合处理猪场沼液的菌剂组合,为养殖废水资源化循环利用提供科学依据。结果表明:10个菌剂组合对猪场沼液均具有一定的净化效果,能够较好地去除沼液BOD5、氨氮、总磷、粪大肠菌群,最高去除率分别达到99.3%、98.7%、64.0%、99.9%。综合评估,菌剂组合3、4、5优于其他菌剂组合。     

白山羊COC细胞质密度对卵母细胞体外培养成熟率和体外受精率的影响

按白山羊卵丘细胞—卵母细胞复合体（ＣＯＣ）的细胞质密度的不同，将其分成Ａ、Ｂ两个级别：Ａ级ＣＯＣ细胞质特别致密；Ｂ级ＣＯＣ细胞质比较致密。将Ａ级和Ｂ级ＣＯＣ分别放入相同的环境条件下培养２４～２６小时。Ａ、Ｂ两级ＣＯＣ的卵母细胞成熟率差异极显著（ｔ＝３．１６２５，Ｐ＜００１）。表明白山羊ＣＯＣ的细胞质密度与卵母细胞体外培养成熟率呈极显著正相关。Ａ级和Ｂ级ＣＯＣ经体外成熟培养后，其成熟卵母细胞的体外受精率差异不显著。     

猪场沼液对芥菜产量和品质的影响效应

通过盆栽试验研究猪场沼液对芥菜产量和品质的影响效应,旨在为其资源化利用提供科学依据。结果表明:与对照相比,施用沼液能够显著提高芥菜根系活力,增加产量和生物量,以100%原沼液的增产效果最好,地上部产量增加21.5%,生物量增加22.1%;施用沼液具有改善芥菜品质的效果,与对照相比,50%处理后沼液可提高芥菜可溶性蛋白和可溶性糖含量,分别增加25.1%和27.1%,但维生素C含量差异不显著。因此,合理施用沼液进行农灌不仅可以减轻养殖场处理后污水的排放压力,还可以减少化肥施用量,提高叶菜品质。     

浮萍净化与资源化利用沼液初步研究

[目的]初步研究浮萍净化和资源化利用沼液的可行性。[方法]以紫背浮萍和青萍为研究对象,在不同稀释倍数的沼液中培养,研究浮萍对沼液中氮、磷和COD的净化去除能力和沼液浓度对其生长的影响。[结果]紫背浮萍在稀释10倍的沼液中、青萍在稀释15倍的沼液中生长及对氮、磷的净化效果最好。紫背浮萍在稀释20倍的沼液中、青萍在稀释15倍的沼液中生长及对COD的净化效果最好。此外,浮萍能够有效抑制藻类的生长。[结论]该研究为浮萍净化沼液同时生产鱼类饵料等实现资源化利用提供科学依据。     

水生蕹菜对沼液净化效果的研究

为研究水生经济植物对沼液净化处理的效果,本研究开展水生蕹菜对不同浓度沼液的净化试验,通过测试水生蕹菜对沼液中COD、TN、TP的去除效率及其生化指标,分析水生蕹菜的食品安全性与经济效益。试验结果表明：水生蕹菜可以在高浓度沼液中栽培成活,并对沼液具有较强的净化效果;稀释40倍沼液COD去除率最高,稀释30倍的沼液水培水生蕹菜经济效益最好,重金属指标符合绿色食品水生蔬菜(NY/T 1405—2015)标准要求。通过沼液种植水生蕹菜既能充分利用沼液中的营养物质,又能减少养猪场污染物排放,而且其食品安全性又有保障,具有良好的环境与经济效益。     

SBBR与电极-SBBR工艺处理沼液的对比试验研究

该试验对SBBR与电极-SBBR工艺处理沼液中COD、氮、磷进行对比研究试验.结果表明,在相同工况条件下,电极-SBBR工艺对沼液中COD、NH:-N及TP的去除率比SBBR工艺分别提高了4％～7％,1％～2％和4％ ～ 9％,电极-SBBR工艺对污染物的去除能力更强;推荐电极-SBBR处理沼液的最佳运行工况:运行周期为7.0h,进水→厌氧(1.0 h)→曝气(4.0h、通电)→缺氧/厌氧(2.0h、通电)→出水→闲置,对沼液中COD、NH4+-N和TP的去除率分别为80.39％、92.52％和59.36％.     

沼液对2种禾本科牧草生产性能的影响

研究表明,施用沼液与尿素的杂交狼尾草在株高、分蘖数、生长速率、产量等方面相当,但杂交狼尾草的品质得到提高;施用沼液与尿素的黑麦草的产量分别为76.17、80.04 t/hm2,施用沼液比尿素减产4.83%。利用沼液种植杂交狼尾草和黑麦草,与施用尿素相比产量差异不显著,说明在等N的情况下,沼液可以代替尿素进行牧草种植,有利于节约成本,并改善牧草生长的土壤生态环境。     

膜法沼气净化数学模型的建立与应用

通过对膜法沼气净化处理的理论研究和数学推导,建立了采用中空纤维式膜组件净化分离沼气中CO2、H2S组分的数学模型,利用MATLAB数学软件实现了求解。在此基础上,以甲烷浓缩倍数为试验指标,开展了膜法沼气净化模拟效果的正交试验,利用极差分析法和方差分析法考察了膜组件参数、操作条件等因素对沼气净化效果的影响,用以指导生产实际中膜组件的选择和膜分离过程的设计与优化。     

微生物菌剂·沼液及其复配对蔬菜品质和产量的影响

[目的]研究微生物菌剂、沼液及其复配对番茄、辣椒、黄瓜的品质和产量的影响。[方法]在各种蔬菜的不同生长时期,采用常规施肥配合追施的形式,考察蔬菜品质和产量。[结果]沼液、菌剂及其复配施用后,3种蔬菜的品质和产量均有不同程度的提高,尤以沼液和菌剂复配施肥效果最为明显。[结论]复配施肥对蔬菜种植的增效明显。