兔抗褪黑激素高免血清的制备、提取和纯化

运用Mannich法,将褪黑激素(MLT)与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备成完全抗原.经UV-260紫外分光光度仪测定,MLT与BSA的连接比为121.5只新西兰大耳兔用此抗原免疫6次后,ELISA和RIA抗体效价分别平均114000和1150000.抗血清经Na2SO4沉淀和Sephedex-G-200层析后收集纯化抗体,用721分光光度计测其蛋白浓度.通过5-羟色胺阻断试验证明抗体特异性较高.     

兔化高免褪黑激素抗血清的制备

运用Ｍａｎｎｉｃｈ反应,将褪黑激素与ＢＳＡ联结起来制备完全抗原,用ＵＶ－２６０紫外仪测定了ＭＬＴ与ＢＳＡ的联结比为１２：１,用此抗原免疫新西兰大耳兔５只,经过６次免疫后,发现抗体效价平均１：１００００（ＥＬＩＳＡ）,将抗血清经Ｎａ２ＳＯ４沉淀,Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ－２００过柱层析、收集纯化抗体,用分光光度计７２１ 春蛋白浓度,经５－羟色胺等阻断试验发现抗体特异性较高。     

兔抗孕酮抗体的制备及纯化

以１１α－羟孕酮半琥珀酸酯为原料，采用混合酸酐法合成了１１α－羟孕酮半琥珀酰－人血清白蛋白结合物。两批合成的产率分别为８７．３８％和６４．８８％；孕酮与人血清白蛋白的分子结合比率为１８：１和２３：１，达到Ｓｉｇｍａ同类产品标准。     

兔抗猪瘟高免血清的制备及纯度鉴定

利用猪瘟弱毒疫苗(C株)免疫新西兰大白兔,制备抗猪瘟高免血清IgG。运用间接ELISA方法测血清效价,再经饱和硫酸铵盐析沉淀法提纯血清IgG,SDS-PAGE电泳法鉴定提纯IgG的纯度,结合无菌检查试验和仔猪接种试验,检测血清IgG的安全性。结果表明,获得了蛋白含量为6 mg/mL,效价为1∶6400的高效价、安全性高、成本低的抗猪瘟高免血清IgG。为猪瘟病毒的检测和猪瘟的防制提供了理想的生物制剂。     

抗猪瘟高免卵黄抗体的制备

猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。近年来,在养猪生产中尽管普遍对猪群用猪瘟兔化弱毒苗进行免疫接种,但免疫失败的现象时有发生,给养猪业造成了很大的经济损失。为了找到一个治疗猪瘟的经济有效方法,我们进行了抗猪瘟高免卵黄的制备。1材料与方法1·1试验动物186日龄罗曼商品蛋鸡,杜洛克仔猪均由郑州牧业工程高等专科学校微生物学教研室提供。1·2疫苗及毒株猪瘟兔化弱毒苗购自农业部郑州生物药品厂;石门系猪瘟强毒购自中国兽药监察所。1·3免疫方法1·3·1基础免疫对罗曼商品蛋鸡进行免疫,第一次每羽肌注猪瘟兔化…     

兔抗小麦钙调素抗血清的制备及其纯化

为制备兔抗小麦钙调素抗血清并对其进行纯化,首先从小麦叶片中提取钙调素蛋白,对其初步纯化后免疫家兔,制备得到兔抗小麦钙调素抗血清,再以大肠杆菌中诱导表达的拟南芥钙调素蛋白作为抗原,利用PVDF膜结合法纯化得到了兔抗小麦钙调素抗血清,并通过Western Blotting对所纯化的多克隆抗体进行了鉴定。     

油菜籽饼中单宁的提取,分离与纯化制备

油菜籽饼中单宁的提取、纯化工艺参数的研究表明：油菜籽单宁最佳提取条件为７０％的丙酮水溶液,温度３０℃,粒度为０．３ｍｍ以下,单宁回收率为８３％,此条件下饼粕中硫代葡萄糖苷只残留６．４７μｍｏｌ／ｇ,植酸几乎没有被提取。     

抗重金属镉多克隆抗体的制备及纯化

镉是生物毒性最强的重金属之一,动物性食品中的重金属镉残留给人类健康带来了巨大危害,建立高效、快速的重金属镉免疫学检测技术对保障食品安全和人类健康具有十分重要的意义。本研究运用双功能螯合剂DTPA、镉离子标准溶液和牛血清白蛋白(BSA)制备重金属镉的完全抗原Cd-DTPA-BSA,以其为免疫抗原加入弗氏佐剂乳化后免疫家兔,制备抗重金属镉多克隆抗体,并运用凝胶柱层析法纯化抗重金属镉多克隆抗体,SDS-PAGE结果显示多克隆抗体的纯化效果较好,Dot-ELISA测定纯化后多克隆抗体的效价达到1∶1 600。该研究为动物性食品中重金属铅ELISA检测方法的建立奠定了基础。     

貉抗犬瘟热病毒高免血清的制备

在貉饲养场打皮前期,采用犬瘟热弱毒苗对貉群进行3次加强免疫。打皮时同时采血和分离血清,使用双抗和过滤方法对血清进行除菌处理后冷冻保存备用。以中和试验来检测血清中的犬瘟热病毒中和抗体效价,并对所制备的高免血清进行无菌检验和安全试验。结果表明:加强免疫组血清中犬瘟热中和抗体效价1∶102.53±0.16,而对照组的抗体效价为1∶101.61±0.12;无菌检验未发现血清有任何细菌,安全试验显示皮下注射的幼貉没有任何明显的不良反应。     

抗兔病毒性出血症高免血清的制备和使用

1984年春,在我省苏南部分市、县暴发了一种侵袭2月龄以上兔的烈性传染病——兔病毒性出血症。至同年12月该病已波及江苏全省。上海、浙江、山东、安徽、河南等省、市的部分市、县也发现此病。该病传播迅速,流行面广,病程短,发病率和死亡率均很高,试用多种药物治疗均不奏效,用高免血清在病初有较好的治疗效果,在疫区作被动免疫,具有保护作用,可减少损失。本文就高免血清的制备和使用效果作一介绍。     

兔抗甲胺磷多克隆抗体的制备

采用水溶性碳化二亚胺法（EDC），将MTR与牛血清蛋白（BSA）、人血清蛋白（HSA）和鸡卵清蛋白（OVA）共价偶联，分别合成免疫抗原MTP－BSA、MTP－HSA和包被抗原甲胺磷－鸡卵清蛋白（MTP－OVA），用合成的免疫抗原对新西兰大白兔进行免疫，制得抗血清经鉴定确证为兔抗MTP多克隆抗体（polyclonal antibody,PAB)，效价分别为1：15000和1：12000。     

罗非鱼和斑点叉尾鮰血清IgM的纯化及兔抗血清的制备

为深入了解罗非鱼和斑点叉尾鮰免疫机理及建立相关免疫检测方法,采用rProtein A Sepharose亲和层析一步法纯化罗非鱼和斑点叉尾鮰血清免疫球蛋白（IgM）,并制备其兔抗血清.结果表明,rProtein A Sepharose亲和层析法可以较好地分离获得高纯度的罗非鱼和斑点叉尾鮰血清IgM,通过SDS-PAGE电泳检测,发现罗非鱼血清IgM重链和轻链分子量分别为88.0、21.0 kDa,斑点叉尾鮰血清IgM重链分子量为101.0 kDa.以纯化的罗非鱼和斑点叉尾鮰血清IgM为抗原,制备其兔抗血清,间接ELISA检测其效价分别为1∶32000和1∶16000;Western blotting检测分析,发现罗非鱼和斑点叉尾鮰的兔抗血清分别在88.0和101.0 kDa附近各出现1条反应条带,说明其兔抗血清具有免疫活性.     

几种不同免疫程序制备抗弓形虫高免血清的比较

用弓形虫血清抗体阴性的健康家兔,以4种不同的免疫程序皮下接种弓形虫速殖子裂解抗原制备高免血清.研究结果表明,先以完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂分别进行一免和二免,然后再以抗原进行三免或四免制备高免血清,其抗体效价高达1:4096(IHA),与每次都使用抗原的传统免疫程序制备的抗体效价相当,但所用抗原剂量减半,该法优于另外2种免疫程序.     

水稻Rubisco活化酶的提取和纯化

利用３５％饱和硫酸铵分部沉淀、ＤＥＡＥ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ、ＭｏｎｏＱ柱层析等步骤从水稻叶片纯化了Ｒｕｂｉｓｃｏ活化酶,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳显示水稻Ｒｕｂｉｓｃｏ活化酶由４５ｋＤ和ｋＤ两个亚基组成,ＡＴＰ是该酶活化Ｒｕｂｉｓｃｏ的必需成分。     

辣根过氧化物酶的分离制备和纯化

从辣根块茎分离和纯化了辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）,纯化程度包括匀浆、加热、硫酸铵分级沉淀、丙酮分级沉淀和ＣＭ－２３阴离子交换层析。纯化的ＨＲＰ的Ｋ４值为２．５×１０＾５,ＲＺ值值３．００,酶的比活４０６Ｕ／ｍｇ蛋白。它的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示一条带,酶亚基分子量为４０ＫＤ,等电聚焦电泳呈现三条带,酶不舔生染色呈现多条带,表明有同工酶存在。对酶的分离纯化作了一些改进,如加氨水保持ＰＨ值,加入５ｍｍｏｌ／     

高粱根质膜的纯化和膜蛋白的提取

利用高粱根作为实验材料,用不连续蔗糖密度梯度和Dextran T-500/PEG-3350两相法探讨了纯化质膜的过程,以及去垢剂对K+运输蛋白的增溶效率.结果表明,由6 mL 40%(W/W),4 mL 34%(W/W)和4 mL 22%(W/W)蔗糖组成的不连续蔗糖梯度,经80 000×g离心3 h后,在34%～40%界面处富含质膜.在质膜K+运输蛋白的增溶效果上,6.5 mmol/L CHAPS最为理想.     

党参总皂苷的提取·分离和纯化

[目的]优化党参皂苷的提取工艺,并对皂苷进行纯化。[方法]用正交试验优化党参皂苷的提取工艺,通过考察大孔树脂类型、洗脱液pH值对党参皂苷纯度的影响,优化皂苷的纯化方法。[结果]党参皂苷提取的最佳工艺为：提取时间为36 h,提取温度为45℃,料液比为16∶;D101大孔吸附树脂为党参皂苷吸附的最佳树脂,洗脱液pH值为9左右时,得到的皂苷浓度最高。[结论]该试验得到了较高纯度的党参皂苷,为获得高纯度党参皂苷提供了保证。     

水稻Rubisco活化酶的提取和纯化

利用３５％饱和硫酸铵分部沉淀、ＤＥＡＥ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ和ＭｏｎｏＱ柱层析等步骤从水稻叶片纯化了 Ｒｕｂｉｓｃｏ活化酶。 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳显示水稻Ｒｕｂｉｓｃｏ活化酶由４５ｋＤ和４１ ｋＤ两个亚基组成。 ＡＴＰ是该 酶活化Ｒｕｂｉｓｃｏ的必需成份。     

大豆皂苷的提取和纯化工艺研究

[目的]寻求大豆豆渣提取皂苷的最佳提取工艺,以期能提高豆渣的利用率。[方法]以豆渣为原料,采用乙醇浸提、石油醚萃取、正丁醇萃取、乙酸乙酯沉淀法提取大豆皂苷,D101型大孔吸附树脂分离纯化大豆皂苷,并用香草醛-高氯酸法比色法检测大豆皂苷纯度。通过正交试验研究从大豆豆渣中提取皂苷的主要影响因素。[结果]大豆豆渣提取皂苷的最佳提取条件为乙醇浓度70%,提取时间12h,固液比1∶5,在此条件下皂苷时产率最高,由香草醛-高氯酸比色法检测提取的大豆皂苷纯度为19.3%。粗制大豆皂苷经大孔吸附树脂纯化后得到精制大豆皂苷的纯度为61.2%。[结论]该试验研究的工艺技术上可行,原料价廉适合于工业化生产。