猪流行性腹泻病毒的特性研究

猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)引起的一种严重的病毒性传染病。对于大多数的病毒性腹泻疾病来说,防治措施一般选择疫苗免疫。近年来,有关猪流行性腹泻病毒疫苗的研究已经取得了一定的进展,包括灭活疫苗、弱毒疫苗、转基因植物疫苗、乳酸杆菌疫苗、亚单位疫苗和联合疫苗等。实验参照2010年版《中华人民共和国兽药典》第3部的要求对该病毒的特性进行了系统研究与记录,为PEDV HLJBX株可作为弱毒疫苗候选株的研究提供了进一步的参考资料。     

猪流行性腹泻病毒野毒株及弱毒疫苗株RT-PCR鉴别检测方法的建立及应用

为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)野毒株及弱毒疫苗株快速鉴别检测方法,根据Gen Bank中公布的PEDV野毒株及弱毒疫苗株的ORF3基因序列,在缺失区的两端设计合成1对特异性扩增引物,用以特异性的扩增PEDV ORF3基因片段,根据目的片段大小判断PEDV的毒株类型;通过退火温度等反应条件优化,建立了区分PEDV野毒株和弱毒疫苗株的RT-PCR鉴别检测方法。结果显示:所建立的RT-PCR鉴别检测方法能特异性区分PEDV野毒株和弱毒疫苗株;PEDV野毒株扩增出234 bp目的片段,PEDV弱毒疫苗株扩增出185 bp目的片段;与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、A群猪轮状病毒(PRo VA)、猪嵴病毒(PKV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪乙型脑炎病毒(JEV)及猪细小病毒(PPV)均无交叉反应;敏感性试验显示,该方法能检测到病毒滴度为1.3×10~3TCID_(50)/mL。利用该方法对采集自广西部分地区93份临床腹泻样品进行检测,临床腹泻样品中PEDV野毒株阳性率为61.29%(57/93),弱毒株阳性率为5.38%(5/93)。结果表明:该RT-PCR鉴别检测方法特异性强、灵敏度高、操作简便,能快速、准确地区分PEDV自然感染野毒株和弱毒疫苗毒株,为猪流行性腹泻的快速诊断及病原分子鉴别检测研究提供了可供借鉴的技术手段。     

基于SYBR Ⅰ实时荧光定量PCR对猪流行性腹泻病毒野毒和疫苗弱毒鉴别诊断方法的建立

本研究参考GenBank中登录的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)野毒株和弱毒疫苗株(CV777弱毒疫苗株)在高度保守ORF3基因核苷酸序列的差异,设计一对特异性荧光定量引物,分别建立基于SYBRⅠ实时荧光定量RT-PCR方法。结合熔解曲线分析可见,其野毒株和弱毒疫苗株熔解温度(Tm)分别为(81.84±0.17)℃和(83.16±0.14)℃,扩增产物的熔解曲线分析均只出现1个单特异峰,对传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪细小病毒、猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒均检测不到荧光信号。结合熔解曲线可直接鉴别猪群中PEDV的感染情况和程度,可对免疫猪群PEDV野毒感染和疫苗免疫做出快速准确的鉴别诊断,尤其是对PEDV弱毒疫苗免疫后仍爆发PEDV野毒感染的研究更有临床意义。     

首个以抗感染为评价标准的圆环病毒疫苗:诸元妥

<正>目前圆环病毒疫苗有全病毒灭活疫苗、亚单位疫苗、弱毒疫苗和基因工程疫苗(核酸疫苗、重组疫苗、活载体疫苗)。主流产品是全病毒灭活疫苗和亚单位疫苗。截至2013年5月,我国共有5种猪圆环病毒灭活疫苗研制成功,分别为猪圆环病毒2型灭活疫苗(SH株)、猪圆环病毒2型灭活疫苗(LG株)、猪圆环病毒2型灭活疫苗     

猪细小病毒N株弱毒苗田间试验

猪细小病毒感染普遍流行于世界各地猪群,为了有效防制该病,我们研制出能预防该病感染的猪细小病毒N株弱毒疫苗(PPV-N株)[1].该弱毒苗具有良好的免疫原性和安全性[2].我们按要求制备三批PPV-N株弱毒疫苗对三个规模化猪场的后备母猪进行田间试验,现将结果报告如下.     

猪五大病毒性疫病免疫预防(一)

<正>1猪口蹄疫猪口蹄疫以防控伊O型为主,但要警惕A型。口蹄疫防控存在病毒血清型多、传播途径多、免疫原性弱等难点。猪口蹄疫仍以免疫预防为主。1.1猪口蹄疫疫苗口蹄疫疫苗有全病毒灭活疫苗和合成肽疫苗。全病毒灭活疫苗是用双毒株生产,有O/MYA98/BY/2010株+O/XJ/10-11株,O/GX/09-7株+O/XJ/10-11株,旧猪毒单毒株灭     

高致病性猪蓝耳病TJM-F92株弱毒疫苗对猪瘟、口蹄疫免疫抗体水平的影响

为探讨高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗是否干扰猪瘟、口蹄疫疫苗的免疫效果,优化猪瘟、高致病性猪蓝耳病、口蹄疫免疫程序,科学指导动物疫病防控工作,笔者于2014年10月8日—11月12日在河南省正阳县某种猪场进行了高致病性猪蓝耳病TJM-F92株弱毒疫苗对猪瘟、口蹄疫免疫抗体水平的影响试验。结果表明:高致病性猪蓝耳病(TJM-F92株)弱毒疫苗对猪瘟兔化弱毒疫苗(ST传代细胞苗)、猪口蹄疫O型灭活疫苗(OZK/93株)免疫抗体水平无显著影响,三种疫苗单独或联合免疫效果都较确实。     

PK15、ST细胞增殖猪传染性胃肠炎病毒的比较研究

<正>猪传染性胃肠炎(TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)引起的一种以严重腹泻、呕吐和脱水为临床特征的高度接触性传染病[1-2]。该病是我国及世界各养猪国家仔猪早期死亡的重要传染病之一,尤其是在冬季和早春寒冷季节常呈地方性爆发流行,给养猪业造成极大危害[3-4]。为了预防TGE的发生与流行,国外已先后培育出多株猪传染性胃肠炎病毒弱毒疫苗株,并研制成TGEV弱毒疫苗,用于TGE的免疫     

不同猪繁殖与呼吸综合征减毒活疫苗在猪体内的动态学及临床免疫效果比较

为了比较国内不同猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)弱毒疫苗的安全性和有效性,本研究将17头PRRSV抗原和抗体双阴性的28日龄仔猪随机分为4组,TJM-F92株弱毒疫苗组,JXA1-R株弱毒疫苗组,经典株弱毒疫苗(VR2332来源)组和注射生理盐水对照组。免疫后7,14,21,28d分别采血,ELISA抗体检测试剂盒检测PRRSV抗体,结果从免疫后14d起PRRSV抗体开始转阳,但各试验组的抗体水平无明显差异。对免疫后14d所采血样进行病毒分离,TJM-F92株免疫组未分离到PRRSV疫苗毒,JXA1-R株免疫组2头猪分离到PRRSV疫苗毒,经典株免疫组只1头猪分离到PRRSV疫苗毒。免疫后28d,所有猪接种PRRSV强毒株TJ株进行攻毒试验,观察各组猪的体温、临床症状;攻毒后21d,所有猪安乐死,剖检观察肺部病理变化。结果显示,TJM-F92株和JXA1-R株免疫组均未出现临床发病猪,经典株免疫组2头猪出现临床发病,对照组全部临床发病,死亡1头。经典株免疫组临床发病猪出现典型PRRSV感染肺部病理变化,而TJM-F92株和JXA1-R株免疫组均未发现典型PRRSV感染肺部病理变化。本研究证实TJM-F92株和JXA1-R株对高致病性PRRSV的免疫效果优于经典株弱毒疫苗,TJM-F92疫苗株与JXA1-R疫苗株相比,疫苗毒在体内带毒时间更短,安全性更高。     

猪细小病毒N株弱毒疫苗免疫产生期最小免疫量和安全性测定

猪细小病毒N株弱毒疫苗（PPVN株）是广西兽医研究所蒋玉雯等从广西初产母猪所产死胎脏器中分离出的一株PPV自然弱毒株,经生物学与免疫学特性研究证明该弱毒株具有良好的免疫原性和安全性,可作为弱毒疫苗用于预防猪细小病毒感染的发生。本研究对该弱毒疫苗进行了最小免疫量、免疫产生期和安全性测定,现将结果报告为下：     

为抵御猪瘟病毒接种C株疫苗对猪免疫细胞和细胞因子的影响

经典猪瘟病毒C株弱毒疫苗是目前最安全、最有效的减毒疫苗之一。然而,对C株疫苗接种后宿主的免疫应答却知之甚少。采集接种猪的血样,评价接种C株疫苗后免疫细胞数量、特异性CSFV(经典猪瘟病毒)抗体水平及相关细胞因子水平。结果表明,C株疫苗可诱导Th2细胞产生特异性抗体。疫苗病毒的复制水平很低。C株疫苗的复制与TLRs的表达密切相关,TLRs会启动先天免疫系统的过表达去清除疫苗毒,同时免疫系统表达的ILs诱导B细胞分化产生特异性抗体。     

猪细小病毒四川毒株免疫原性研究

猪细小病毒(PPV)是引起猪繁殖障碍的主要病原之一,对养猪业可造成巨大经济损失。目前用于防制猪细小病毒感染的疫苗主要有弱毒苗和灭活苗两种。邬捷等(1985)在四川发病猪场病料中分得PPV3株,即PPVSR1,SR2,SR3株,并应用PPVSR1毒株研制了灭活苗,应用取得了较为理想的效果。?..     

猪细小病毒病弱毒冻干疫苗预防猪细小病毒病

猪细小病毒 (ＰＰＶ)是引起母猪繁殖障碍的重要病因之一 ,可引起母猪流产、死胎、木乃伊胎、弱仔等 ,对养猪业造成严重的经济损失。 1 987年 ,我所研制成功的猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗 ,对于预防ＰＰＶ引起的母猪繁殖障碍起到了积极的作用 ,并于 1 994年荣获了国家级新兽药证书。当前养猪业正趋向规模化、集约化 ,根据综合防疫的需要 ,除了有猪细小病毒病灭活疫苗外 ,还十分需要有猪细小病毒病弱毒冻干疫苗 ,供用户选择应用 ,为此 ,我们又致力于弱毒疫苗的研究工作。将ＰＰＶ接种易感细胞 ,并连续传代 ,成功培育了一株安全性和免疫原性良…     

猪口蹄疫病毒与猪肠道病毒重组株C731-54作为疫苗的可能性研究

以前的研究表明,在猪口蹄疫病毒与猪肠道病毒的所有重组株国,C731毒株的毒力较弱,且免疫原性最好,具有作为弱毒疫苗株的基本条件。为此,本试验对由C731继续克隆而获得的C731-54毒株进行了进一步的鉴定。结果表明,此毒株安全有效,遗传性状稳定,是一株较好的抗猪口蹄疫病毒感染的弱毒疫苗候选株。1 材料与方法1.1 C731-54毒株及FMDV强毒 C731毒株经终点稀释法克隆5次,获得了C731-54重组株,再经扩增后作为种毒。种毒接种于IBRS-2细胞株,收毒后病毒     

我国研制成功猪伪狂犬病疫苗

我国第一株动物病毒基因工程疫苗正式在四川农业大学动物生物技术中心内宣告问世,由该校教授郭万柱主持研制的“猪伪狂犬病(基因缺失)活疫苗(SA215株)”正式获得国家新兽药证书(2003新兽药字37号)。该疫苗的诞生开创了我国动物病毒基因工程疫苗实用化的先河。猪伪狂犬病是目前许多国家重点防治的猪病之一,欧共体要求进口猪必须注射过基因缺失疫苗,以前我国预防该病主要采用进口疫苗。川农大郭万柱教授研制成功的疫苗较之国外产品更先进。该疫苗在四川省几个猪场投入使用后,已为受试地区畜牧业生产创造了数亿元直接经济效益。背景资料伪狂犬…     

猪伪狂犬病病毒HNX株在免疫猪群中水平传播能力的研究

为研究猪伪狂犬病病毒(PRV)HNX株水平传播的能力及PRV活疫苗的保护效力,本研究通过以颈部肌肉接种PRV HNX株(2 m L 107 TCID50)的未免疫猪作为病毒的传染源,同居感染未免疫猪和Bartha-K61株活疫苗免疫猪,通过检测抗PRV的g B和g E蛋白抗体、中和抗体及干扰素水平等评估疫苗保护力,并利用荧光定量PCR方法检测同居感染猪排毒情况。结果显示Bartha-K61株活疫苗能够快速诱导免疫猪产生抗g B蛋白的抗体,但疫苗诱导产生的交叉保护中和抗体水平较低。同居感染期间,免疫猪和未免疫猪均出现典型的临床症状,体温明显升高。荧光定量PCR方法结果显示,疫苗免疫能够减少免疫猪排毒,但不能阻止排毒,也不能阻止野毒感染。本研究结果表明Bartha-K61株活疫苗阻止PRV HNX株水平传播的效力是有限的,有必要更换疫苗病毒株。同居感染期间,每组感染猪均表现敏感,表明PRV HNX株病毒具有较强的水平传播能力。     

猪伪狂犬疫苗研究进展

目前,疫苗接种是预防、控制甚至消灭猪伪狂犬病主要的措施之一。国内外已研制出猪伪狂犬病的灭活疫苗、弱毒疫苗、基因缺失弱毒疫苗已经相对成熟,而病毒载体重组疫苗、核酸疫苗、亚单位疫苗尚处于实验室研究阶段。本文对猪伪狂犬疫苗做简要综述。一、灭活疫苗灭活疫苗是将猪伪狂犬病毒接种于鸡胚或细胞,当病毒滴度达到要求时收获病毒,灭活后加入免疫     

新型反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)鉴别猪瘟强毒和弱毒疫苗方法的建立

对GenBank中登录的25株猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株基因组全序列进行比较分析,在其高度保守区设计1对通用引物,扩增片段为609bp,并在该对引物扩增区域内设计针对疫苗弱毒的特异引物,扩增片段为237bp,建立一种能够区分猪瘟病毒强毒和疫苗弱毒的敏感、特异、重复性好的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)鉴别诊断方法。该方法能将我国大陆地区流行的不同基因亚群的猪瘟病毒强毒与疫苗弱毒完全区分开来,且不与牛病毒性腹泻病毒及其他猪源病毒发生非特异反应。应用本试验建立的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)方法可以及早对猪瘟作出准确诊断,并可将强毒感染猪迅速从弱毒疫苗免疫猪群中筛选出来,减少了未感染免疫猪被误杀的可能性。     

猪流行性腹泻病毒野毒株/疫苗株RT-PCR鉴别诊断方法的建立

开放阅读框3(Open reading frame 3,ORF3)是猪流行性腹泻病毒(PEDV)基因组中的惟一辅助基因。前期研究表明,PEDV疫苗株的ORF3在245²93位缺失49个核苷酸。在ORF3缺失区域两端设计合成引物建立反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)可以对PEDV野毒株和疫苗株进行鉴别诊断,野毒株扩增产物为319 bp,疫苗株扩增产物为270 bp。用该鉴别诊断方法对猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒和猪繁殖和呼吸综合征病毒的cDNA进行扩增均无特异性条带,说明该方法特异性强。现地病料的检测结果表明,该鉴别诊断方法能够区分PEDV野毒和疫苗株,而且可以排除其他病毒的影响,有助于减少免疫猪被淘汰的可能,降低经济损失。     

我国研制成功猪伪狂犬病疫苗

由四川农业大学教授郭万柱主持研制的“猪伪狂犬病”(基因缺失)活疫苗(SA215株)正式获国家新兽药证书。该疫苗的问世,开创了我国动物病毒基因工程疫苗实用化的先河。