采用HPLC法测定双峰驼血浆咪达唑仑浓度

旨在建立测定双峰驼血浆咪达唑仑浓度的高效液相色谱紫外检测法(HPLC-UV),为后续的特异性探针药物法研究双峰驼CYP3A酶体内活性提供方法学支撑。首先采用乙腈沉淀血浆样品蛋白,离心后经022μm有机针孔滤膜过滤,采用色谱柱为Sigma C18柱(46 mm×150 mm,5μm),流动相为乙腈:001 mol·L-1PBS缓冲溶液=60∶40(V/V),流速为05 mL·min~(-1),柱温为30℃,检测波长为254 nm等色谱条件进行样品检测。结果表明:咪达唑仑的保留时间为1324 min,峰形良好、无杂峰干扰,并在039~25μg·mL~(-1)浓度范围内线性关系良好(r2=0999,n=7)。高、中、低3个浓度的相对回收率与绝对回收率均符合检测要求。因此,本试验建立的测定双峰驼血浆咪达唑仑浓度的HPLC紫外检测方法灵敏度高,稳定性好,分离完全,峰形良好。     

探针药物法评价氟尼辛葡甲铵对猪肝CYP450酶的影响

采用Cocktail探针药物法探讨氟尼辛葡甲铵对猪肝CYP450酶是否具有诱导或抑制作用。将12头健康猪随机均分为2组,公母各半。试验组每天肌肉注射氟尼辛葡甲铵1次（11 mg/kg）,对照组给予相同体积的生理盐水,连续给药10 d。通过HPLC检测探针药物的代谢率,来评价各组CYP450水平。结果显示,试验组的氨苯砜代谢减慢,t1/2延长;而氯唑沙宗代谢加快,t1/2缩短。这说明氟尼辛葡甲铵对猪CYP3A4具有抑制作用,而对CYP2E1存在诱导效应。     

泰妙菌素对人CYP3A4、CYP1A2、CYP2E1、CYP2D6酶活性的影响

本研究通过建立人肝微粒体体外孵育试验，考察泰妙菌素对4种CYP450亚酶的探针底物睾酮、非那西丁、氯唑沙宗、氢溴酸右美沙芬代谢的影响，以反映泰妙菌素对人CYP3A4、CYP1A2、CYP2E1、CYP2D6酶活性的作用。试验分为3组：药物试验组、阳性对照组（不含NADPH）、阴性对照组（不含CYP450抑制剂），孵育体系为100 μL，孵育试验在96孔板中进行。终止反应后使用高效液相色谱串联质谱仪（LC-MS/MS），以内标法检测96孔板中孵育液的剩余探针底物浓度。根据药物试验组与阴性对照组的探针药物代谢浓度之比，计算药物试验组的探针药物代谢率。使用Graphpad Prism 6.0软件，以药物试验组相对代谢率为纵坐标，药物浓度对数值为横坐标作图，计算试验组药物IC₅₀值。针对泰妙菌素与CYP3A4的孵育试验设置多个孵育时间点观察孵育时间对IC₅₀值的影响。试验结果显示，酮康唑对CYP3A4的IC₅₀值为0.044 μmol/L，α-萘黄酮对CYP1A2的IC₅₀值为0.030 μmol/L、4-甲基吡唑对CYP2E1的IC₅₀值为0.022 μmol/L、奎尼丁对CYP2D6的IC₅₀值为0.096 μmol/L。泰妙菌素对CYP1A2及CYP2D6的IC₅₀值均大于50 μmol/L，对CYP2E1的IC₅₀值为0.045 μmol/L，对CYP3A4的IC₅₀值为1.609 μmol/L。延长泰妙菌素与CYP3A4的孵育时间（10~50 min）后，泰妙菌素对CYP3A4的IC₅₀值由1.609 μmol/L增加至 8.657 μmol/L。本研究中4种亚酶常用抑制剂的IC₅₀值与参照值相近，表明所建立人肝微粒体体外孵育试验方法可靠。以IC₅₀值为指标显示泰妙菌素对CYP1A2和CYP2D6无抑制作用，对CYP2E1和CYP3A4存在强抑制作用，泰妙菌素可能是CYP3A4的可逆性抑制剂。     

Flunixin对猪肝微粒体细胞色素P450酶系的影响

采用cocktail探针药物法研究了氟尼辛葡甲铵对猪肝微粒体细胞色素（CY）P450酶系的作用.将12头猪随机分为2组,试验组每日肌肉注射氟尼辛葡甲铵1次,对照组给予等体积的生理盐水,连续给药10 d.通过高效液相色谱法检测探针药物的代谢率,评价各组CYP450酶的活性水平.结果显示,试验组的氨苯砜代谢减慢,消除半衰期t1/2延长;而氯唑沙宗代谢加快,t1/2缩短.说明氟尼辛葡甲铵对猪的CYP3A4具有抑制作用,而对CYP2E1存在诱导效应.     

泰妙菌素对人CYP3A4、CYP1A2、CYP2E1、CYP2D6酶活性的影响

本研究通过建立人肝微粒体体外孵育试验,考察泰妙菌素对4种CYP450亚酶的探针底物睾酮、非那西丁、氯唑沙宗、氢溴酸右美沙芬代谢的影响,以反映泰妙菌素对人CYP3A4、CYP1A2、CYP2E1、CYP2D6酶活性的作用。试验分为3组:药物试验组、阳性对照组(不含NADPH)、阴性对照组(不含CYP450抑制剂),孵育体系为100μL,孵育试验在96孔板中进行。终止反应后使用高效液相色谱串联质谱仪(LC-MS/MS),以内标法检测96孔板中孵育液的剩余探针底物浓度。根据药物试验组与阴性对照组的探针药物代谢浓度之比,计算药物试验组的探针药物代谢率。使用Graphpad Prism 6.0软件,以药物试验组相对代谢率为纵坐标,药物浓度对数值为横坐标作图,计算试验组药物IC_(50)值。针对泰妙菌素与CYP3A4的孵育试验设置多个孵育时间点观察孵育时间对IC_(50)值的影响。试验结果显示,酮康唑对CYP3A4的IC_(50)值为0.044μmol/L,α-萘黄酮对CYP1A2的IC_(50)值为0.030μmol/L、4-甲基吡唑对CYP2E1的IC_(50)值为0.022μmol/L、奎尼丁对CYP2D6的IC_(50)值为0.096μmol/L。泰妙菌素对CYP1A2及CYP2D6的IC_(50)值均大于50μmol/L,对CYP2E1的IC_(50)值为0.045μmol/L,对CYP3A4的IC_(50)值为1.609μmol/L。延长泰妙菌素与CYP3A4的孵育时间(10～50 min)后,泰妙菌素对CYP3A4的IC_(50)值由1.609μmol/L增加至8.657μmol/L。本研究中4种亚酶常用抑制剂的IC_(50)值与参照值相近,表明所建立人肝微粒体体外孵育试验方法可靠。以IC_(50)值为指标显示泰妙菌素对CYP1A2和CYP2D6无抑制作用,对CYP2E1和CYP3A4存在强抑制作用,泰妙菌素可能是CYP3A4的可逆性抑制剂。     

汤阴北艾精油对鼠CYP450酶活性和表达的影响

试验旨在研究汤阴北艾精油对CYP450酶各亚型活性和表达的影响。采用水蒸馏提取法提取北艾精油,通过GC-MS检测北艾精油成分。为研究北艾精油对CYP450酶活性的影响,将SD大鼠随机分为对照组（CON）和北艾精油组（EO）,分别灌胃0.1%吐温-80 100 μL/g和0.1%吐温-80稀释的北艾精油（5%）100 μg/g,灌胃后给予20 μg/g各探针药物,采用鸡尾酒探针法分别对给药后5、10、20、30 min及1、2、3、6、12、24、36、48 h血浆中3种探针底物的浓度进行检测,考察北艾精油对CYP1A2、CYP2E1和CYP2D6酶活性的影响;为探究北艾精油对CYP450酶基因和蛋白表达的影响,将昆明小鼠随机分为对照组和北艾精油组,分别灌胃0.1%吐温-80 100 μL/g和0.1%吐温-80稀释的北艾精油（5%）100 μg/g,连续灌胃3日,每日2次,末次给药24 h后提取总mRNA及肝微粒体,采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法（Western blotting）测定CYP1A2、CYP2E1和CYP2D6 mRNA和蛋白表达含量。结果表明：①北艾精油主要成分为Eucalyptol;3-Cyclohexen-1-ol,4-methyl-1-（1-methylethyl）-3;（+）-2-Carene,4-.alpha.-isopropenyl-2;m-Mentha-4,8-diene,（1S,3S）-（+）-;Benzoic acid,2,4,6-trimethyl-2,4,6-trimethylphenyl ester。②对血液中非那西汀（CYP1A2底物）、右美沙芬（CYP2D6底物）和氯唑沙宗（CYP2E1底物）进行药代动力学分析可知,北艾精油具有抑制CYP2D6和CYP2E1酶活性的作用,而对CYP1A2酶活性无显著作用。③实时荧光定量PCR和Western blotting测定结果表明,北艾精油可显著抑制CYP2E1和CYP2D6酶的表达。综上,北艾精油对CYP2E1和CYP2D6酶活性和表达均具有明显的抑制作用,提示艾草精油不能同时与以CYP2D6和CYP2E1为主要代谢酶的药物同食。该研究结果可为北艾精油的合理用药提供数据基础。     

连翘苷对原代大鼠肝细胞CYP3A1的影响

连翘是常用中药,具有清热解毒、消肿散结之功效,主治温热、丹毒、斑疹、疮疡肿毒、瘰疬等病症,其有效成分连翘苷具有较强的抑菌、抗病毒能力.细胞色素:P450酶(CYP450)主要存在于肝脏中,参与一系列的药物代谢,对维持机体内环境稳定有重要作用,是药理学、毒理学研究的热点.细胞色素P4503A酶(CYP3A)占CYP450总量的25%～28%.约有60%的药物经肝脏CYP3A代谢,在药物代谢中起着重要作用.     

双峰驼肝脏CYP3A亚酶活性的初步研究

CYP3A亚酶参与45%~60%常用药物的生物转化,在机体处置外源性物质的过程中发挥着重要作用。为了探讨双峰驼肝脏CYP3A亚酶活性,采用改进的钙离子沉淀法制备肝微粒悬液,并借助生物化学方法对双峰驼CYP3A亚酶活性进行了初步研究。结果表明,钙离子沉淀法制备的双峰驼肝微粒体蛋白含量为(1.541±0.264)mg/mL,CYP总酶含量为(0.412±0.063)nmol/mg,红霉素-N-脱甲基酶的活性为(1.159±0.001)nmol/(mg·min)。以上研究结果为今后借助探针药物检测双峰驼CYP3A亚酶的体外代谢活性的深入研究奠定了基础。     

细胞色素P4503A酶与双峰驼物质代谢的特性

细胞色素P4503A(CYP3A)是细胞色素P450(CYP)酶超家族在动物肝脏中最主要的功能形式,约占肝脏总CYP酶含量的30%,参与45%~60%常用药物在体内的代谢转化过程。人们对各种CYP3A酶开展较为系统的研究,包括CYP3A酶分子结构、遗传多样性、体内外活性及其影响因素等。论文从CYP3A亚家族的生物学特性、对内源性化合物和外源性化学物质代谢的意义、CYP3A基因的表达与调控、CYP3A酶的诱导与抑制及双峰驼CYP3A酶研究进展等方面加以综述。     

绿原酸对原代大鼠肝细胞CYP3A1的影响

绿原酸是杜仲、金银花等传统中药的清热解毒、抗菌消炎的主要药效成分.药理学研究证明,绿原酸具有抗菌、抗病毒、抗氧化、清除自由基、止血、降血压、降血脂及保肝利胆等作用[1-3].细胞色素P450酶(CYP450)主要存在于肝脏中.参与一系列药物的代谢,对维持机体内环境稳定有重要作用,是药理学、毒理学研究的热点.CYP3A约占CYP450总量的25%~28%,约有60%的药物经肝脏CYP3A代谢[4].在药物代谢中起着重要作用.CYP3A1是大鼠CYP3A家族最主要的亚型,它的活性高低直接影响许多药物的治疗效果和毒性反应.因此,研究药物对肝细胞CYP3A1的诱导作用对临床安全用药有重要意义.     

猪毛色遗传的研究进展

本文概述了猪的毛色类型、猪的毛色遗传模式,着重综述了猪毛色基因分子基础的研究进展,指出存在问题并就未来发展方向做了思考。     

不同样本商品蜂蜜中硒含量的测定

用硝酸和高氯酸消化蜂蜜,使硒游离出来,在微酸性环境下,硒和2,3-二氨基萘(DAN)生成有较强荧光的物质,用环己烷萃取,在激发波长378nm,荧光波长518nm处测定其荧光强度。蜂蜜中硒含量范围:0.10～0.82μg/g。表明:蜂蜜应视为天然富硒营养品。     

乳酸杆菌益生作用机制的研究进展

乳酸杆菌作为益生菌广泛用于人和动物。本文综述了乳酸杆菌改善宿主健康的机制。乳酸杆菌可通过产生抗菌物质如乳酸、过氧化氢、细菌素,或者通过竞争营养或肠道黏附位点来抑制致病菌;通过诱导黏附素的分泌或阻止细胞凋亡而增强肠道的屏障功能,从而保护肠道。文章重点讨论了乳酸杆菌表面成分（表面蛋白、脂磷壁酸和肽聚糖）与肠道受体（Ｃ型凝集素受体、Ｔｏｌｌ样受体和 Ｎｏｄ样受体）,阐述了他们结合后启动免疫调节信号,调控肠道免疫功能以发挥改善健康作用的机制。     

Comparison of four techniques of arthrocentesis of the lateral compartment of the femorotibial joint of the horse

Reasons for performing study: Clinical experiences indicate that centesis of the lateral compartment of the femorotibial joint is often unsuccessful. Objective: To determine the accuracy of 2 published and 2 unpublished techniques of centesis of the lateral compartment of the femorotibial joint. Hypothesis: It was hypothesised that a drug can be administered into the lateral compartment of the femorotibial joint via a diverticulum of this joint that surrounds the medial aspect of the long digital extensor tendon and that this technique is more accurate than described techniques of centesis of this compartment. Methods: Twenty‐four stifles of 12 horses were divided equally into 4 groups and a radiocontrast medium injected into the lateral compartment of the femorotibial joint of each group using a hypodermic needle inserted: 1) caudal to the lateral patellar ligament and proximal to the tibial plateau, 2) caudal to the long digital extensor tendon and proximal to the tibial plateau, 3) between the long digital extensor tendon and bone of the extensor groove of the tibia or 4) directly through the long digital extensor tendon until it contacted bone. Twelve veterinary students who had no experience using any of these techniques performed the injections. Accuracy of each technique was determined by examining radiographs obtained after injecting the contrast medium. Results: The most successful technique for arthrocentesis was by inserting a needle through the long digital extensor tendon. This approach was successful in all attempted cases, whilst other techniques had lower rates of success. Conclusions: The lateral compartment of the femorotibial joint can be accessed accurately by inserting a needle through the long digital extensor tendon as it lies within the extensor groove. Other techniques may not be as accurate for clinicians inexperienced in arthrocentesis of the lateral compartment of the femorotibial joint.     

商会自治的基石——商会自治规范研究

在现代法律秩序中,商会自治规范是制定法的基础和必要的补充,甚至在某些方面替代了制定法;商会自治规范主要包括商会组织规范、行为规范、惩罚规范以及争端解决规范等;其效力仅及于其内部成员;商会自治规范和制定法之间存在冲突,但也存在整合的基础。     

鸡败血支原体垂直传播模式及其阻断方法

以国际标准强毒Ｒ株人工感染非免疫产蛋鸡,定时扑杀,分别从鼻窦、眶下孔、气管、肺、气囊、卵巢和输卵管分离ＭＧ,并收集感染鸡所产蛋分离ＭＧ。结果表明,人工感染４８小时后上、下呼吸道及肺已被全面感染,９６小时气囊已被感染,１２０小时输卵管已能分离到ＭＧ,卵巢始终分离不到ＭＧ。人工感染鸡自１４４小时便能在其所产蛋中分离出ＭＧ。药物治疗能在７２小时内消除感染,油乳剂苗则需２４天后逐渐降低蛋内ＭＧ分离率,药物卵内注射、种蛋药浴、高温处理均能杀死卵内ＭＧ,但以研制的种蛋浸泡剂药浴效果为最好。     

Prevalence of diseases of the spinal cord of cats

A retrospective review of records of 205 cats with histologically confirmed disease of the spinal cord was performed to identify the prevalence of disease in this nonrandomly selected population of cats. Clinical records were reviewed, and age, duration of neurologic illness, and clinical and histopathologic findings in cats with spinal cord disease were abstracted. Disease processes were classified into 7 categories and 23 groups. The most common diseases affecting the spinal cord of cats were feline infectious peritonitis (FIP), lymphosarcoma (LSA), and neoplasia of the vertebral column secondarily affecting the spinal cord. Information on age, onset and duration of clinical signs, and lesion localization at the postmortem examination in cats belonging to the 7 categories of disease were analyzed to create a practical list of differential diagnoses. Cats were also subcategorized into 3 groups based on their age at death. FIP was the most common disease of cats younger than 2 years of age. LSA and vertebral column neoplasia were the most common diseases affecting cats between 2 and 8 years of age. Vertebral column neoplasia was the most common disease affecting cats older than 8 years of age. Results of this histopathologic study showed that FIP and LSA were the most common disease processes affecting the spinal cord of cats. However, at least 21 other groups of diseases and their relative prevalence were identified.     

两种绿头鸭肌肉营养成分分析及评价

本试验旨在研究两种绿头鸭（白羽绿头鸭和绿头鸭）肌肉营养组成和价值,为绿头鸭肉产品的开发利用提供基础数据和理论依据。选择白羽绿头鸭和绿头鸭60只（每个品种各30只,公母各半）,依照国家标准测定胸肌粗蛋白质、粗脂肪、胆固醇含量及氨基酸、脂肪酸、微量元素和维生素的组成和含量,并对胸肌进行氨基酸评价及脂肪酸营养价值评价。结果显示,白羽绿头鸭肌肉粗蛋白质含量显著低于绿头鸭（P<0.05）;两种绿头鸭肌肉中均检测到17种含量大于0.01%的氨基酸,其中白羽绿头鸭肌肉苏氨酸、组氨酸、丝氨酸和脯氨酸含量显著高于绿头鸭（P<0.05）,赖氨酸、谷氨酸和精氨酸含量显著低于绿头鸭（P<0.05）;检测到13种含量均大于0.01%的脂肪酸,其中白羽绿头鸭硬脂酸和油酸含量显著低于绿头鸭（P<0.05）;检测到9种矿物质元素（钠、镁、钾、钙、锰、铁、铜、锌和硒）,两种绿头鸭差异不显著（P>0.05）;检测到8种维生素,白羽绿头鸭肌肉维生素B₁含量显著高于绿头鸭（P<0.05）,维生素D和维生素E含量显著低于绿头鸭（P<0.05）。两种绿头鸭肌肉氨基酸比例接近世卫组织推荐的理想模式,富含人体所需的矿物质元素和维生素,具有广阔的开发利用前景。     

高效液相色谱法测定鸡肉中土霉素残留量的不确定度评定

根据JJF1059-1999《测量不确定度评定与表示》建立了高效液相色谱法测定鸡肉中土霉素残留测量的不确定度评定方法,评定过程包括建立测量程序、分析不确定度来源、对不确定度分量进行量化。将不确定度归类为两大类。随机效应导致的不确定度可以通过一系列具有统计意义的重复观测值进行A类评定;系统效应导致的不确定度通过各测量器具、设备的说明书、校准证书提供的参数进行B类评定。本方法鸡肉中土霉素残留量的相对合成标准不确定度约为3.9%。     

几个柑橘品种实生苗的抗旱性评价研究

以5个金柑属品种、枳壳、软枝酸橘及广西土柠檬实生苗为材料,进行复水成活率、旱害指数、叶片相对含水量、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）、脯氨酸等生理指标及隶属函数的综合分析,为柑橘抗性砧木品种选育提供参考。结果表明：胁迫20d复水后的成活率融安滑皮金柑和长寿金柑最高,为100%,软枝酸橘最低,为88.9%;随着干旱胁迫加剧,各品种的旱害指数呈上升趋势,长寿金柑的旱害指数最低,为0.25,软枝酸橘的旱害指数最高,为0.61;从叶片相对含水量的结果来看,长寿金柑的变化幅度最小,软枝酸橘的变化幅度最大,在第18d时分别为61.19%和37.85%;3种保护酶之间相互协同作用减轻植株受害程度,其活性变化幅度与丙二醛和脯氨酸的含量变化相似。利用隶属函数法综合分析,得出各品种的抗旱性强弱依次为长寿金柑>枳壳>融安滑皮金柑>融安金柑>山金柑>广西土柠檬>金枣>软枝酸橘。