柔嫩艾美耳球虫在鸡胚盲肠上皮细胞中体外培养营养条件的研究

探讨E.tenella在鸡胚盲肠上皮细胞体外培养的营养条件,观察其发育过程。用鸡胚盲肠上皮细胞体外培养E.tenella,对子孢子接种基础培养基、营养物质含量及血清浓度进行了优选,并对优化营养条件下E.tenella的发育过程进行了观察。MEM199培养基中24、48、72h的虫体感染率显著(P0.05)或极显著(P0.01)高于DMEM培养基;MEM199培养基中叶酸、VB6、VB1的含量为6mg·L-1时,24、48、72h的虫体感染率显著(P0.05)高于其他组,分别为25.33%、12.67%和12.33%;MEM199培养基中葡萄糖含量为3000mg·L-1,胰岛素含量为0.40mg·L-1时,有较多的成熟裂殖体形成;接种子孢子后于4、48、96h换液,接种时和4、48h血清浓度为2.5%,96h为1%,有利于子孢子的后期发育;优化营养条件下,细胞接种子孢子后4、24、48、72、96、120h的细胞虫体感染率分别为42%、28%、20%、15%、13.67%、13.67%,且E.tenella可在鸡胚盲肠上皮细胞中完成内生发育过程,并形成卵囊。结果表明,获得了能使E.tenella在鸡胚盲肠上皮细胞完成整个内生发育的体外培养营养条件。     

结肠小袋纤毛虫体外培养特性的初步观察

目的观察结肠小袋纤毛虫（Balantidium coli）在体外培养条件下的生长情况。方法取粪样分别置于4℃～8℃冰箱,28℃和37℃恒温培养箱中,观察记录虫体数量,统计不同温度条件下滋养体生存时间。28℃恒温条件下,将粪液加入不同稀释液（蒸馏水、生理盐水及洛克氏液）中,观察滋养体的活力及数量;采用同样的观察方法,统计滋养体在双相培养基以及免血水培养基内的生存时间。在28℃和37℃恒温条件下,分别观察滋乔体在RSS培养液（Ringer液＋血清＋米粉）及不加米粉的RSS培养液内的生存时间。结果结肠小袋纤毛虫滋养体在体外的最适生存温度为28℃,在洛克氏夜中生存时间明显长于生理盐水和蒸馏水,在RSS培养基及双相培养基中可在培养24h时达到高峰。在含有诺氟沙星的兔血水培养基中,滋养体的数量可在培养后96h达到高峰,生存时间可达到180h。结论结肠小袋纤毛虫体外培养受很多因素的影响,有待于进一步研究。     

RNA干扰abcg-5基因对犬弓首蛔虫感染性的影响

为研究犬弓首蛔虫(Toxocara canis,T.canis)腺苷三磷酸结合盒G5基因(ATP-binding cassette G5,ab-cg-5)的功能,通过体外合成Tc-abcg-5基因的特异性siRNA,利用RNAi技术对T.canis的成虫和虫卵进行干扰。结果显示,干扰24、48h后siRNA-744组Tc-abcg-5的相对表达量比siRNA-1020组和siRNA-432组显著性降低,表明siRNA-744有较高的沉默效率。采用电穿孔法和浸泡法对siRNA-744的递送效率进行比较,结果显示浸泡法更有利于将siRNA-744导入到T.canis虫卵内。用siRNA-744经浸泡法干扰T.canis感染性虫卵,经口灌服小鼠,感染后第7天对小鼠的脑、肝和肺组织进行病理学研究,结果显示RNA干扰使T.canis感染性虫卵的感染力下降,从而降低了肺、肝的病变程度。研究表明Tc-abcg-5基因可能通过影响虫卵的发育从而参与T.canis的生长、发育过程。     

使君子提取物体外抗蓝氏贾第鞭毛虫效果的研究

为了观察中药使君子提取物体外抗蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)的作用效果，试验分别采用乙醇和去离子水对使君子进行提取，得到使君子醇提物和使君子水提物，设置使君子醇提物组、使君子水提物组、甲硝唑对照组(3组各分别设置0.312 5,0.625,1.25,2.5,5 mg/mL5个药物浓度)及空白对照组(TYI-S-33培养基),分别在37℃厌氧培养滋养体浓度为8.0×10⁵～4.2×10⁶个/mL的贾第虫24 h,收集贴壁虫体，计算半数抑制浓度(IC₅₀);用IC₅₀的使君子醇提物、使君子水提物和甲硝唑分别作用于贾第虫，依次培养0,2,4,6,8,12,24 h,同时设空白对照，计算出药物达IC₅₀的最短作用时间；对作用时间分别为6 h和12 h的使君子醇提物组和空白对照组进行倒置光学显微镜、扫描电镜和透射电镜下观察，分析使君子醇提物对贾第虫滋养体超微形态结构的影响。结果表明：三种药液对贾第虫均有一定的抑制作用。使君子醇提物、使君子水提物和甲硝唑的IC₅₀分别为...     

羊结肠小袋纤毛虫滋养体的体外存活试验

为了研究羊结肠小袋纤毛虫滋养体对理化因素的抵抗力,在体外环境条件下进行了温度、光照、干燥、培养基含水量等理化因素对滋养体存活的影响试验。结果表明:滋养体对低温耐受性强,对光照非常敏感,干燥可杀死全部滋养体,培养基中充足的含水量是该虫体存活的前提条件。说明理化因素对滋养体存活有重要影响。     

双芽巴贝斯虫在长角血蜱肠内发育的形态学研究

以耳袋法将长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)幼虫饲于实验感染双芽巴贝斯虫(Babesia bigemina)牛,幼虫饱血后24h内,其肠管内容物中红细胞内、外见有单梨子型(3.5～4.5μm×1.2～2.6μm)和双梨子型(4.1～4.8μm×1.8～3.0μm)两种裂殖体.饱血后24～48h,随着裂殖体细胞膜及核变性而发生形态变化.48～72h,绝大多数裂殖体出现溶解.72h后,这些裂殖体从肠道消失.其后,在蜱肠上皮及血淋巴中也未能找到双芽巴贝斯虫体.本实验从形态学上证明双芽巴贝斯虫在长角血蜱若虫肠道内不能发育.     

捕食性真菌Duddingtonia flagrans捕食马圆线虫幼虫动态观察

为探讨捕食性真菌Duddingtonia flagrans在捕食线虫的过程中产生的细微变化,如捕食器的形成过程,捕获虫体前后的变化等,利用线虫三期幼虫作为诱导物,在玻片培养基中刺激捕食性真菌产生捕食器,然后对其捕食线虫过程进行了适时动态的观察。结果显示,接种有较强活力的线虫三期幼虫2h后捕食器,即菌环开始形成,而后联合形成菌网;4h后虫体被捕食器捕获,24h后线虫即被完全致死;5d后,虫体发生皱缩直至完全消解。D.flagrans还可以自发产生捕食器(菌环),显示了其较强的捕食线虫的效率和能力。本研究为阐明捕食性真菌捕食机制提供了重要的参考依据。     

石榴皮提取物对离体培养兔球虫卵囊的杀灭作用

本试验旨在研究石榴皮提取物对离体培养兔球虫卵囊的杀灭作用。采集已感染球虫的18只家兔(体重2.0~2.5 kg)的新鲜粪便(24 h内,35 g/只),用饱和盐水漂浮法分离、提取球虫卵囊。球虫卵囊分别在蒸馏水、石榴皮水提物、石榴皮黄酮、石榴皮多酚、盐酸氯苯胍中培养24、48、72 h,光镜下观察不同浓度的各种药物对兔球虫卵囊数量的影响。结果显示,与蒸馏水组比较,5、10 mg/mL剂量组培养72 h,4种药物均使兔球虫卵囊数量明显减少。球虫卵囊的减少率石榴皮水提物组大于石榴皮黄酮组,石榴皮黄酮组大于石榴皮多酚组和盐酸氯苯胍组;起效时间约为48~72 h。1 mg/mL剂量组4种药物虽可使兔球虫卵囊数量减少,但无显著差异(P＞0.05)。结果提示,石榴皮提取物对体外培养的兔球虫卵囊有较强的杀灭作用,其中石榴皮水提物对兔球虫卵囊杀灭作用最强,石榴皮黄酮和石榴皮多酚次之,其杀灭作用呈一定的正相关量效关系。     

培养基和换液时间对E.tenella子孢子在宿主细胞体外培养中发育的影响

探索培养基和换液时间对E.tenella子孢子在宿主细胞体外培养的影响,为E.tenella损伤机制及抗球虫药的研究提供体外模型。本实验研究了不同换液时间和不同培养基对E.tenella子孢子在鸡胚盲肠上皮细胞体外培养中发育情况的影响。结果表明:(1)在相同培养基下(MEM199培养基或RPMR1640),与3h换液相比,4h换液更适于E.tenella子孢子的入侵;4h换液后培养至24h(或48h),E.tenella子孢子发育更好。(2)相同培养时间下,与RPMR1640培养基相比MEM199培养基更适于E.tenella子孢子的发育。     

禽致病性大肠杆菌生物被膜的形成及其影响因素

为确定影响细菌生物被膜(BF)的形成条件,本研究采用BF体外定性观察和定量粘附性检测两种方法对1株野生禽致病性大肠杆菌(E.coli)在不同环境(培养时间、培养基类型、引导载体类型、营养条件)下产生BF的差异进行了研究。结果显示野生禽致病性E.coli其宿主体外BF最适形成条件是培养时间为48h,培养基为5%TSB、引导载体为平底96孔聚苯乙烯微孔板(美国Corning Costar)。其生长周期为8h时开始起始粘附、24h形成若干微菌落、36h微菌落粘连、48h形成完整的BF、72h细菌脱落开始下一轮的BF生长。糖分和适量的无机盐都可以在一定程度上促进BF的形成和被膜内细菌的粘附性提高。该研究表明禽致病性E.coliBF的形成周期,并为抑制其形成提供了实验依据。