棉花立枯病拮抗细菌的分离鉴定及抑菌活性

为获取对棉花立枯病具有生防作用的细菌,从棉田土壤中筛选出1株高效抑制立枯丝核菌的拮抗细菌W1,通过形态学特征结合16S rDNA序列分析鉴定其分类地位,并采用平板对峙法分析其抑菌活性。结果表明,拮抗细菌W1经鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,其对立枯丝核菌具有稳定的抑菌作用,发酵原液的抑菌率为82.12%,稀释5倍的无菌发酵液和菌体破碎液抑菌率分别为42.54%和46.15%。抑菌活性受培养基成分影响,BPA培养基的发酵液抑菌率最高,达98.34%,NA培养基抑菌率仅为17.12%。抑菌活性物质在80℃、中性和偏碱性条件下具有稳定性,对蛋白酶K处理不敏感。显微观察发现,菌株W1的主要拮抗机理是通过产生拮抗物质造成病原菌的菌丝消融、菌丝体断裂、扭曲和畸形。结果表明拮抗细菌W1是具有潜在应用前景的防治棉花立枯病及其他植物真菌病害的菌株资源。     

Bacillus subtilis HAB-1在不同培养基上的形态观察及抑菌活性测定

HAB-1是一株来自植物根际具有较强抑菌作用的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,将其接种到7种培养基平板上,培养72 h后观察HAB-1的菌落形态及不同培养基质对HAB-1抑菌活性的影响。结果表明,在7种培养基平板上,HAB-1的菌落形态存在明显差别,菌落直径为7.95~23.51 mm不等;通过平板对峙培养法发现,来自不同培养基培养的HAB-1对橡胶树炭疽病菌等12株植物病原真菌的抑菌活性存在较大差异,对同一种病原菌的抑菌率差别最大为31.33%袁,最小为2.66%。通过对7种培养基组分分析发现,C源和金属离子对HAB-1抑菌活性的影响较为明显,而N源则影响不大。从本试验结果可知,不同培养基组分对HAB-1的影响较大袁,除了影响生长速度外,对其抑菌活性物质的产生也起到重要作用。本研究为后续对该菌的发酵及抑菌物质的研究奠定了基础。     

12种热带植物粗提物对胡椒瘟病的抑菌活性测定

用生长速率法测试了12种热带植物乙醇粗提物对胡椒瘟病菌的离体抑菌活性。结果表明,当供试质量浓度为干样10mg／mL时,鹰爪和马缨丹粗提物对胡椒瘟病菌菌丝生长的抑菌率均达到90％以上,分别为91.95％和94.32％。可见这2种植物粗提物对供试病原菌菌丝生长具有明显的抑制作用,值得进一步研究开发。     

枯草芽孢杆菌B26抑菌活性成分稳定性研究(摘要)(英文)

[目的]研究枯草芽孢杆菌B26抑菌活性成分的稳定性。[方法]枯草芽孢杆菌B26发酵液离心过微孔滤膜后,用70%的(NH4)2SO2沉淀,透析后获得仍具有拮抗多隔镰孢霉的无菌粗提物,用平板涂布打孔法检测粗提物对温度、酸碱度、紫外线照射、有机溶剂和蛋白酶处理的稳定性。[结果]经100℃处理后,枯草芽孢杆菌B26粗提物抑菌直径是常温下的78.2%,但经121℃处理后,B26粗提物完全失去活性;在pH值为3～10范围内,枯草芽孢杆菌B26粗提物均具有抑菌活性,在pH值为7时其抑菌活性最大;枯草芽孢杆菌B26粗提物经距离为40cm、功率为20W的紫外灯照射80min后,其抑菌活性为对照的78.1%。经乙醚、甲醇、氯仿和丙酮处理30min后,枯草芽孢杆菌B26粗提物抑菌活性分别是对照的96.4%、85.7%、82.1%、81.5%。枯草芽孢杆菌B26粗提物经蛋白酶K、胰蛋白酶和胃蛋白酶处理后,其拮抗直径分别为15.2、16.2和16.3mm,抑制率分别是对照的76.7%、81.8%和83.3%。[结论]枯草芽孢杆菌B26粗提物抑菌具有较高的稳定性。     

青蒿粗提物的抑菌活性研究

分别用水、石油醚(30~60℃)、乙酸乙酯和丙酮提取了青蒿活性物质,采用生长速率法和载玻片法测定了其抑菌活性。其中0.1 g/ml浓度的水提取物在PDA平板培养基上对辣椒疫霉病菌、蘑菇湿泡病菌的菌丝生长抑制率为100%,对香蕉黑星病菌的抑制率为29.70%,对其余供试病菌的抑制率均在60.60%以上(茄子枯萎病菌除外)。抑制孢子萌发试验结果,在0.04 g/ml浓度下,石油醚提取物对小麦赤霉病菌和丙酮提取物对棉花枯萎病菌的孢子萌发抑制率分别为86.15%和64.98%;青蒿各提取物对辣椒疫霉菌的孢子萌发无显著抑制作用。田间小区试验表明,青蒿水提取物稀释20倍对番茄灰霉病的防效为40.70%,对照药剂嘧霉胺1 000倍液的防效为61.14%。     

枯草芽孢杆菌BS-1菌株抑菌活性研究

对1株枯草芽孢杆菌BS-1进行了抑菌活性测定研究。以苹果炭疽病菌、番茄灰霉病菌、水稻恶苗病菌、小麦赤霉病菌、棉花枯萎病菌、辣椒疫霉病原菌、玉米小斑病菌7种植物病原菌为指示菌,采用对峙培养法、杯碟法以及菌丝生长速率法测定了枯草芽孢杆菌及其无菌发酵液对7种植物病原菌的拮抗活性,结果表明,枯草芽孢杆菌及其发酵液对番茄灰霉病菌生长有较强的抑制作用,对苹果炭疽病菌没有抑制作用。     

重金属胁迫培养对2种细菌生长曲线的影响

[目的]研究重金属胁迫培养对2种细菌生长曲线的影响。[方法]以大肠杆菌和枯草芽孢杆菌2种典型细菌为试验材料,采用传统培养方法,选择5种重金属离子Cu2＋、Hg2＋、Pb2＋、Cd2＋、Cr6＋在不同浓度下对其进行胁迫培养,通过测定2种细菌的生长曲线,研究外源性重金属对2种细菌生长的影响。[结果]Hg2＋、Cd2＋毒性较强,2种细菌的增殖在高浓度时受到抑制,G＋比G-更为敏感;当重金属浓度〉50mg/L后,5种重金属的对2种细菌的毒性顺序为Hg2＋〉Cd2＋〉Cu2＋〉Cr6＋≈Pb2＋。[结论]该研究结果为进一步研究重金属对环境及生态系统的影响奠定基础。     

枯草芽孢杆菌21抑菌物质的稳定性分析及初步分离

为了探讨芽孢杆菌21抑菌物质的稳定性及确定其抑菌主要成分,利用管碟法和硫酸铵沉淀法研究了代谢物对玉米圆斑病菌抑菌能力的变化。结果表明:经p H 4~9处理后,代谢产物对玉米圆斑病菌的抑制能力在60%~100%之间变化;经碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶处理后,代谢产物对玉米圆斑病菌的抑制能力在70%~80%之间;但经胰蛋白酶和蛋白酶K处理后,抑菌能力变化不大,仍在95%以上;经40~90℃处理后,抑菌能力变化范围在67%~100%之间,随温度升高,抑菌能力有下降趋势,但当处理温度为100℃时,发酵液几乎没有抑菌效果;代谢物经30%~70%不同浓度的饱和硫酸铵沉淀后,蛋白类沉淀物均具有抑菌作用,其中以饱和度为60%的硫酸铵沉淀后的抑菌效果最好,抑菌半径可达1.0 cm。     

水稻基腐病菌拮抗菌解淀粉芽孢杆菌E3菌株的鉴定及抑菌活性

目的 纯化和鉴定从柑橘根际土壤分离得到的可抑制水稻基腐病菌Dickeya zeae EC1生长的解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens,并解析其抑菌机制。方法 采用平板扩散法从根际土壤中筛选出1株拮抗D. zeae EC1的B. amyloliquefaciens E3菌株;根据细菌菌落表型、生理生化特征结合16S rDNA序列分析等方法对E3菌株进行分类鉴定;检测无菌E3培养液对D. zeae EC1侵染水稻种子能力的影响;盐酸沉淀结合丙酮抽提法提取E3菌株脂肽粗提物;采用平板对峙法测定E3菌株脂肽粗提物对病原真菌的抑菌活性,琼脂扩散法测定E3菌株脂肽粗提物对病原细菌的抑菌活性及最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration, MIC);用Durashell C18柱对脂肽粗提物进行HPLC分离纯化;通过液相色谱−质谱联用(LC-ESI-MS)分析,鉴定抑菌物质的相对分子质量并推测其化学组成。结果 B. amyloliquefaciens E3菌株对茄病镰刀菌Fusarium solani、香蕉基腐病菌、茄科劳尔氏菌Ralstonia solanacearum等多种植物病原菌生长具有抑制作用,表现为广谱抗性;B. amyloliquefaciens E3菌株的无菌培养液能够抑制D. zeae EC1侵染萌发的水稻种子,显著提高水稻种子的萌芽率;B. amyloliquefaciens E3菌株的脂肽粗提物可以抑制D. zeae EC1的生长,其MIC为348.97 μg/mL;HPLC分离纯化结合LC-ESI-MS分析发现,B. amyloliquefaciens E3菌株分泌的主要抑菌活性物质包括Surfactin、Fengycin和Iturin 3类脂肽类抗生素。结论 B. amyloliquefaciens E3菌株具有作为生防菌的潜力,它可能通过分泌Surfactin、Fengycin和Iturin 3种脂肽类抑菌活性物质,拮抗水稻基腐病菌、茄科劳尔氏菌、茄病镰刀菌等多种植物病原菌。研究结果可为该菌的生物防治应用提供理论依据。     

东北刺人参不定根粗提物的抑菌活性及机制研究

该研究旨在调查东北刺人参不定根粗提物(OCE)的抗菌特性.用OCE处理单增李斯特菌以及猪霍乱沙门氏菌后,确定OCE对2种菌的最低抑菌浓度(MIC),并调查OCE对2种菌细胞膜通透性的影响.结果表明:OCE对单增李斯特菌以及猪霍乱沙门氏菌的MIC分别达到了4和8 mg/mL,并且经OCE处理之后,2种菌胞外的电导率、蛋白...     

细菌素Subticin 112对金黄色葡萄球菌 CVCC 1885的体内外抑菌活性

   【目的】研究枯草芽孢杆菌素（Bacillus subtilis bacteriocin）Subticin112在体内外对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）CVCC 1885的抑菌活性（bacteriostatic activity）,为Subticin112的临床应用提供理论依据。【方法】体外抑菌：取相同有效质量的Subticin112、土霉素、青霉素、万古霉素、新霉素、链霉素和庆大霉素等分别溶于等体积的无菌生理盐水中,然后采用琼脂扩散法比较相同浓度的上述药物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性。体内抑菌：将体重为18-22 g的SPF级KM雄鼠120只分成6组,分别为空白对照组、阴性对照组、土霉素治疗组、低浓度Subticin112治疗组、中浓度Subticin112治疗组和高浓度Subticin112治疗组。试验开始后,各组小鼠每隔8 h分别灌胃0.4 mL不同浓度的上述药物或无菌生理盐水,3次灌胃结束后,各组小鼠分别腹腔注射0.5 mL绝对致死剂量（absolute lethal dose, LD100）的金黄色葡萄球菌或无菌生理盐水。试验结束后测定死亡率、促炎性细胞因子水平、腹腔液金黄色葡萄球菌浓度并制作病理组织切片进行观察。【结果】体外抑菌：与抗生素相比,相同浓度的Subticin112对金黄色葡萄球菌具有很好的抑菌活性,其中与万古霉素和新霉素相比,Subticin112对该致病菌的抑制活性更好,且差异极显著（P＜0.01）,而与其它抗生素相比抑菌活性相当,差异不显著（P＞0.05）。体内抑菌：试验结束后,阴性对照组小鼠死亡率为100%,低浓度Subticin112治疗组为30%,其它组小鼠均无死亡;与阴性对照组相比,药物治疗组小鼠的促炎性细胞因子（IL-1β,IL-6和TNF-α）水平均有下降,差异显著（P＜0.05）,药物治疗组小鼠腹腔液中的金黄色葡萄球菌浓度也均有下降,差异极显著（P＜0.01）,且呈明显的量效关系;病理切片显示阴性对照组肝脏和脾脏具有明显的病变,而药物治疗组病变轻微或无病变。【结论】可以得出细菌素Subticin112在动物体内外对金黄色葡萄球菌CVCC 1885均具有较好的抑菌活性,具备开发为新型抗菌药物的潜力。     

枯草芽孢杆菌K12发酵液对核盘菌的抑菌活性

用离体和活体方法,测定了枯草芽孢杆菌菌株K12发酵液对核盘菌(JY20)的抑菌活性。K12发酵原液对JY20的离体测定活性以36 h发酵液最强,抑菌圈直径达21 mm;而发酵代谢物活性以72 h的代谢产物最强,抑菌圈直径达11 mm。用油菜叶片活体测定结果表明,其发酵液和代谢物对核盘菌的侵染有显著防效,与对照相比,原液最大抑菌率达63.8%,过滤液最大抑菌率达53.6%。发酵液过滤液在不同温度处理后抑菌活性有差异,但高温高压处理后仍有一定的抑菌活性。综上表明,K12的生防作用为菌体本身对营养和生境的竞争与次级代谢产物协同作用的结果。     

重金属胁迫培养对2种细菌生长曲线的影响(摘要)(英文)

[目的]研究重金属胁迫培养对2种细菌生长曲线的影响。[方法]以大肠杆菌和枯草芽孢杆菌2种典型细菌为试验材料,采用传统培养方法,选择5种重金属离子Cu2+、Hg2+、Pb2+、Cd2+、Cr6+在不同浓度下对其进行胁迫培养,通过测定2种细菌的生长曲线,研究外源性重金属对2种细菌生长的影响。[结果]Hg2+、Cd2+毒性较强,2种细菌的增殖在高浓度时受到抑制,G+比G-更为敏感;当重金属浓度50mg/L后,5种重金属的对2种细菌的毒性顺序为Hg2+Cd2+Cu2+Cr6+≈Pb2+。[结论]该研究结果为进一步研究重金属对环境及生态系统的影响奠定基础。     

一株蓖麻根际活性菌LX6的抑菌活性测定及其分子鉴定

对蓖麻根际菌株LX6的抗菌活性进行了测定。结果表明,该菌株对多种植物病原真菌具有明显的抑制作用,表现出广谱抗菌活性。其中对三七根腐病菌(Cylindrocarpon destruans)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、玉米弯孢病菌(Curvularia lunata)和禾谷镰刀病菌(Fusarium graminearum)的抑菌效果均达50%以上。通过对LX6菌株的形态特征、染色反应、培养性状、生理生化特征试验以及16S rDNA鉴定,该菌株为枯草芽孢杆菌。     

枸骨茎叶甲醇粗提物及其抑菌活性初步研究

为了解枸骨(Ilex cornuta)茎叶粗提物的农药抑菌活性,采用生长速率法测定了枸骨茎叶甲醇提取物对水稻稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)、芒果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、苹果轮纹病菌(Botryosphaeria dothidea)、香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.)以及小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)等植物真菌病害的抑菌活性。结果表明,粗提物在测试浓度10mg/mL下对上述5种病原真菌均表现出不同程度的抑制作用,特别是对水稻稻瘟病菌和小麦赤霉病菌的抑制作用较好,抑制率分别为100%和89.86%,EC_(50)分别为4.616mg/mL和3.425mg/mL。     

内生真菌SDYS180粗提物抑菌活性与机制

【目的】探究内生真菌SDYS180(聚多曲霉菌Aspergillus sydowii)对常见林木病原真菌的拮抗活性及抑菌机制,旨在为生防菌的开发与利用提供依据。【方法】以前期筛选的植物内生真菌SDYS180为试验材料,通过体外试验测定其对13株常见林木病原真菌的抑制活性,并建立SDYS180粗提物对各病原真菌的毒力回归方程,同时测定SDYS180粗提物对杨树叶斑病菌生理指标[电导率、可溶性蛋白(SP)质量分数、丙二醛(MDA)浓度、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化物酶(POD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性]的影响。【结果】SDYS180菌体、发酵液和挥发性代谢产物对13株林木病原真菌的抑制效果表现为菌体>发酵液>挥发性代谢产物,其中对杨树叶斑病菌的抑制活性最佳,粗提物对该菌的毒力回归方程为y=0.301 0x+0.143 7(R²=0.986 4),EC₅₀=1.183 7 mg·mL^-1。SDYS180粗提物对杨树叶斑病菌的生理指标存在明显影响,主要表现为：试验期间处理组的电导率和MDA浓度大于对照组...     

一株番茄青枯病拮抗细菌JK19的鉴定及其抑菌活性检测

[目的]研究拮抗细菌JK19的分类学地位,检测其抑菌活性,分析其可能的活性成分.为脂肽提取和生防制剂的研制提供了理论依据.[方法]采用形态学、生理生化特征及16S rDNA序列分析方法,鉴定菌株;采用平板对峙法检测菌株对8种植物病原菌的拮抗作用;采用PCR扩增方法检测基因组中的脂肽类抗生素合成及促生作用相关的基因.[结...     

解淀粉芽孢杆菌ck-05发酵液的抑菌活性

对解淀粉芽孢杆菌ck-05菌株发酵液中生物活性物质的抑菌作用及稳定性进行初步研究.采用菌丝生长速率法测定菌株ck-05发酵液对11种病原菌的抑菌作用.结果表明,ck-05菌株发酵液对供试植物病原菌均具有较强的抑菌作用,其中对香蕉枯萎病的抑制性最强,抑菌率达82.22％.另外,以香蕉枯萎病为指示菌,测定不同条件下ck-0...     

芽孢杆菌LP-3抗菌物质的初分离及抑菌活性测定

内生芽孢杆菌LP-3对多种植物真菌具有抑制作用,为分析其分泌的抗菌物质的抑菌活性,分别采用5种有机溶剂对抑菌物质进行萃取,比较了抗菌粗提物与两种杀菌剂对梨黑斑病菌的抑菌效果,测定了粗提物对9种植物病原菌的毒力,结果表明,甲醇萃取物对梨黑斑病菌的抑制效果最佳,抑菌率可达68.4%,对病菌菌丝及孢子的EC50分别为1.18mg.L-1和3.61mg.L-1,介于腐霉利和异菌脲之间,显示出良好的抑菌活性,而且该物质抗菌谱广,对9种植物病原菌的EC50在1.18mg.L-1～67.93mg.L-1之间。     

1株碱蓬内生芽孢杆菌的分离及抑菌活性测定

为进一步探究内生细菌的生防机制,采用NA固体倾注法培养从碱蓬健康组织中分离的菌株,并对分离菌株的个体形态、菌落特征和生长特性进行初步研究,同时采用平板对峙法对其抑菌活性进行了测定.结果表明:从碱蓬健康组织中分离出1株内生芽孢杆菌(EB0901);该菌的生长最适温度为35℃,初始pH6～8时出现生长高峰,以pH为7时生长最好;在NaCl浓度为0.5%时生长最佳,但在10%以上时仍可生长;对供试的9种植物病原真菌菌丝生长均有一定的抑制作用,对玉米大斑病菌、辣椒菌核病菌、平脐孺孢病菌、辣椒炭疽病菌的抑菌能力较强,抑菌率在60%以上,显著高于其他5种植物病原真菌(P＜0.05),其中,对玉米大斑病菌的抑菌活性最强,抑菌率高达64.11%.碱蓬内生芽孢杆菌是一种具有明显抑菌活性的内生细菌,值得进一步开发利用.