猪瘟病毒抗体纳米荧光检测试纸条的临床应用

为探究猪瘟病毒抗体纳米荧光检测试纸条的临床应用效果,对181份未免疫猪瘟疫苗、71份已免疫猪瘟疫苗的临床猪血清,采用本研究试纸条和北京世纪元亨公司的ELISA试剂盒分别进行抗体检测,对4头存在母源抗体的不同免疫时间仔猪血清、不同阶段的猪血清,采用本研究试纸条进行抗体检测,并对检测结果进行分析统计。结果显示,本研究试纸条与北京世纪元亨公司的ELISA试剂盒的阴性符合率为100%,阳性符合率为95.77%,经Kappa检验两者一致性良好;初生仔猪首免后,猪瘟抗体滴度有所下降,30 d后加强免疫,抗体滴度逐渐升高,试纸条检测结果与猪瘟抗体衰减变化过程呈正相关;不同阶段猪群的猪瘟抗体阳性率均为100%,抗体平均值较高,离散度较整齐,与规模化养猪场合理免疫程序相吻合。综合表明,本试纸条的临床应用效果较好,可用于实时监控猪群的猪瘟抗体变化,适用于基层规模化猪场的猪瘟抗体快速检测。     

纳米抗体在家畜传染病防治中应用的研究进展

随着社会经济水平的提高,人们对动物性食品的需求量显著扩大,对其安全性的要求也越来越严格。因此,家畜疾病的科学防控就显得尤为重要。目前,我国家畜疾病尤其是传染病的防控效果并不理想,仍需要不断开发和探索新的防控产品和防控策略。纳米抗体是最小的功能性抗原结合片段,和传统抗体相比,其具有分子量小、结构简单、稳定性高、易于基因改造、抗原特异性好、组织穿透力强等优点。纳米抗体源于骆驼科动物,作为一种新型抗体,在动物疾病防治技术中的研究和应用正逐步增加。本文重点综述纳米抗体在家畜传染病中的应用和研究进展,并结合发展趋势预测未来的研究重点。     

纳米抗体在非洲猪瘟检测中的应用

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是一种侵害猪的烈性传染病,世界动物卫生组织(OIE)规定其为必须报告的动物疫病。目前,在世界范围内仍无针对其的商品化疫苗和药物,使得综合防控面临着严峻挑战。防控非洲猪瘟疫情只能依靠准确的诊断和可靠的早期监测技术,因此,快速、准确、灵敏、方便的检测方法对于净化和预防非洲猪瘟具有重要意义。纳米抗体(Nanobody,Nb)是一种新型抗体,其结构简单、分子量小,易于改造且具有强稳定性、高特异性、高亲和力、低免疫原性、能识别隐蔽表位、组织穿透力强以及易于制备等特点,应用前景广泛,故备受关注。本文归纳总结了非洲猪瘟的检测方法和技术手段,探讨了纳米抗体在非洲猪瘟诊断中的应用现状,并对其未来发展方向做出展望。     

纳米抗体筛选和表达技术研究进展

纳米抗体(nanobody,Nb)是在骆驼血清中发现的一种新型抗体,具有相对分子质量小、稳定性高、亲和力高、组织渗透性强以及可识别抗原缝隙表位、进一步改造和表达等特点。Nb筛选技术分为噬菌体展示、酵母双杂交、mRNA展示以及高通量测序和质谱分析等4种,它们都能够快速筛选到特异性Nb。对具有高度亲和力的Nb,多种表达系统均可以实现高效表达。其中:原核表达最常用,其操作相对简单、产量大、生产成本低,但要去除表达出的重组蛋白内毒素;酵母表达可以直接收集培养基上清纯化,杂蛋白含量少,但可能存在过度糖基化问题;植物宿主可以大量表达Nb,但基因操作过程繁琐,且分离纯化Nb相对困难;哺乳动物细胞生产抗体也是较常用的方式,但生产成本较高。针对每一种筛选方法和表达系统目前没有统一的评价标准,在选择时,应以实验室条件为基础,充分了解筛选对象的结构、功能和用途,根据不同目的选用。本文对Nb结构特点、筛选及表达以及在动物疫病防治中的应用展开论述,可为相关领域研究提供技术支持。     

纳米抗体在口蹄疫防治中的研究进展

口蹄疫作为一种急性、热性和高度传染性疫病,目前尚缺乏长期有效且能完全抑制其病原的药物或疫苗。纳米抗体是一种新型基因工程抗体,具有生产成本低、与抗原亲和力高、特异性强、相对分子质量小等优点,且结构独特,因而成为对抗病毒的抗体之一,被用于某些病毒性疾病的预防及治疗。本文从纳米抗体的结构与特性、在口蹄疫诊断中的应用、在中和口蹄疫病毒中的作用以及在口蹄疫治疗中的展望等方面进行综述,探索其作为“探针”来诊断疾病的能力,以及将药物传递到机体内部,作为免疫抑制剂或治疗药物来中和病毒毒力的能力,以期为纳米抗体用于口蹄疫预防提供研发基础及创新思路。     

四川某规模化猪场病原与抗体检测及分析

运用RT-PCR与PCR方法对四川某规模化发病猪场进行高致病性蓝耳病,猪瘟,圆环2型病原检测,同时运用ELISA和正向间接血凝试验检测该场不同日龄猪群蓝耳病,猪瘟抗体。结果显示高致病性蓝耳病,圆环2型,猪瘟阳性率分别为33.3%(12/36),50%(15/30),0(0/8),而蓝耳病抗体阳性率与猪瘟抗体达到有效保护水平率分别为81.8%,79.4%。值得注意的是,在31-50日龄阶段猪群的高致病性蓝耳病,圆环2型阳性率,蓝耳病抗体阳性率与猪瘟抗体达到有效保护水平率分别为88.9%,83.3%,88.2%,52.6%。结果表明,该猪场主要发生高致病性蓝耳病与圆环2型混合感染,而高致病性蓝耳病与圆环2型在猪场的存在对猪群猪瘟免疫有负面影响。     

纳米抗体与疫病防治

骆驼体内发现的纳米抗体相比于传统抗体,具有分子量小、稳定性强、抗原结合能力强、易于在微生物表达系统中表达等优势,具有广泛的应用前景.现阶段,由病毒、细菌、寄生虫等引起的人或动物疫病种类繁多,在特定地区甚至全球范围内快速流行,严重威胁人类生命和养殖业发展.论文针对纳米抗体的结构、特性及其在疫病中的应用进展进行阐述和展望,...     

抗犬细小病毒纳米抗体的制备及其中和活性鉴定

【目的】 建立抗犬细小病毒（CPV）纳米抗体（Nb）库,从中筛选出具有中和活性的Nb。【方法】 以高免比格犬脾脏组织cDNA进行重链可变区（VH）扩增,与pBSD载体连接,构建pBSD-Nb库。结合细菌展示、流式细胞仪检测,在pBSD-Nb库中筛选高亲和力的Nb,获得阳性克隆并测序。利用Primer Premier 5.0软件设计Nb基因的上、下游引物,将阳性克隆质粒中Nb基因片段进行PCR扩增。利用pET-27b表达目的蛋白,通过变性、复性手段纯化目的蛋白,用SDS-PAGE分析纯化后的蛋白。将Nb包被96孔板,采用ELISA法检测Nb对CPV的亲和力。通过病毒微量中和试验检测Nb抑制CPV感染猫肾细胞（F81）的情况。【结果】 PCR扩增结果显示,在384 bp处可见明显条带,与预期大小相符,证明pBSD-Nb库构建成功。细菌展示后,流式细胞术检测结果显示,有9株阳性峰偏移率高的Nb,分别命名为Nb1、Nb2、Nb3、Nb4、Nb5、Nb6、Nb7、Nb8和Nb9。PCR扩增9株Nb基因片段,获得384 bp的条带。SDS-PAGE结果显示,在约14 ku处有一条带,说明成功获得纯化蛋白。ELISA检测结果表明,9株Nb中有6株Nb对CPV的亲和力较强。体外病毒中和试验检测发现,1株Nb能够中和病毒,抑制F81细胞病变,中和病毒的有效浓度为0.05 mg/mL。【结论】 本研究成功建立pBSD-Nb库,筛选出6株对CPV具有高亲和力的Nb,并成功获得1株具有中和活性的Nb,为CPV治疗性抗体制剂的开发提供了新的思路。     

高通量测序技术在兽医临床中的应用

高通量测序技术可一次同时测定几十万到几百万条核酸分子序列,在兽医临床上已被应用到畜禽疾病诊断、疾病监测、致病机理研究、耐药性分析等相关工作中.本综述结合应用实例对高通量测序技术在兽医临床的研究进展进行系统阐述,总结了高通量测序技术在兽医临床应用中的局限性和解决措施,并展望了高通量测序技术在兽医临床的应用前景.     

邻位连接技术及其在病原检测中的应用

邻位连接技术(proximity ligation assay,PLA)是近年新研发的一种蛋白质体外分析技术,该技术运用邻位连接与实时定量PCR扩增原理,通过一对可特异性识别靶蛋白的邻位探针进行双识别并连接产生可PCR扩增的检测信号,实现蛋白质的定量检测.该技术综合了抗原抗体结合的高特异性和实时定量PCR技术的高灵敏度...     

细胞因子免疫佐剂效应机制及其在兽医临床中的应用

白细胞介素、干扰素、粒巨噬细胞集落刺激因子等细胞因子作为疫苗的免疫佐剂能增强机体的细胞和体液免疫应答,从而增强疫苗的特异性免疫反应,在细菌、病毒、寄生虫及肿瘤疫苗的研究中具有重要的作用。对细胞因子免疫佐剂的效应机制及其在兽医临床中的应用进展进行阐述,为细胞因子佐剂在兽医临床上的进一步应用提供参考。     

小分子化合物单克隆抗体的制备及其在动物医学领域的应用

农药、兽药、重金属、生物毒素等残留物质的痕量检测在医学诊断、食品安全、环境监测等领域均具有重要意义,其中基于抗原-抗体特异性识别的免疫分析技术具有特异性强、灵敏度高、稳定性好、操作简便快捷等优点,但如何获得小分子化合物的特异性抗体是研制免疫分析技术的关键。作者介绍了基于杂交瘤技术制备小分子化合物单克隆抗体的方法,分析了影响杂交瘤技术制备小分子化合物单克隆抗体的因素,然后综述了小分子化合物单克隆抗体在兽药残留、药物开发、环境保护等动物医学领域的应用,最后展望了小分子化合物单克隆抗体生产和应用的发展趋势,为小分子化合物单克隆抗体的制备与应用相关研究提供指导。     

外泌体的功能及其在临床应用中的研究进展

外泌体（exosome）是通过细胞内多泡体与细胞膜融合产生的纳米级细胞外膜泡,广泛分布在血清、尿液、唾液和其他生物液体中。外泌体作为细胞间通信和遗传物质的重要转移载体,可通过受体介导的相互作用或通过各种生物活性分子（如细胞膜受体、蛋白质、mRNA和miRNA）的转移直接刺激靶细胞,从而发挥其生物学功能。文章主要综述了外泌体内含蛋白质和miRNA的功能及外泌体在临床中的应用。外泌体内蛋白质和miRNA的功能包括生理状态下诱导机体免疫、递呈抗原、参与细胞间信号传导;病理状态下改变肿瘤微环境、促进癌细胞增殖、侵袭、加快血管生成、促进癌症发展;以及某些病毒可将其组分包装、整合到外泌体中来实现细胞间传播,或劫持外泌体,实现免疫逃避。作者主要介绍了其作为肺癌、乳腺癌、胰腺癌及结直肠癌等多种癌症早期诊断的生物性标志物,以及作为稳定性高、转运效率高、靶向性强的药物载体在临床中的应用。     

麻杏石甘制剂药理作用及其在兽医临床中的应用

对麻杏石甘制剂的药理作用以及其在兽医临床中的应用进行了综述,以期为该组方进一步开发应用提供依据和参考。麻杏石甘制剂是由麻黄、杏仁、石膏、甘草四味药物组成的传统方剂。现代药理学研究表明,麻杏石甘制剂具有解热抗炎、镇咳平喘、抗菌、抗病毒、调节免疫作用。兽医临床中麻杏石甘制剂主要有散剂、汤剂、颗粒剂、注射剂等,主要应用于治疗由细菌、病毒、支原体引起的畜禽呼吸道疾病。     

磁性纳米材料在兽药残留检测应用中的研究进展

磁性纳米材料是一种具有稳定磁学性能、极小生物背景干扰以及丰富化学性能的新型功能复合型材料,与免疫技术、分子印迹技术及传感器技术等结合,开始应用于兽药残留检测中的样品前处理与检测过程,以此提高检测的灵敏度。本文主要对其中的磁固相萃取、磁性分子印迹技术、磁免疫层析技术以及磁生物传感器技术进行介绍,综述了其在兽药残留分析中的研究进展。     

牛病毒性腹泻病毒NS3蛋白纳米抗体的筛选及反应原性检测

本研究旨在获得高效特异性的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)NS3(P80)非结构蛋白的纳米抗体。用BVDV灭活疫苗免疫羊驼,测得抗体效价后分离全血中的淋巴细胞。通过噬菌体展示技术构建羊驼重链抗体可变区噬菌体展示文库。经过连续3次吸附-洗脱-扩增的生物筛淘,从中挑选出与BVDV-NS3蛋白结合的噬菌体。对经菌液PCR、琼脂糖凝胶电泳鉴定到的单域抗体(VHH)克隆进行基因测序和同源性比对。用ELISA方法验证筛选出的纳米抗体的反应原性,找到与BVDV-NS3蛋白亲和力高的纳米抗体。结果表明,获得插入率为92.8%、库容为1.84×1014 CFU/mL的噬菌体展示文库。ELISA结果和氨基酸序列分析显示,成功得到1条与BVDV-NS3蛋白具有良好反应性且与VHH同源性较高的纳米抗体序列。本研究利用大肠杆菌成功表达BVDV-NS3抗原蛋白,建立BVDV纳米抗体噬菌体展示文库,筛选到针对BVDV重要抗原蛋白相应的纳米抗体且与VHH同源性较高。试验结果为牛病毒性腹泻/黏膜病的防控、诊断、治疗及纳米抗体药物的研制提供参考。     

牛病毒性腹泻病毒NS3蛋白纳米抗体的筛选及反应原性检测

本研究旨在获得高效特异性的牛病毒性腹泻病毒（BVDV）NS3（P80）非结构蛋白的纳米抗体。用BVDV灭活疫苗免疫羊驼,测得抗体效价后分离全血中的淋巴细胞。通过噬菌体展示技术构建羊驼重链抗体可变区噬菌体展示文库。经过连续3次吸附-洗脱-扩增的生物筛淘,从中挑选出与BVDV-NS3蛋白结合的噬菌体。对经菌液PCR、琼脂糖凝胶电泳鉴定到的单域抗体（VHH）克隆进行基因测序和同源性比对。用ELISA方法验证筛选出的纳米抗体的反应原性,找到与BVDV-NS3蛋白亲和力高的纳米抗体。结果表明,获得插入率为92.8%、库容为1.84×10¹⁴ CFU/mL的噬菌体展示文库。ELISA结果和氨基酸序列分析显示,成功得到1条与BVDV-NS3蛋白具有良好反应性且与VHH同源性较高的纳米抗体序列。本研究利用大肠杆菌成功表达BVDV-NS3抗原蛋白,建立BVDV纳米抗体噬菌体展示文库,筛选到针对BVDV重要抗原蛋白相应的纳米抗体且与VHH同源性较高。试验结果为牛病毒性腹泻/黏膜病的防控、诊断、治疗及纳米抗体药物的研制提供参考。