植物乳杆菌ST-Ⅲ粘附肠上皮样细胞系Caco-2性质的研究

选取肠上皮细胞Caco-2为体外模型,研究动力学因素和外在环境因素对ST-Ⅲ粘附效果的影响.结果发现ST-Ⅲ对Caco-2细胞的粘附在一定浓度和时间范围内存在量效关系.当加入细菌浓度达到4x108 CFU/mL、孵育2h时,粘附趋于饱和.稳定期的ST-Ⅲ对Caco-2细胞的粘附效果最好,推测与稳定期粘附素或相关物质的合成量最多有关.在外在环境对粘附效果的影响中,pH值对于粘附作用具有显著影响(P＜0.05),在中性范围粘附性最强;随着加入甲基-α-D-甘露糖苷浓度的升高,粘附的ST-Ⅲ数目显著下降(P＜0.05),当加入量大于100μmol/L,抑制作用趋于平缓;Ca2 、Mg2 并没有参与到ST-Ⅲ对Caco-2细胞的粘附中.实验结果表明,ST-Ⅲ对Caco-2细胞的粘附是多种因素共同作用的结果,其中粘附素与受体的结合占主导地位.     

镉对体外培养鸡脾淋巴细胞膜抗氧化功能的影响

以终浓度为10μmol/L CdCl2对体外培养淋巴细胞进行染毒,分别培养12、24、36、48和72h时收集细胞,提取体外培养脾淋巴细胞膜,采用试剂盒比色的方法,分别检测了细胞膜GSH-Px、SOD的活性、膜MDA和SA含量及培养液LDH的活性,来观察镉性细胞损害时细胞膜的抗氧化功能和通透性。结果显示,随着镉作用时间的延长,淋巴细胞膜GSH-Px、SOD的活性降低,MDA生成量增加,试验组与对照组差异显著（P〈0.05）或极显著（P〈0.01）;培养液中LDH活性升高,膜SA含量降低。表明镉可使淋巴细胞膜的抗氧化功能降低,膜完整性被破坏。     

干酪乳杆菌对产肠毒素大肠杆菌粘附Caco-2细胞抑制作用的研究

为研究干酪乳杆菌(L.casei)对人结肠癌Caco-2细胞的粘附特点及抑制产肠毒素大肠杆菌K88(ETEC K88)粘附Caco-2细胞的能力,本研究将不同浓度的L.casei和ETEC K88与分化完全的Caco-2细胞共培养2 h和4 h后,采用平板计数法和革兰染色法计算每个细胞上粘附菌的个数,评价L.casei的粘附特点及其抑制ETEC K88对Caco-2细胞的粘附能力,并分析其影响因素。结果表明,L.casei与ETEC K88均可以粘附至Caco-2细胞表面,并且随菌液浓度的升高和培养时间的延长,粘附的数量显著增加(p0.05)。L.casei浓度越高,抑制ETEC K88粘附至细胞表面的能力越强,并与菌液添加顺序有关,但培养时间对其影响不显著(p0.05)。本研究为L.casei抑菌作用机制的研究提供了实验依据。     

一种新型肠粘膜保护剂——载铜蒙脱石对肠粘膜屏障功能影响的研究

以蒙脱石（MMT）为原料，通过阳离子交换反应合成载铜蒙脱石（MMT-Cu）。为探讨载铜蒙脱石对肠粘膜屏障功能的影响，采用体外培养的单层Caco-2细胞模型为研究对象，以细菌易位数量和肠绒毛损伤程度做为指标进行研究。结果表明：MMT-Cu可明显减少（P〈0．01）E．coilK88、S．choleraesuis侵入到Caco-2细胞内的数量，与对照组相比，下降了2logCFU／mL～3log CFU／mL；并能显著降低（P〈0．01）LDH的释放量。扫描电子显微镜下观察可见，加入MMT-Cu一段时间后，当E．coil K88和S．choleraesuis粘附Caco-2细胞时，微绒毛依旧排列整齐、致密，可见肠上皮细胞保持完好。结果表明，MMT-Cu对肠粘膜具有屏障作用，可作为一种消化道粘膜保护剂。     

大黄酸对伪中间葡萄球菌的抗菌活性及作用机制

伪中间葡萄球菌（Staphylococcus pseudintermedius）是犬脓皮病主要致病菌,具有多重耐药性,严重威胁犬及人类健康。本研究从脓皮病患犬中分离20株伪中间葡萄球菌,并揭示大黄酸对伪中间葡萄球菌的抗菌活性及抗菌机理。通过测定最小抑菌浓度、最低杀菌浓度、抑菌曲线和黏附抑制试验分析了大黄酸对伪中间葡萄球菌的抑菌活性;检测大黄酸对伪中间葡萄球菌细胞膜完整性、通透性,细胞活性氧（ROS）水平等,结合电镜观察细菌细胞形态和超微结构,从而探究大黄酸的抑菌机理。结果表明,大黄酸对伪中间葡萄球菌的最小抑菌浓度为12.5 μg·mL^-1,亚抑菌浓度能够显著抑制伪中间葡萄球菌生长和黏附;经大黄酸处理后,伪中间葡萄球菌细胞膜通透性改变,胞外β-半乳糖苷酶活性增加（P<0.05）;ROS测定结果显示,大黄酸处理后细菌细胞ROS水平增高3.9倍（1×MIC）和6.4倍（2×MIC）;大黄酸处理后,电镜观察伪中间葡萄球菌表面存在大量分泌物、皱缩,胞壁破裂、电子密度降低、内容物泄漏等。综上,大黄酸可通过改变细菌细胞膜通透性、破坏膜完整性,诱导细菌细胞产生大量ROS等作用机制达到抗菌目的。     

镉对体外培养鸡脾淋巴细胞膜物理特性的影响

为了探讨镉对鸡脾淋巴细胞膜物理特性的影响,以终浓度为10 μmol/L CdCl2对体外培养淋巴细胞进行染毒,培养12、24、36、48、72 h后,收集细胞上清液,提取细胞膜,分别检测乳酸脱氢酶(LDH)的活性、淋巴细胞膜偏振度与微黏度和唾液酸(SA)含量.结果显示,淋巴细胞内的LDH漏出率增加(P＜0.01),淋巴细胞膜荧光偏振度和微黏度增加(P＜0.01或P＜0.05),SA含量降低(P＜0.01).研究结果表明,镉能改变淋巴细胞膜通透性,降低淋巴细胞膜的流动性.     

隆朋麻醉对犬红细胞免疫黏附性及红细胞膜流动性的影响

本试验旨在研究隆朋麻醉对犬红细胞黏附性和膜流动性的影响。试验选用健康本地犬12只,肌肉注射隆朋3.0 mg/kg,于麻醉前（即0 h对照组）、麻醉后2、8、24、72、120、168 h动态采集5 mL外周静脉血,离心分离红细胞,制取红细胞悬液并制备试验用红细胞膜,进行C3b受体花环率和免疫复合物花环率的检测及红细胞膜流动性的检测。C3b受体花环率在麻醉后2 h出现下降趋势,但与对照组相比差异不显著（P>0.05）,注射隆朋后8 h低于对照组且差异极显著（P<0.01）,此后开始恢复,到麻醉后168 h基本恢复正常,与对照值相比差异不显著（P>0.05）。而免疫复合物花环率则呈现相反的趋势,其在注射隆朋后出现先上升后下降的趋势。免疫复合物花环率在注药后2~24 h高于对照组且差异极显著（P<0.01）,72 h基本恢复,与对照组相比差异不显著（P>0.05）。使用荧光偏振法测定红细胞膜的流动性,结果表明,注射隆朋后犬红细胞膜流动性增加,但与对照组相比差异不显著（P>0.05）。隆朋麻醉对犬红细胞免疫黏附性及膜流动性皆存在影响,但对其膜流动性的影响不显著（P>0.05）。     

钙稳态失衡在镉致鸡脑神经元线粒体损伤中的作用

为了探讨镉对鸡脑神经元线粒体损伤的机制,本试验以体外培养的鸡脑神经元为研究对象,在含终浓度为0、5、10、15μmol／LCd Cl2的DMEM培养液中培养24h后,应用MTT法测定神经元的抑制率,透射电镜观察神经元线粒体形态学变化,流式细胞仪检测神经元线粒体膜电位（△ψm）的变化,以Fura-2／AM为探针检测神经元内游离钙子浓度（[Ca^2＋]i）。结果显示：随着CdCl2浓度升高,细胞抑制率增加,细胞内[Ca^2＋]i上升,△ψm呈降低趋势,透射电镜结果显示,线粒体出现嵴模糊、断裂、消失,基质肿胀和空泡化。表明CdCl2通过升高细胞内[Ca^2＋]i,诱导通透性转变孔道开放,降低△ψm,从而造成神经元线粒体损伤。     

维生素E缺乏对雏鸡淋巴细胞膜抗氧化及膜流动性的影响

用低维生素E（VE）和添加不饱和脂肪酸的日粮饲喂雏鸡，建立VE缺乏雏鸡模型。分离全血淋巴细胞并制备细胞膜，检测淋巴细胞膜超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力及丙二醛(MDA)含量；采用荧光偏振法检测淋巴细胞膜流动性。结果表明，VE缺乏雏鸡淋巴细胞膜SOD和GSH-Px活力及膜流动性低于对照组，MDA含量高于对照组，组间差异显著或极显著 (P<0.05、P<0.01)。说明VE对维持雏鸡淋巴细胞膜功能起重要作用。     

NPY对TNF-α诱导的Caco-2细胞凋亡的影响

为了研究神经肽Y(Neuropeptide Y,NPY)对肠道上皮细胞完整性及通透性的影响,本试验采取不同浓度和不同处理时间的TNF-α诱导的Caco-2细胞凋亡为模型,研究了不同浓度NPY对TNF-α诱导的Caco-2细胞凋亡的影响。选择处于对数生长期的Caco-2细胞,将试验组分为对照组、TNF-α组、NPY组、NPY+TNF-α组。采用MTT法检测NPY、TNF-α的细胞毒作用,利用流式细胞技术检测NPY对TNF-α诱导的Caco-2细胞凋亡的影响。结果显示,10nmol/L的NPY对Caco-2无细胞毒作用;与NT组相比,30μg/L TNF-α刺激24h后显著引起Caco-2的凋亡;与TNF-α组相比,NPY显著抑制TNF-α诱导的Caco-2的凋亡。结果表明,10nmol/L的NPY对TNF-α诱导的Caco-2凋亡有保护作用。     

鲎素对嗜水气单胞菌的抑菌活性及作用机制研究

为探讨鲎素对嗜水气单胞菌的抑杀作用,采用最小抑菌浓度、AB染料、扫描电镜、流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳等方法研究鲎素对嗜水气单胞菌的抗菌活性、杀菌率、胞内紫外物质泄露、膜负电荷数、外部形态结构及胞内基因组DNA的影响。结果表明,鲎素对嗜水气单胞菌的抗菌活性较其他细菌弱;2倍最低杀菌浓度(MBC)鲎素能在短时间内迅速杀死嗜水气单胞菌并导致胞内生物大分子泄漏;扫描电镜发现1倍MBC鲎素能导致轻微的壁膜破损及一些胞内物质渗出和粘连;流式细胞仪结果表明,1倍MBC鲎素能破坏细胞膜的完整性;AB染料测定表明鲎素处理后能改变膜负电荷数;琼脂糖凝胶电泳表明,鲎素能够与嗜水气单胞菌的基因组DNA发生作用,并呈浓度依赖关系,浓度越高对细菌基因组DNA损伤越大。鲎素对嗜水气单胞菌的抑菌活性弱,只有高浓度时才能短时间内导致胞内紫外吸收物质泄露、膜负电荷数发生改变及基因组DNA损伤。     

细胞钙超载与鸡柔嫩艾美耳球虫病损伤关系

为探讨鸡柔嫩艾美耳球虫（E．tenella）宿主细胞损伤与钙超载的关系，采用组织定量检测、Von Kossa钙染色、焦锑酸钾电镜细胞化学技术对使用和未使用钙离子阻断剂的E．tenella感染鸡盲肠组织的细胞沉积钙、ATP酶、磷脂酶A2（PLA2）、游离脂肪酸和盲肠上皮细胞游离Ca^2＋的含量与分布进行了动态测定和分析。结果表明：（1）鸡患柔嫩艾美耳球虫病过程中，宿主细胞内钙和游离Ca^2＋明显增多（P〈0．01），并随盲肠损伤加重而增加；（2）在发病过程中盲肠组织Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-Mg^2＋-ATP酶、总ATP酶活性均有不同程度的下降，在感染严重期显著低于不感染对照组（P〈0．01）；（3）钙超载盲肠组织的PLA2活性和游离脂肪酸含量明显升高（P〈0．01），表明钙超载是鸡柔嫩艾美耳球虫病的一个重要损伤机制；（4）硝苯地平可以阻止Ca^2＋内流，减少宿主细胞内游离Ca^2＋，减轻宿主细胞的损伤，在本病发生的早期盲肠损伤较轻时，对鸡有一定的保护力，但随着疾病的发展，其作用下降。     

Effects of chemical ischemia on purine nucleotides,free radical generation,lipids peroxidation and intracellular calcium levels in C2C12 myotube derived from mouse myocytes

To elucidate the mechanisms of ischemia-mediated myopathy using in vitro model, changes of purine nucleotides, membrane lipid peroxidation(TBARS), intracellular calcium ([Ca2+]i)levels, generation of free radicals, and deoxyribonucleic acid (DNA) fragmentation were examined in mouse-derived C2C12 myotubes under the condition with an inhibition of glycolytic and oxidative metabolism as the ischemic condition. In purine nucleotides, intracellular adenosine triphosphate (ATP) and guanosine triphosphate (GTP) concentrations rapidly and significantly decreased after the treatment with ischemia. No remarkable differences were observed in other purine nucleotides, with the exception of inosine monophosphate (IMP) and extracellular hypoxanthine levels, both of which increased significantly during the ischemia. The lactate dehydrogenase activity in culture supernatant of C2C12 myotubes increased significantly from 2 to 4 hr after the ischemia. On the generation of free radicals, no spectrum was detected in supernatants throughout the observation period, whereas supernatant TBARS concentration increased rapidly and significantly after the ischemia. The relative intensity of [Ca2+]i significantly increased after the ischemia. On the fragmented deoxyribonucleic acid(DNA), no TUNEL positive cells was detected in C2C12 myotubes after 1 hr of the ischemia, however the positive cell percentage subsequently increased. From these results, it was suggested that the ischemic condition induced changes of membrane permeability and increase of [Ca2+]i, both of which lead to cell membrane damage, although a free radical generation was not detected. The ischemic condition also induced the release of substrate hypoxanthine for free radical generation and might initiate the apoptotic pathway in C2C12 myotubes.     

钙对渗透胁迫下大花萱草幼苗生理响应及叶肉组织超微结构的影响

以大花萱草品种‘吉星’幼苗叶片为研究对象,研究其经钙处理后在PEG(聚乙二醇6000)渗透胁迫下相对含水量、膜相对透性、抗氧化酶活性和超微结构的变化。结果表明在PEG胁迫下,‘吉星’叶片相对含水量明显降低,经钙处理下降幅度减小;膜相对透性显著增加,钙处理缓解了胁迫对膜的伤害;抗氧化酶活性在渗透胁迫下升高,钙处理后的植株SOD活性、POD活性和CAT活性都比渗透胁迫下有所升高,缺钙使植株体内SOD活性和CAT活性受到抑制,对POD活性影响不明显。超微结构显示渗透胁迫下叶绿体肿胀变形,基质片层排列方向改变,线粒体嵴和内含物变少。钙处理可缓解渗透胁迫对叶绿体和线粒体的伤害。     

Effect of cholesterol-loaded cyclodextrin treatment of bovine sperm on capacitation timing

Pre-loading bovine sperm with cholesterol prior to freezing is known to increase cryosurvival, though the timing of capacitation in these sperm has not been evaluated. The objective of this study was to determine if there is a potential delay in capacitation timing in these sperm due to the increased cholesterol content. Flow cytometric evaluation was utilized to assess viability, and stain technology to assess acrosome intactness (Propidium Iodide/FITC-PNA), intracellular calcium levels (Propidium Iodide/FLUO 3-AM) and membrane fluidity (Merocyanine 540/YO-PRO-1). Cholesterol-loaded cyclodextrin (CLC) (2 mg/mL) improved post-thaw viability to 61% from 45% in control sperm (p < .05). The addition of ionomycin (0.05 mM) induced capacitation in sperm by 1 h, resulting in increased intracellular calcium and increased acrosome reaction, and consequently viability loss by 3 h. Treatment with CLC significantly decreased membrane fluidity in sperm (p < .05). In conclusion, CLC-treated sperm required 1 h more to capacitate when compared with non-treated sperm based on percentage of live cells with high membrane disorder (p < .05). Increased cryosurvival and viability over time was observed, but longer time to capacitate may hinder fertilization capacity and/or require adjustments to timing of in vitro fertilization.     

PEG 6000胁迫下10个苜蓿品种幼苗期抗旱性比较

为比较苜蓿（Medicago sativa）幼苗抗旱性,采用5种不同水势（0、-0.3、-0.6、-0.9和-1.2 MPa）的PEG 6000溶液对10个苜蓿品种幼苗进行模拟干旱胁迫,测定了细胞膜透性,丙二醛（MDA）、脯氨酸（Pro）和类胡萝卜素（Car）含量以及超氧化物歧化酶（SOD）活性等生理生化指标。结果表明,随着干旱胁迫的加剧,苜蓿幼苗叶片细胞膜透性、MDA和Car含量总体呈上升趋势;Pro含量和SOD活性总体呈先降后升的趋势;苜蓿幼苗期的耐旱极限在-0.9 MPa水势附近;利用隶属函数分析得出10个苜蓿品种的抗旱性强弱为：德国德贝＞大富豪＞阿尔冈金＞West blend＞FGZT 106＞苜蓿王1#＞皇后 2000＞爱菲尼特＞新疆大叶＞四季旺。     

鼠李糖乳杆菌对Caco-2细胞抗氧化功能和细胞因子分泌的影响

本研究旨在探明鼠李糖乳杆菌(L rhamnosus)对Caco-2细胞抗氧化和非特异免疫功能的影响.Caco-2 细胞分别用PBS(A组)、E.coli K88(B组)和L.rhamnosus(C组)处理,以及先用L.rhamnosus预处理,再用E.coli K88处理(D组).结果表明,B组细胞上清的T-AOC浓度显著降低(P＜0.01),SOD活力显著提高(P＜0.01),C组与此相反,并且细胞裂解液中的SOD活性显著提高(P＜0.05).B组和C组不同程度地促进APRIL的分泌(P＜0.01),而抑制IL-8的产生(P＜0.01).B组也抑制IL-10的产生,但C组却显著促进其分泌(P＜0.01).与B组相比,D组APRIL显著减少(P＜0.01),但IL-8和IL-10都显著增加(P＜0.05,P＜0.01).结果提示,L.rhamnosus可提高Caco-2细胞的抗氧化能力,减轻炎症反应,具有保护作用和免疫佐剂的效果.     

不同硒水平对幼鲤生产性能和免疫功能的影响

选择体重约10.4 g的健康幼鲤960尾,随机分为8组,每组3个重复,每个重复40尾,分别饲喂添加硒(亚硒酸钠,分析纯)0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mg/kg的8种不同饵料,试验期90 d。结果表明:随着饵料中硒添加水平的增加,幼鲤的增重和成活率提高,饵料系数降低,添加硒0.4mg/kg时,幼鲤生产性能最佳(P<0.05);添加0.3～0.5 mg/kg硒,可显著提高幼鲤头肾和脾脏重及其体指数,增加血液红细胞数量,降低白细胞数量,提高血清IgM水平和攻毒后成活率、血清溶菌酶活力及血清凝集抗体效价(P<0.05),从而增强幼鲤免疫功能和对疾病的抵抗力。幼鲤体增重、饵料系数、头肾重量、脾脏重量、血清溶菌酶活力和IgM抗体水平与饵料硒添加量呈显著的二次曲线相关。根据上述指标确定的最适硒水平为0.396～0.529 mg/kg。     

橙皮苷对3种霉菌毒素处理的HepG2细胞增殖和迁移的影响

探讨橙皮苷对3种霉菌毒素处理的HepG2细胞增殖和迁移作用的影响。采用MTT、Griess、细胞划痕愈合试验分别检测细胞活力、细胞分泌NO、细胞迁移率。结果3种毒素对HepG2细胞增殖的影响随毒素浓度的增加呈现先促进后抑制的作用,低浓度DON、OTA(0.04μmol/L和0.08μmol/L),ZEN(<2μmol/L)显著提高HepG2细胞活力及促进增殖,高浓度霉菌毒素明显降低HepG2细胞活力及抑制细胞增殖。与霉菌毒素组比较,橙皮苷组HepG2细胞活力降低及增殖减弱,表示橙皮苷能缓解霉菌毒素对细胞的毒性。与空白对照组比较,霉菌毒素组HepG2分泌NO量显著降低,不同浓度及不同霉菌毒素对NO分泌没有明显影响;与霉菌毒素组比较,橙皮苷组不同浓度DON处理的细胞分泌NO差异不显著。低浓度DON毒素(0.08μmol/L^2μmol/L)处理HepG2细胞24、36、48 h后,DON毒素能极显著促进HepG2细胞迁移,随着霉菌毒素对细胞处理时间延长细胞迁移快,而高浓度DON毒素(10μmol/L、50μmol/L)对促细胞迁移影响显著低于低浓度DON。结果低浓度DON霉菌毒素促进HepG2细胞增殖及迁移,表明DON毒素对HepG2具有潜在的致癌性,橙皮苷能抑制HepG2细胞增殖及缓解霉菌毒素毒性的作用。