转基因鸡制备方法的研究进展

在获得转基因哺乳动物的基础上，由于禽类(鸡)作为生物反应器本身所具有的优势．许多研究者投向制备转基因鸡的研究上。本文简要叙述了常用的制备转基因鸡的方法。其中，结合本实验室的情况，重点介绍了胚盘直接注射法。     

转基因动物制备技术

所谓转基因动物是指基因组整合有外源基因,并且能将外源基因稳定遗传给后代的一类动物。本文简要介绍了转基因动物制备技术的受精卵原核显微注射法、干细胞嵌合体法、体细胞克隆法和病毒载体法四种主要技术的原理、方法及优缺点。     

睾丸注射Mx-NA双基因制备抗病转基因鸡的研究

本研究利用精原干细胞介导法体内转染重组载体pVITRO2-Mx-NA以生产抗病转基因鸡。采用睾丸注射法将脂质体包裹的线性化质粒通过随机打点注射入公鸡睾丸,采集25、50、60、70d后试验公鸡的精液,提取基因组DNA,采用常规PCR检测外源Mx-NA联合基因的整合;转染后60d采集阳性公鸡精液人工授精母鸡,采用PCR和Western blot方法检测后代血液中外源NA-Mx联合基因的表达情况。结果表明:PCR检测证实外源Mx-NA联合基因已在精子基因组中表达,精液PCR阳性率为33.33%(2/6),且能通过体外受精在后代中检测到,后代PCR检测的阳性率为31.43%(11∕35),Western blot检测F1代阳性率为28.6%(10/35)。以上结果证明外源Mx-NA基因能稳定整合到鸡的基因组中,表明睾丸注射法是一种操作简单、有效的制备抗病转基因鸡的方法。     

转移早期囊胚期细胞制备的嵌合体鸡

用显微注射方法将尼拉商品鸡鸡胚X期细胞液注入同期海兰鸡的囊胚腔中，再经体外培养至出雏，获得尼拉--海兰嵌合体鸡，嵌合体率为5%（3/60），出雏率为15%（9/60）。另一项实验是将受体鸡胚经过600rad^60Co辐射处理后再注入供体细胞并体外培养至出雏，结果嵌合体率为14.0%(8/57），孵化率为15.8%(9/57），其中两只毛色嵌合体公鸡存活至今已经8个月。嵌合体鸡的黑色羽毛可出现在多个部位，有两只鸡的腿部和喙的角质也出现黑色斑。嵌合体鸡血液DNA具有供体鸡的特征带。本研究为进一步制备转基因鸡奠定了基础，也为鸡的发育生物学研究和遗传学研究提供了实验材料。     

转基因动物关键技术及其进展

转基因动物是指体内基因组中稳定地整合有外源性基因的动物。通过基因重组的各种方法可人为的改造动物基因组，并在动物活体水平上研究有关基因的结构和功能，是一个四维时空的研究体系，为从分子到个体多层次、多方位的研究基因提供了新的方法和思路。这种突出的优越性使转基因动物具有广泛的应用潜能，其中转基因小鼠已大量地应用于基础研究中的各个领域；转基因大动物则在应用研究中取得了显著的进展。１原核显微注射法该法由美国人Gordon发明，是最可靠，也是使用最广泛的动物转基因方法。其基本原理是：通过显微操作仪将外源基因直接…     

转基因鸡研究进展

自1966年微注射技术和1980年转基因小鼠的诞生,转基因动物的研究已由技术上的成功转向复杂的生物试验体系的研究。单个基因的功能,基因突变的效果,尤其是转录调控元件的功能等都需依靠转基因动物来研究。体外操作的基因及遗传突变只有导入动物基因组中才能研究其体内功能。同时,转基因动物在农业、生物医疗与制药业等领域具有广阔的应用前景。家禽的转基因研究晚于哺乳动物,由于其具有与哺乳动物完全不同的生殖特点,转基因研究遇到了更大阻力。     

基因打靶制备乳腺生物反应器研究进展

基因打靶技术是建立在胚胎干细胞和同源重组技术之上，可对基因组进行定点修饰的实验方法。用基因打靶技术制备乳腺生物反应器，克服了显微注射法的众多缺陷。本文简述了制备乳腺生物反应器过程中基因打靶的策略、靶细胞、打靶位点及国内外研究进展和展望等。     

转基因技术在鸡的应用

转基因技术是当前生物技术领域研究的热点之一,其科学意义和应用价值重大。有关转基因牛、羊、猪、小鼠等的研究已引起国内外普遍关注。目前,转基因鸡的研究业已成为国外研究热点,而国内研究则较少。本文主要介绍以下四个方面。1　鸡卵原始胚细胞的弹道转染自从Sanford等于1987年用高速微弹穿过细胞壁将外源基因导入植物细胞以来,弹道转染技术已广泛地应用于动物组织细胞、原核细胞、甚至于细胞器的基因转染。该技术中两大基本组成部分(粒子加速系统、粒子包装系统)已得到极大的改进。鸡胚胎所具有的一系列特点使它更适于弹道转染:1鸡胚材…     

鸡的转基因技术进展

鸡的转基因技术进展黄俊成（新疆畜牧科学院中澳绵羊研究中心乌鲁木齐８３００００）转基因鸡的研究有其独特之处，鸡既是人民生活中不可缺少的食用动物，为消费者提供肉和蛋，又由于其个体小、繁殖率高、周期短、实验维持费用低而成为重要的实验对象。鸡具有与哺乳动物不...     

转基因鸡制备方法的研究进展

在获得转基因哺乳动物的基础上,由于禽类(鸡)作为生物反应器本身所具有的优势,许多研究者投向制备转基因鸡的研究上。本文简要叙述了常用的制备转基因鸡的方法。其中,结合本实验室的情况,重点介绍了胚盘直接注射法。     

四大哺乳动物转基因技术简介

动物转基因技术是指通过遗传工程的手段对动物基因组进行人为的改造,有目的地对生物的遗传基因进行修饰,并通过相应的动物育种技术使得这些经修饰改造后的基因在世代间得以稳定遗传和表达的一种技术手段.     

转基因动物应用及现存问题探讨

利用转基因技术(transgenic technology)使外源基因与动物本身的基因整合在一起,并随细胞的分裂而增殖,最终得以表达,这样培养出的动物即称为转基因动物(transgeni canimal)。如果外来基因能稳定地遗传给后代,就会形成转基因动物系。转基因动物的研究始于20世纪80年代,Gordon等采用原核显微注射法向小鼠胚胎注射纯化了的DNA(猴肾病毒-疱疹病毒胸腺激酶基因SV4启动子克隆到PBR322),从而得到第一例转基因小鼠,     

分子育种手段之转基因技术

1显微注射法　　转基因猪的研究中最常用的技术方法是核显微注射法.其原理是在显微镜下将外源基因注入到原核期或经重构发育至原核期的受精卵细胞的胚胎原核中,注射的外源基因与胚胎基因组融合,然后进行体外培养,最后移植到受体母畜子宫内发育,这样分娩的动物体内的每一个细胞都含有新的DNA片段,此即转基因后代.     

动物转基因与核移植技术的新进展

本文就动物转基因与核移植技术进行文献回顾，原核注射是一种可靠、使用广泛的动物转基因方法，但该方法存在花费时间长、整合效率低及不能定点整合的问题。所以近年来出现了一些新的转基因方法，包括精子介导、反转录病毒介导、携带外源基因体细胞的核移植、ES细胞基因打靶技术等。这些方法中动物核移植技术贡献较大，很有前途。核移植技术解决了同源重组在大动物上的限制，可以应用于生物制药动物保种、预防遗传病、辅助生殖及治疗性克隆。     

显微注射法制备转基因鼠和转基因猪的技术特点比较

本文采用显微注射技术制作转基因鼠和转基因猪并对其进行比较,阐明了用显微注射方法制作两种转基因动物的技术原理和实验方法。对两者相似点进行了归纳和总结,同时也对两种转基因动物制作过程中的不同之处进行了比较和分析。根据两种不同的实验动物,描述了它们各自不同的实验特点,技术方法和实验要求,本文同时也在理论上和实践中对转基因动物的制作进行了探索。     

转基因小鼠的制备

近二十年来,分子生物学研究获得了长足的发展,而其核心部分基因工程技术的发展尤为突出,特别是转基因动物技术的出现,它不仅为人们研究外源基因在整体动物中的表达调控规律提供了最为有效的手段,而且还可通过改变动物的基因型,使其表现型更符合人类的需要,以培育优良品种及生产人类所需的有生物活性的蛋白质.因此,动物的基因转移这一生物技术已经广泛地应用于生命科学研究的众多领域.所谓转基因动物是指用实验手段将特定外源基因导入动物早期胚胎细胞,由此整合到染色体上,并通过生殖细胞系传递给后代的一类新动物.常见的转基因方法有DNA显微注射法、胚胎干细胞介导法、逆转录病毒转染法、精子载体法、电转移法等,其中以DNA显微注射法最为成熟,使用最广泛、最可靠,该法常用的哺乳动物是实验小鼠.本文所要介绍的就是显微注射法制备转基因鼠所涉及的关键技术和原理(一般程序如图1所示).     

转基因技术及其应用

本文对近20多年来转基因技术的研究及其应用进展情况进行了简要的概述。