世界首例内源性基因敲除猪诞生

本刊辑:据科学时报2011年5月6日报道,中科院广州生物医药与健康研究院研究员赖良学研究团队与美国密歇根大学心血管研究中心陈育庆团队合作,首次将锌指核酸酶基因打靶技术应用于猪内源性基因敲除研究,成功敲除了猪内源性PPARγ基因。这项研究在世界上首次建立了PPARγ基因敲除猪模型,对糖尿病和心血管并发症的研究有重要应用价值。研究成果2011年4月19日在线发表于国际著名期刊Cell Research上。     

世界首例内源性基因敲除猪诞生

我国科学家首次将锌指核酸酶基因打靶技术应用于猪内源性基因敲除研究,成功敲除了猪内源性PPARγ基因。近日,从中科院广州生物医药与健康研究院获悉,该院研究员赖良学研究团队与美国密歇根大学心血管研究中心陈育庆团队合作,首次将锌指核酸酶基因打靶技术应用于猪内源性基因敲除研究,成功敲除了猪内源性PPARγ基因。     

世界首例基因敲除猪模型诞生

中国科学院广州生物医药与健康研究院近日发布消息称,研究人员通过将锌指核酸酶技术应用于猪体细胞的基因敲除,并结合克隆技术,成功获得了2头PPARY基因敲除猪。该研究在世界上首次建立了内源性基因敲除猪模型,对糖尿病和心血管病并发症的研究有重要应用价值。     

世界首例基因敲除猪模型诞生

中国科学院广州生物医药与健康研究院近日发布消息称,研究人员通过将锌指核酸酶技术应用于猪体细胞的基因敲除,并结合克隆技术,成功获得了2头PPARY基因敲除猪。该研究在世界上首次建立了内源性基因敲除猪模型,对糖尿病和心血管病并发症的研究有重要应用价值。     

世界首例ROSA26定点基因敲入猪模型诞生

近日,中科院广州生物医药与健康院研究员赖良学与美国密西根大学教授王忠合作．获得了世界首例ROSA26定点基因敲入猪模型,利用该模型．研究人员可以将任意基因通过重组酶介导的基因交换插入到ROSA26位点。实现目的基因在大动物所有组织中的无差异表达。     

世界首例ROSA26基因敲入猪模型诞生

正近日,中科院广州生物医药与健康院研究员赖良学与美国密西根大学教授王忠合作,获得了世界首例ROSA26定点基因敲入猪模型。据称,该研究成功地实现了猪重组酶介导的基因交换,从而解决了一直困扰转基因猪研究领域效率低下、表型不确定的问题。转基因猪在农业新品种培育和生物医药研究中具有非常重要的应用价值。长期以来,由于缺乏猪胚胎干细胞,转基因猪的制备主要依赖体细胞基因     

世界首例ROSA26基因敲入猪模型诞生

中国兽药信息网按转基因猪在农业新品种培育和生物医药研究中具有非常重要的应用价值。长期以来,由于缺乏猪胚胎干细胞,转基因猪的制备主要依赖体细胞基因修饰和体细胞核移植技术。而目前,对体细胞的基因修饰主要依赖将外源基因随机插入猪基因组的方法,导致外源基因在猪基因组中的整合位点和拷贝数不可控,     

世界首例ROSA26定点基因敲入猪模型诞生

正近日,中科院广州生物医药与健康院研究员赖良学与美国密西根大学教授王忠合作,获得了世界首例ROSA26定点基因敲入猪模型。利用该模型,研究人员可以将任意基因通过重组酶介导的基因交换插入到ROSA26位点,实现目的基因在大动物所有组织中的无差异表达。与此同时,重组酶介导的基因交换无需药物筛选即可获得,因此获得的转基因猪不携带     

猪MSTN基因敲除载体的构建及细胞筛选

构建猪肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因的打靶载体并获得敲除MSTN基因的猪胎儿成纤维细胞.以Puro为正筛选基因,白喉毒素-A(DT-A)为负筛选基因.将同源长臂和同源短臂分别插入Puro基因的两侧.同源长短臂分别为4 294 bp和1 015 bp,定点敲除MSTN基因的部分内含子2和部分外显子3.采用FugeneHD 转染法将打靶载体转入37 d的猪胎儿成纤维细胞中,转染后的细胞采用嘌呤霉素筛选.结果显示,成功构建了对猪MSTN基因部分区域进行敲除的打靶载体,共得到48个具有药物抗性的细胞克隆,经PCR检测,获得2个正确同源重组的细胞克隆.     

PPARγ基因调控猪脂肪沉积研究进展

PPARγ是调控细胞功能和基因转录的一个重要基因,是脂肪细胞基因表达和胰岛素细胞间信号传递的主要调节者,在脂肪细胞分化和机体能量、葡萄糖和脂肪代谢调控中起着重要作用。PPARγ不仅是脂肪组织发育的中心调控剂,而且在转录水平上调控多种参与脂肪酸转运和代谢相关的基因。因此,揭示PPARγ基因的表达规律和分子作用机制,可以为研究脂肪在猪体内沉积过程提供重要的理论基础。本文将就近年来关于PPARγ基因调控猪脂肪代谢的分子机制进行综述。     

C／EBPβ基因与PPARγ基因在胎猪脂肪组织和原代培养的脂肪细胞中的表达

研究采用实时定量RT-PCR方法对发育到30,60,90日龄的胎猪脂肪组织中C/EBPB与PPARγ基因的表达情况进行检测,并且对2个基因在原代培养的脂肪细胞中的表达情况进行检测.结果显示:在30,60日龄胎猪的脂肪组织中并没有检测到C/EBPB基因的表达,在90日龄胎猪的脂肪组织检测到其低水平表达;PPARγ基因在30日龄胎猪的脂肪组织中已经表达,并且在60,90日龄胎猪的脂肪组织中仍然持续表达.在原代培养的前脂肪细胞中,2个基因均表达;诱导后C/EBPB基因的表达量在24小时达到高峰,48小时和72小时时表达量显著回落;诱导后PPARγ基因的表达量明显升高,24小时达到高峰,之后随着培养时间的延长表达量逐渐降低.     

影响猪肌内脂肪含量的几个基因研究现状

猪肉肌内脂肪是决定肉质的一个重要指标，主要由遗传因素控制，利用DNA标记进行标记辅助选择(MAS)来改良猪肌内脂肪含量应是行之有效的方法。基于此，本文简要介绍了影响猪肌内脂肪含量的主基因、候选基因及PPARγ基因的当前研究状况，及其与猪肌内脂肪含量的关系，旨在为猪肌内脂肪的改良提供参考。     

MLKL基因敲除对猪伪狂犬病病毒复制的影响

【目的】构建混合谱系激酶结构域样(mixed lineage kinase domain-like, MLKL)基因敲除的PK-15细胞株(PK-15 MLKL-KO),研究敲除MLKL基因对猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)复制的影响。【方法】根据MLKL序列设计特异性编辑位点,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建MLKL-sgRNA编辑载体,转染至PK-15细胞,经嘌呤霉素药物筛选获得多克隆细胞系,通过有限稀释法获得PK-15 MLKL-KO单克隆细胞株。通过靶基因组PCR、测序和Western blotting验证MLKL基因在PK-15细胞上的敲除水平;采用Reed-Muench法检测病毒增殖水平;采用PI染色和荧光显微镜观察细胞坏死情况。【结果】试验成功构建MLKL-sgRNA载体,筛选出1株MLKL基因缺失647 bp的PK-15细胞株,Western blotting未检测到MLKL蛋白的表达。与PK-15细胞相比,PK-15 MLKL-KO细胞极显著或显著提高了PRV GD-WH(感染后36 h除外)和PRV Bartha-K61的病...     

世界首例“数字化猪数据集”在重庆诞生

近日在重庆市荣昌县召开的“第二届中国畜牧科技论坛”传出消息，由重庆市畜牧科学研究院、第三军医大学、重庆工学院三家单位协作完成的“数字化猪数据集”在重庆诞生，这是世界着套猪的数字可视化数据集，具有我国完全自主知识产权。     

副猪嗜血杆菌Flp-FRT双基因敲除方法的建立与优化

本研究旨在利用Flp-FRT位点特异性重组系统建立副猪嗜血杆菌(Glaesserella p arasuis)的无抗性标记基因敲除方法,为G.parasuis的毒力因子、致病机制和基因工程疫苗研究提供有力的遗传操作工具.首先利用λ噬菌体cI857/PRM/PR基因表达调控系统调控Flp重组酶的表达,实现抗性突变体中抗性...     

南京研制“转基因敲除猪”

本刊辑：据《扬子晚报》2012年3月9日报道,不久的将来,猪的器官有望移植到人身上,以挽救病人的生命。去年3月,南京医科大学代谢疾病研究中心主任赵子健和副主任戴一凡两位教授曾宣布,他们正在研制可以作为人类器官供体的＂转基因敲除猪＂。     

内源性调控对猪采食量的影响

采食量是猪营养的第一制约因素。本文就影响猪采食量调节的因素以及当前内源性调控采食量的一些初步研究作一简要介绍。     

PPAR-γ在八眉猪不同组织中的表达差异

以八眉猪为试验材料,提取其内脏脂肪、皮下脂肪、肌肉、肾脏、肝脏、心脏、肺脏和脾脏总RNA和总蛋白质,设计合成PPAR-γ1和PPAR-γ2基因的引物,以猪β-actin基因为内参,用半定量（Semi-Quantitative,SQ）RT-PCR检测PPAR-γ1和PPAR-γ2 mRNA在以上各组织中的表达;用免疫印迹技术（Western Blot）检测以上各组织中PPAR-γ1和PPAR-γ2蛋白的表达。结果显示,PPAR-γ1 mRNA及蛋白在以上各组织均表达,在内脏脂肪和皮下脂肪组织中表达水平显著高于其他组织,在肺脏中表达水平最低;PPAR-γ2 mRNA和蛋白质高表达于内脏脂肪、皮下脂肪、脾脏和心脏,而在肺脏、肾脏、肝脏、肌肉中表达水平很低。结果提示,PPAR-γ在不同组织的表达差异,可能与其在不同组织中的功能有关。     

一株内源性猪细小病毒的分离与鉴定

本研究从不明病毒污染的ＰＫ１５细胞培养物中分离到了一株猪细小病毒,从形态学、血清学、分子生物学几个方面对其进行了鉴定,同时克隆了该毒株ＶＰ２基因,并测定了其核苷酸序列。将该毒株命名为ＳＹ－９９株。