草鱼出血病鱼主要器官组织的超薄切片观察及感染力的比较

草鱼出血病是一种严重的病毒性疾病,它会引起草鱼大批死亡。已有报告指出,在病鱼肾组织的超薄切片中观察到病毒粒子的存在,并认为肾脏是草鱼出血病病毒侵袭是严重的器官。在制备草鱼出血病组织疫苗时仅取病鱼的肝、脾、肾和肌肉组织,肠道组织往往弃之不用。为了进一步确定病     

草鱼出血病的研究进展及免疫防治

1 草鱼出血病的流行病学 1.1 草鱼出血病的发现 1980年发现病毒颗粒并确认为草鱼出血病病原,1991年国际病毒分类委员会将其命名为草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV).GCRV是中国分离鉴定的第一株鱼类病毒,是水生呼肠孤病毒属中致病力最强的毒株,不仅能感染草鱼,而且还能感染青鱼、麦穗...     

草鱼呼肠孤病毒减毒的研究

草鱼呼肠孤病毒GCHV－892野毒株在PSF细胞中连续传代时，于培养液中加入一定浓度的桉液，传至19代已达减毒目的。继代至29代，其减毒效果保持稳定；传至27代后不再加入桉液，传代至37代，其减毒效果仍保持稳定不变。致弱病毒对草鱼的安全性好，免疫原性强。用该弱毒株制备的弱毒疫苗免疫草鱼后，草鱼的成活率和免疫保护率均达100％。因而作者认为桉液是草鱼呼肠孤病毒的一种良好减毒剂。经桉液减毒的GCHAV－892是一株可应用于生产上制备弱毒疫苗的良好弱毒株。     

用特异化饵料免疫预防草鱼出血病

草鱼出血病是呼肠孤病毒引起的病毒性疾病，严重影响着草鱼的成活率。 70年代以来，国内对病毒性出血病的防治进行了免疫研究，获得比较成功的是注射法和浸泡法。生产实践表明：注射接种虽有较好效果，但操作不方便，费工费时，还易损伤鱼体，尤其对大规模的鱼种生产更难于应用，在生产中推广有一定的难度；浸泡法免疫效果不理想，而且疫苗用量大，成本较高。因此，研究探索适合养殖鱼类特点的更有效、方便、经济的疫苗接种途径已成为预防草鱼出血病迫切需要解决的课题。我们用草鱼病毒性出血病细胞疫苗处理的特异化饵料，在草鱼苗开口期投…     

基因治疗在水生动物疾病防治中的应用与展望

水产养殖过程中水生动物病病情较复杂，一旦发病很难控制，特别是病毒性疾病，人们尚未找到理想的治疗方法，所以做好防疫工作是非常重要的。今年，由中国水产科学研究院珠江水产研究所研制的草鱼出血病活疫苗（GCHV-892株），获得农业部颁发的新兽药证书，获准上市，它标志着国内首个草鱼出血病活疫苗成功问世，预示着草鱼出血病活疫苗研究与应用进入了实质性的产业化阶段，将为我国水产疫苗的研制和生产提供开放性的技术平台，也为今后的基因治疗提供了更好的发展契机。     

葡萄球菌A蛋白协同凝集试验快速检测草鱼出血病病毒

本文报道葡萄球菌 A蛋白协同凝集(SPA COA)快速检测草鱼出血病病毒的方法以及对提纯病毒、染毒细胞内病毒和病鱼组织检测的初步结果。并对该方法进行了特异性和敏感性考核以及凝集物的电镜观察。该方法快速、特异、设备简单,适合基层单位检测草鱼出血病病毒,并有可能作为草鱼出血病疫苗质量鉴定的指标之一。     

草鱼出血病细胞培养弱毒疫苗的制备及其免疫效果的研究

草鱼出血病是一种病毒性疾病，而免疫防治是该病最有效的防治方法之一，因此疫苗研制对该病的防治意义重大。多年来鱼用疫苗制品为组织灭活疫苗，但它要在发病季节从自然界收集材料，因而几乎不可能大批量生产，往往冬末春初放养草鱼种期间因缺乏疫苗而错过了预防免疫时机。采用离体细胞培养法制备疫苗就能克服上述缺点。     

我国养殖水生动物的病毒病

水产动物由病毒感染而引起的疾病，称为水产动物病毒病。 我国已报导的水产动物病毒病有草鱼出血病、青鱼出血病、传染性胰脏坏死病、传染性造血器官坏死病、鲤痘疮病、淋巴囊肿病、三角帆蚌痘病以及对虾肝胰腺细小病毒病等等。 草鱼是我国主要养殖鱼类之一，有着悠久的养殖历史，而草鱼出血病是鱼种培育阶段一种危害极大的病毒性疾病，致使草鱼的养殖受到严重影响。经过多年的研究，现在对草鱼出血病已有了系统而深入的认识。其病原为呼肠弧轮状病毒属（Ｒｅｃｒｏｔａｖｉｒｕｓ），草鱼出血病病毒（Ｇｒａｓｓ ｃａｒｐ Ｈｅｍｏｒｒｈａ…     

市场与信息

草鱼土法免疫在生产实践中发现，用病鱼内脏加工成疫苗，用于防治草鱼细菌性烂鳃病、肠炎病和赤皮病，可使健康鱼产生免疫力，达到防病的目的。其方法如下。制备组织浆取患有典型细菌性烂鳃病、肠炎病或赤皮病的草鱼的肝、脾、肾、血液等组织材料，称重后加上5倍生理盐水捣碎，再用4层纱布过滤，即制备成组织浆。将制备好的组织浆倒入干净的玻璃瓶中，在62～65℃温度范围内恒温保持2小时后，取出晾凉，加入1％的福尔马林药液即成土法疫苗。此疫苗在负4℃冰箱中密封保存，存期可达3个月。　　免疫注射方法取土疫苗若干，加生理盐水1倍稀释摇…     

草鱼吻端组织细胞株ZC—7901培养草鱼出血病病毒的研究初报

<正> 草鱼出血病是我国淡水渔业中危害最严重的鱼病之一。国内鱼病工作者从七十年代初开始对该病进行研究,已证实该病的病原是病毒。利用可长期离体传代培养和生物学特性稳定而均一的鱼类细胞株培养病毒,是鱼类病毒学研究的重要手段,将有助于对病原和防治技术作深入的研究。我们于1979年培养成功草鱼吻端组织细胞株ZC—7901(以下简称ZC—7901)。经试验,该株细胞对草鱼出血病病毒具有敏感性。本文报道ZC—7901株细胞培养草鱼出血病病毒的初步结果。     

两株草鱼呼肠孤病毒江西株的分离与鉴定

对从江西省南昌县莲塘镇的患病草鱼鱼种池塘采集到草鱼出血病疑似病样材料分离出的两株病毒株进行了鉴定。结果显示:用除菌过滤后的患病鱼肝脏、脾脏、肾脏组织浆滤液腹腔注射感染8～10 cm健康草鱼鱼种,5 d后试验鱼发病,可复制出自然发病症状,死亡率达50%以上,对照组未有死亡。用病样滤液接种草鱼肾细胞系(CIK),可产生细胞病变效应(CPE),病毒的TCID50分别为10-8.3/0.1 mL和10-8.0/0.1 mL。理化特性研究结果显示:氯仿、乙醚处理组病毒的感染力和对照组相比变化不显著。病毒基因组RT-PCR反应可扩增出目的片段,序列测定与分析结果表明,其与GenBank中GCRV(登录号为AF403392,AF239175)相应序列的同源性达99%以上。     

草鱼出血病病毒保存与人工感染

草鱼是一种优质淡水鱼类，它具有生长快，产量高，经济效益大的优点．但是草鱼极易患病，难养，成活率低，尤以草鱼出血病危害最大。草鱼出血病病原，属呼肠弧病毒。至今未有特效药物防治。据报导近年来采用土法疫苗进行人工免疫，已取得较好的效果。为解决草鱼出血病工厂化生产所需要的毒种，于1981年7月-10月，1982年8月--10月和1983年8月在草鱼出血病发病季节，     

草鱼出血病细胞培养弱毒疫苗的研究——疫苗的最小免疫量，免疫期和保存期

草鱼是我国传统的优质养殖鱼类。它肉质鲜嫩,群众喜食,养殖面积广。但其鱼种阶段易患出血病,致使成活率低。草鱼出血病是病毒性疾病,免疫预防是目前最有效的防治方法。有关细胞培养弱毒疫苗的制备技术,安全性和免疫原性均已有报道。在此基础上我们对弱毒疫苗的最小免疫量,     

草鱼呼肠孤病毒JX-0902株的分离和鉴定

收集江西南昌地区患典型草鱼出血病的病鱼组织,进行超薄切片电镜观察,结果显示,在脾、肾样品中发现大量病毒颗粒,病毒无囊膜,近球形,直径约70 nm,形态与已报道的草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)相似。取病鱼肌肉、内脏研磨,组织液经离心、过滤除菌后进行鱼体人工感染试验和细胞感染实验,结果发现,人工感染试验鱼出现死亡,且具有典型出血症状;组织滤液感染草鱼肾细胞系(CIK)细胞后,盲传6代未观察到典型细胞病变效应,但感染细胞固定后经超薄切片电镜观察,细胞质内有大量病毒存在,与病鱼组织切片观察到的病毒形态一致。SDS-PAGE结果进一步揭示,新分离病毒株(暂命名JX-0902)基因组由11条dsRNA组成,呈现水生呼肠孤病毒基因组典型特征,但基因组带型与GCRV 873株存在差异,而与HZ08株接近。根据GenBank上已提交的草鱼呼肠孤病毒S6序列(GQ896337)设计特异引物,以JX-0902株的cDNA作为模板,可扩增出特异性条带。基于S6序列的聚类分析结果显示,JX-0902与GCRV HZ08株、GD108株S6同源性高达98%、99%,该分离株应为草鱼呼肠孤病毒。     

采用特异化饵料投喂草鱼对呼肠孤病毒免疫试验

草鱼出血病是由呼肠孤病毒引起的。对此病的预防采取注射、浸泡疫苗的方法都能起到良好的免疫效果以及使用ＰＨＡ等佐剂也有一定的免疫抗病的效果。注射疫苗是先前生产中绝大多数采用的免疫方法 ,但对小苗就很难 ,并且此法工作量很大。免疫的数量范围就受到很大的限制。采用浸泡疫苗或ＰＨＡ的方法有一定的效果但 3个月后攻毒死亡率高达 70 %。因此 ,研究探索更有效、方便、实用的疫苗接种途径就成为草鱼生产上迫切需要解决的课题。我们在草鱼苗开口阶段采用特异化饵料进行接种疫苗对草鱼出血病的免疫获得了很强的免疫保护力。1　材料与方法…     

给草鱼注射疫苗应注意的问题

当前正是草鱼疫苗注射免疫的季节,为了能有效地预防草鱼“四病”(即烂鳃病、赤皮病、肠炎、出血病)和防止草鱼细菌性暴发病的发生和蔓延,提高养殖成活率,确保免疫效果,养殖户在进行草鱼疫苗注射的过程中必须掌握如下技术要点:疫苗的保存及疫苗的稀释方法注射用的草鱼多联疫苗,应保存在温度为2～8℃的冰箱中,尽量使其不冻结,否则会影响其免疫效果。使用疫苗的保存期应不超过1年,且要求没有霉变,要随配随用,当日稀释当日用。疫苗稀释的比例按使用说明书。稀释疫苗所用的水,必须是灭菌的生理盐水,若用5%葡萄糖注射液稀释效果更好,稀释过程应在…     

草鱼呼肠孤病毒HZ08株FQ-PCR检测方法的建立及应用

草鱼出血病是危害中国淡水养殖最为重要的病害之一,其病原为草鱼呼肠孤病毒(grass carp hemorrhagevirus,GCRV),其中,HZ08株是当前引起草鱼出血病的主要流行毒株。为建立一种快速、灵敏、特异的草鱼呼肠孤病毒主要流行株检测方法,本研究利用草鱼呼肠孤病毒HZ08株S7基因保守区,设计了一对能特异性扩增154 bp片段的引物和TaqMan探针,用含有S7基因全长的重组质粒PAVX1-S7作为标准品,构建质粒拷贝数与CT值的标准曲线,并对该方法的特异性、可重复性、敏感度进行评价。结果显示:标准曲线在6.0×1010～6.0拷贝数之间有很好的线性关系(r=0.999);实时荧光定量PCR最少可检测到6个阳性质粒,有较高的敏感性;试验内及试验间变异系数分别为0.82%与0.41%～0.52%,重复性强;对水生动物其他病毒均无扩增反应,具有很好的特异性。应用该方法对采集的32份草鱼出血病样品进行检测,其中28份为阳性,而以常规RT-PCR检测同样的样品,仅23份为阳性。本研究建立的草鱼呼肠孤病毒流行株实时荧光定量PCR检测方法在特异性、灵敏度、重复性方面具有较好的测试结果,在GCRV的快速检测和病毒初步定量中应用前景乐观。     

自制草鱼出血病灭活疫苗应用效果报告

1983年，我们首次在我省对草鱼注射出血病灭活疫苗，促使草鱼机体产生抗体，增强对细菌性烂鳃、赤皮、肠炎等“三病”抗病力，达到提高草鱼养殖成活率、增加养鱼经济效益的目的。试验所使用的疫苗是由中国科学院水生生物研究所鱼病研究室提供的。翌年，我们应用采自本省邵武市鱼种场毒种材料，自制草鱼出血病灭活疫苗1万毫升，     

草鱼呼肠孤病毒AH528株全基因组特征及进化分析

草鱼出血病是由草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)引起的严重危害1~2龄草鱼的一种传染性疾病。本研究从安徽合肥地区患典型草鱼出血病的病鱼组织中分离到1株新的GCRV致病株,暂命名为GCRV-AH528。鱼体人工感染实验结果显示,实验鱼出现典型的出血病症状:体背发黑,鳍基部、腹部、口腔、鳃丝、肠道充血发红。全基因组特征分析显示,GCRV-AH528由11个双链RNA节段组成,节段大小在1027~3925 bp之间,AT平均含量为50.2%,GC平均含量为49.8%。与其他GCRVⅡ型毒株相比,L1节段在701~702位置缺少3个核苷酸(TAT),少编码1个酪氨基;M4节段出现突变,含2个开放阅读框,编码2个非结构蛋白NS9和NS69。所有节段两端均含有6 bp保守的末端核苷酸序列5'-GUAAU/CU…UU/GCAUC-3';另除L1、M6节段外,其余9个节段均在编码区两侧发现5~9 bp的颠倒互补序列。GCRV-AH528与其他呼肠孤病毒核苷酸平均相似度在37.1%~98.1%之间;编码蛋白平均相似度在24.3%~98.3%之间。基于VP1蛋白的聚类分析结果显示,该病毒属于水生呼肠孤病毒属,在氨基酸水平上与典型株GCRV-873株的进化关系较远。本研究结果表明,该毒株为一株新的草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型致病株。     

应用Dot_ELISA技术检测草鱼出血病病毒的研究

报道了斑点免疫吸附ＥＬＩＳＡ（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）快速检测草鱼出血病病毒（ＧＣＨＶ）的方法以及对提纯病毒、染毒细胞内病毒和病鱼组织的检测结果，并对该方法的灵敏度与ＳＰＡ－ＣｏＡ和常规ＥＬＩＳＡ法进行了系统的比较。结果表明，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检出ＧＣＨＶ的最低含量为３ｐｇ，该灵敏度比ＳＰＡ－ＣｏＡ和常规ＥＬＩＳＡ法分别提高１０倍和２０倍，而且快速易行，是目前检测ＧＣＨＶ最为有效的方法，并可在草鱼出血病临床诊断和病毒疫苗质量鉴定等方面得到应用。