3种去势疫苗的构建及稳定性研究

【目的】试验旨在构建不同种类的新型免疫去势DNA疫苗，分别为KISS1、神经激肽B(NKB)单表达基因疫苗和促性腺激素释放激素(GnRH)、KISS1和NKB 3个基因共表达的三表达基因疫苗，注射到动物体内后能激发免疫反应，产生相应的抗体，从而达到通过调控生殖轴来降低雄激素的目的。【方法】选取下丘脑-垂体-性腺轴(hypothalamic pituitary gonadal axis)上的GnRH及其上游调控基因KISS1和NKB作为靶标，并引入平衡致死系统代替抗生素筛选构建重组质粒，其中三表达重组质粒借助2A肽的自剪切功能使目的基因共表达。将重组质粒转染293T细胞后提取细胞RNA,验证其能否在机体内正常表达，随后将构建成功的质粒电转到减毒猪霍乱沙门菌(Salmonella Choleraesuis)C500感受态细胞中，获得重组活菌疫苗，构建的工程菌在体外连续传代50次，选取第0、2、5、10、20、30、40、50代的菌株进行稳定性研究。【结果】重组质粒pVAX-2A/KISS1-asd、pVAX-2A/S-NKB-asd和pVAX-S/GnRH-2A/S-NKB-2A/KISS...     

GnRH二聚体和GnRH并列二聚体合成肽疫苗对大鼠的免疫去势效果

为了比较GnRH二聚体和GnRH并列二聚体单次和两次免疫对雄性大鼠的免疫去势效果。将上述两种GnRH疫苗,分组免疫SD大鼠,免疫后每两周检测大鼠血清中的GnRH抗体滴度和血清睾酮水平、睾丸重量和组织结构变化。结果显示,两次免疫试验组的抗体滴度显著高于单次免疫试验组的抗体滴度(P<0.05);GnRH二聚体抗原免疫效果优于GnRH并列二聚体抗原的免疫效果,且差异极显著(P<0.01)。免疫组大鼠血清睾酮水平及睾丸重量均极显著低于空白对照组(P<0.01)。免疫去势效果显著的大鼠只数统计显示,GnRH二聚体(5/6)和GnRH并列二聚体(4/6)两次免疫均多于单次免疫(4/6和3/6)。同时,组织学观察结果可见,免疫组大鼠睾丸组织结构萎缩,曲精小管管径变窄,内部精母细胞脱落,精子变少或者没有。表明GnRH二聚体疫苗与GnRH并列二聚体疫苗均能达到去势效果,前者优于后者,两次免疫优于一次免疫。     

重组CRM197-4GnRH去势疫苗抗原分子的原核表达及免疫效果评价

通过大肠杆菌表达系统对CRM₁₉₇-4GnRH重组去势疫苗抗原进行表达,采用不同种类佐剂制备疫苗,研究其对大鼠的免疫去势作用,为获得1种免疫效果好、有效期长、生产成本低的促性腺激素释放激素(GnRH)免疫去势基因工程疫苗提供借鉴。采用白喉毒素无毒突变体(CRM₁₉₇)与4拷贝GnRH串联,将CRM₁₉₇-4GnRH基因与表达载体连接,并通过优化试验确定大肠杆菌的最优表达条件,用SDS-PAGE和Western blot鉴定目标蛋白的表达情况。将融合蛋白与不同佐剂乳化,制备成9种测试疫苗后分别免疫大鼠,测定血清中GnRH抗体滴度和睾酮浓度。结果显示,重组大肠杆菌的最优表达条件为诱导时间表达5 h,培养基为LB液体培养基,IPTG诱导浓度为0.5 mmol/L;通过SDS-PAGE和Western blot试验,表明目标融合蛋白已成功表达;动物试验结果表明,重组疫苗水包油包水佐剂组、重组疫苗油包水佐剂组、GnRH+Th抗原(辅助型T细胞抗原)表位(G1抗原)油包水佐剂组测试疫苗免疫大鼠较其他组GnRH抗体滴度显著升高、睾酮浓...     

皮蝇素A基因DNA疫苗的构建及其免疫特性研究

本研究以实验室保存的原核表达载体pET-HA为模板,PCR扩增皮蝇素A(HA)基因,将克隆基因插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中构建DNA疫苗pcDNA-HA。构建的DNA疫苗pcDNA-HA和空载体pcDNA3.1(+)体外转染小鼠胎儿成纤维细胞,间接免疫荧光试验检测细胞内目的基因的表达。将pcDNA-HA、空载体pcDNA3.1(+)和PBS免疫BALB/c小鼠后,对免疫小鼠的体液免疫水平进行了检测。结果表明,构建的DNA疫苗能在小鼠胎儿成纤维细胞中表达,能被抗HA抗体识别,可诱导小鼠产生特异性体液免疫反应,说明HA可作为牛皮蝇蛆病的候选疫苗抗原。本研究为牛皮蝇蛆病的DNA疫苗研究奠定了基础。     

减毒沙门氏菌为载体的草鱼口服生长抑素DNA疫苗的构建及其稳定性

将生长抑素(SS)和乙肝表面抗原基因(HBsAg)融合后，插入真核表达载体pcDNA3，构建成pcDNA3-SS，再转化减毒沙门氏菌(S．typhimurium,dam^-和phop^-)，构建了以减毒沙门氏菌为载体的生长抑素口服DNA疫苗ZJ111／pcDNA3-SS，并通过体外传代、灌服草鱼检验了ZJ111／pcDNA3-SS的侵袭力及体外和侵入草鱼体内过程中的德定性。对草鱼肝脏和脾脏分离菌的生化特性检验和特异性PCR鉴定表明，ZJ111／pcDNA3-SS能很好地侵入草鱼体内；对在Amp^ 、Amp^-平板上传5、10代和灌服7d后草鱼肝、脾脏分离的减毒菌抽提重组质粒进行PCR和酶切鉴定表明．减毒菌中的重组质粒在体外和侵入草鱼体内过程中具有较好的稳定性。     

GnRH免疫在肉牛去势上的应用

免疫去势技术在肉牛上的研究已有 2 0多年的历史 ,本文就最新研究资料综述了促性腺激素释放激素 (GnRH)免疫的作用机理及其在肉牛免疫去势方面的研究进展 ,并展望了该项技术在国内肉牛畜牧业发展方面的应用前景     

DNA疫苗的动物试验研究及其应用前景

介绍了DNA疫苗在动物试验研究方面的现状,如:动物免疫试验中动物模型的选择、疫苗的接种途径及其选择、免疫学效果评价、安全性评价和DNA疫苗研究存在的问题,以及DNA疫苗在控制畜禽疾病方面的应用前景和发展趋势.     

GnRH免疫去势对公鸡生长发育的研究

用GnRH抗原对10日龄、17日龄公鸡人工免疫2次与对照组相比较,实验组各日龄鸡冠的体积小于对照组。其中90日龄实验组的鸡冠体积与对照组差异显著(F.>F0.05);从31日龄到120日龄实验组的鸡体重大于对照组,其中60日龄、90日龄鸡体重实验组与对照组差异显著(F.>F0.05)。结果表明:用GnRH免疫去势公鸡可以促进其生长发育。     

DNA疫苗及其在流感病毒疫苗研究中的应用

DNA疫苗能够诱导广谱免疫反应，已被广泛应用于预防性疫苗和针对各种感染性疾病、肿瘤、自身免疫性疾病和过敏性疾病的免疫治疗的临床试验。自DNA疫苗技术出现，A型流感病毒就与其紧密地联系在一起，已被广泛应用于小鼠和其他动物模型以研究DNA疫苗的免疫作用和机理。     

GnRH类似物疫苗免疫去势效果的影响因素

利用GnRH类似物疫苗主动免疫动物机体可达到与手术去势类似的效果,同时避免了手术去势对动物机体产生的影响。抗原、佐剂、免疫次数、免疫剂量以及免疫时间都会对其免疫效果产生影响。采用GnRH类似物疫苗免疫动物通常需要有力的佐剂以及多次加强免疫来克服个体反应的差异性。     

DNA疫苗佐剂研究进展

DNA疫苗是近年来发展较为迅速的一类生物制剂,它能诱导动物机体产生持久的体液免疫和细胞免疫,其在抗病毒、细菌和寄生虫的感染方面起到了重要作用。但与传统的灭活疫苗相比,其免疫效果并不理想。为了攻克DNA疫苗免疫效力低下的难题,一些学者已经研制了多种佐剂制品,以提高DNA疫苗对动物疾病免疫保护的能力。文章对使用佐剂提高DNA疫苗免疫效力进行了综述。     

DNA疫苗的相关研究进展

DNA疫苗又称为核酸疫苗，是20世纪90年代初发展起来的一种全新疫苗，具有能够激发机体体液和细胞免疫反应，核酸疫苗因高效、持久、广谱、简便、廉价、无致病性等特点，被作为一种新型的疫苗而得到广泛的研究和应用，是近年来研究的一个热点。抗原编码基因的选择、质粒的构建、各种佐剂的应用以及疫苗接种方法和途径等因素可以提高和改变DNA疫苗的免疫效果与反应类型。DNA疫苗不仅有预防疾病的作用，同时还具有治疗疾病的作用。在不久的将来，DNA疫苗有望成为人类防治疾病的重要手段。     

DNA疫苗的相关研究进展

DNA疫苗又称为核酸疫苗,是20世纪90年代初发展起来的一种全新疫苗,具有能够激发机体体液和细胞免疫反应,核酸疫苗因高效、持久、广谱、简便、廉价、无致病性等特点,被作为一种新型的疫苗而得到广泛的研究和应用,是近年来研究的一个热点.抗原编码基因的选择、质粒的构建、各种佐剂的应用以及疫苗接种方法和途径等因素可以提高和改变DNA疫苗的免疫效果与反应类型.DNA疫苗不仅有预防疾病的作用,同时还具有治疗疾病的作用.在不久的将来,DNA疫苗有望成为人类防治疾病的重要手段.     

DNA疫苗的研究进展

DNA疫苗是在分子生物学技术基础上发展起来的第3代新型疫苗,已体现出其竞争优势和应用潜能。同传统的疫苗相比,DNA疫苗具有免疫效果好、生产成本低、临床应用方便等优点,但同样存在安全性的担忧。文章回顾了DNA疫苗的发展简史,阐述了DNA疫苗的免疫机理,分析了DNA疫苗研究现状,并对DNA疫苗的安全性提出了自己的观点与看法,旨在为DNA疫苗研究提供参考。     

核酸疫苗研究进展

核酸疫苗 (DNA疫苗 )是 2 0世纪 90年代诞生的一种新型疫苗 ,具有能够激发机体全面免疫反应、不散毒、便于储存和运输等优点。抗原递呈细胞在 DNA疫苗诱导产生的 CTL反应中起主导作用。 DNA疫苗的运输载体 (脂质体、减毒突变的胞内菌等 )、佐剂 (细胞因子等 )以及疫苗接种方法和途径等因素可以提高和改变 DNA疫苗的免疫效果与反应类型。 DNA疫苗自诞生以来 ,其安全性一直是人们关心的问题 ,也是 DNA疫苗得以日后应用于临床的关键。     

Review of DNA Vaccine for Avian Influenza

Avian influenza (AI) is a kind of avian virulent syndrome caused by avian influenza virus (AIV),which threatens animal and human public health and seriously affects the development of poultry industry in China.Vaccination has always been the most effective means to control the spread of avian influenza virus.Based on the continuous development of genetic engineering technology,a variety of new vaccines have been developed and put into use.Among them,avian influenza DNA vaccine has many advantages,such as high safety,simple preparation,easy storage and transportation.Common HA DNA vaccine,NA DNA vaccine,M DNA vaccine,NP DNA vaccine.Avian influenza DNA vaccine introduces a recombinant plasmid containing the target gene sequence into animal cells to induce a humoral and cellular immune response.In order to improve the immune effect of avian influenza DNA vaccine,researchers at home and abroad have made some achievements in enhancing the transfection efficiency and gene expression level of DNA vaccine by adding appropriate adjuvants,introducing target genes into ideal plasmid vectors and optimizing antigen sequence.Since the development of DNA vaccines,many subtypes of avian influenza DNA vaccines,including H1,H3,H5,H7 and H9 subtypes,have been gradually developed.In 2018,the H5 subtype DNA vaccine developed by Harbin Veterinary Research Institute of The Chinese Academy of Agricultural Sciences obtained the National Class Ⅰ Veterinary Medicine certificate,which is the first DNA vaccine of avian influenza to be approved in China,greatly promoting the development of DNA vaccines.This review mainly discusses the development and innovation of avian influenza DNA vaccine in terms of vector construction,immune mechanism,adjuvant and vector selection,and vaccine research and development,and briefly analyzes its application prospect,in order to provide new ideas and references for researchers to develop new avian influenza vaccine.     

禽流感DNA疫苗研究进展

禽流感（avian influenza,AI）是由禽流感病毒（AIV）引起的一种禽类烈性综合征,威胁动物和人类公共健康,严重影响中国养禽业发展,接种疫苗一直是控制禽流感病毒传播最有效的手段。基于基因工程技术的不断发展,各种新型疫苗相继研发并投入使用。其中,禽流感DNA疫苗具有安全性高、制备方法简单、易于储藏和运输等优点,受到了广泛关注。常见的禽流感疫苗有HA DNA疫苗、NA DNA疫苗、M DNA疫苗、NP DNA疫苗等。禽流感DNA疫苗是将含有目的基因序列的重组质粒导入动物细胞,诱导动物机体产生体液和细胞免疫应答。为了提高禽流感DNA疫苗的免疫效果,国内外学者通过添加合适的佐剂、将目的基因导入理想质粒载体、对抗原序列优化,增强DNA疫苗的转染效率和基因表达水平,取得了一定的研究成果。自DNA疫苗开始研发至今,H1、H3、H5、H7、H9等众多亚型禽流感DNA疫苗逐步研发。2018年,由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所研制的禽流感H5亚型DNA疫苗获得国家一类新兽药证书,是中国首个获得批准的禽流感DNA疫苗,极大地推动了DNA疫苗的发展。文章主要论述了禽流感DNA疫苗的载体构建、免疫机制、佐剂和载体选择以及疫苗研发等方面的研究进展和创新,并对其应用前景进行简要分析,旨在为科研工作者研制新型禽流感疫苗提供新的思路和参考。     

禽流感病毒H5HA、H7HA基因共表达核酸疫苗质粒的构建及其在体外的表达

为了获得既能对 H5亚型又能对 H7亚型 AIV攻击产生保护的核酸疫苗 ,设计构建了含有双顺反子的真核表达载体 ,用限制性内切酶从 PCIH7HA载体上切得 AIV H7HA基因的c DNA,此 c DNA含有 CMV启动子和 Poly(A)终止序列 ,使用 DNA 连接酶引入载体PCIH5HA中 ,最后获得双顺反子真核表达载体PCI-H5HA-H7HA,其中 H5HA和 H7HA基因都带有自己的 CMV启动子和 Poly(A)终止序列。选用 2 93 -T真核表达细胞系 ,用脂质体转染法导入细胞进行瞬时表达 ,转染后 48h用荧光标记的兔抗鸡 Ig G进行间接免疫荧光试验。结果表明双顺反子真核表达载体构建正确 ,且在真核表达细胞系中 H5HA和 H7HA基因都能获得表达 ,且 H5HA 基因的表达效果优于H7HA。这为进一步的动物免疫试验和疫苗效价检测试验奠定了基础