一种新的大丽轮枝菌基因敲除载体的构建

[目的]研究大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)致病基因的功能,构建一个便于筛选敲除转化子的高效基因敲除载体.[方法]通过普通PCR技术扩增得到绿色荧光蛋白基因(GFP),连接到pMD18-T载体上,测序验证,利用限制性内切酶HindⅢ将目的片段切下,连接到敲除载体pRF-HU2的多克隆位点上.通过电击转化法将载体转化到农杆菌EHA105中,利用农杆菌介导法(ATMT)转化到大丽轮枝菌.[结果]成功得到一种新的携带GFP筛选标记的大丽轮枝菌敲除载体,通过GFP基因的筛选,T-DNA随机插入转化子在荧光显微镜下呈现绿色,相反敲除转化子在荧光显微镜下不呈现绿色.[结论]构建了一种大丽轮枝菌基因新的高效敲除载体,利用该载体大大节省了筛选转化子所用的时间,为大丽轮枝菌功能基因的验证提供了技术平台.     

一种新的杆状病毒转移载体的构建

从家蚕核型多角体病毒(BmNPV)和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)中分别克隆出其P10基因。从BmNPV P10中亚克隆得到其5′端上游片段,经PCR定位突变使之ATG区突变成一个BglⅡ酶切位点。从AcMNPVP 10中亚克隆得到基因3′端下游片段,克隆入经突变的BmNPV P10基因启动子的下游,构建成一个新的转移表达载体pBmAcPV-1,由于BmNPV和AcMNPV P10基因及两端的同源性高达90％以上,该载体可以分别与野生型BmNPV和AcMN-PV DNA进行同源重组。     

一种新的杆状病毒转移载体的构建

从家蚕核型多角体病毒和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒中分别克隆出其Ｐ１０基因。从ＢｍＮＰＶＰ１０中亚克隆得到基５端上游片段，经ＰＣＲ定位突变使之ＡＴＧ区突变成一个Ｂｇ１Ⅱ酶切位点。从ＡｃＭＮＰＶＰ１０中亚克隆得到基因３端下游片段，克隆人经突变的ＢｍＮＰＶＰ１０基因启动子的下游，构建成一个新的转移表达载体ｐＢｍＡｃＰＶ－１，由于ＢｍＮＰＶ和ＡｃＭＮＰＶＰ１０基因及两端的同源性高达９０％以上，     

桫椤atpB-rbcL序列2种测序方法的比较分析

［目的］比较2种方法进行桫椤atpB-rbcL序列测定的测序效果。［方法］通过PCR产物直接测序和克隆测序对桫椤叶绿体atpB-rbcL基因间隔序列进行测定与分析。［结果］结果表明,桫椤atpB-rbcL序列直接测序所得峰形紊乱,PolyT后出现多重峰;克隆测序结果峰形清晰,无干扰。［结论］对于桫椤atpB-rbcL序列测定,克隆测序优于直接测序。     

一种无标记基因植物表达载体的改造方法

利用无标记基因表达载体开展转基因植物研究,是获得无标记基因转基因植物、保证转基因生物安全的手段之一。文章报道了一种无标记基因植物转化载体的改造方法,通过AseⅠ单酶切可去除pCAMBIA1300植物转化载体内潮霉素标记基因完整表达框架。试验应用结果表明,利用此表达载体进行共转化研究,可获得不含标记基因、只含目的基因的转基因植株。此方法可在植物共转化研究中广泛应用。     

一种新的氨基酸序列进化距离及其应用

在选择的思想下,建立了蛋白质氨基酸序列的进化动力学方程,提出了一个新的蛋白质氨基酸序列的进化距离———选择进化距离,该距离统一了前人提出的各种氨基酸序列的进化距离;将该动力学方程转换为线性模型后,利用最小二乘法可实现模型中参数b的估计;最后,通过17个物种的细胞色素b的氨基酸序列说明了该选择进化距离的计算方法,并根据自展法比较了不同进化距离得到的物种进化树。结果表明,利用选择进化距离构建的进化树与其他几种进化距离得到的进化树的拓扑结构一致。选择进化距离为估计蛋白质氨基酸序列的进化距离提供了新方法。     

一步获取基因定点修饰技术测序样品双峰中突变序列方法的建立

介绍了一种经济高效获取突变序列的方法。该方法克服了传统的基因定点突变样品双峰测序峰图分析工作量大、操作繁琐、结果判定周期长等问题,通过与野生型序列的对比分析,判定突变类型,直接获取突变型基因序列,从而为基因定点突变技术中快速筛选、确定阳性样品及其研究奠定理论基础。     

Meta分析:一种新的文献综述方法

Meta分析是一种新的文献综述分析方法,它比传统的文献综述有更好的分析效果。在教育学、心理学、医学等领域已得到广泛的应用,但是在生物工程和生物技术领域还较为少见。通过实例,详细介绍了Meta分析的基本内容、分析方法及RevMan软件的使用。     

一种新的期刊装订方法

介绍了一种新的工作方法,为保存,利用好过期期刊提出了新思路。     

微透析:一种新的生殖生理学研究方法

本文介绍微透析系统(MDS)的概念、原理、探针种类与构建方法、主要步骤,并对 MDS 的技术特点进行了评价。     

一种新的应用方法可拓方法

可拓方法是可拓学（Extentes）的基本方法。可拓学创立于1983年,十几年来,已初步形成了自己独特的理论框架,并向应用领域发展。可抗学以矛盾问题（主客观矛盾问题,也称不相容问题、主观问题、客观问题）为研究对象,探讨用形式化解决它们的规律与方法。可抗学的逻辑细胞是物元,理论体系是可拓论。可拓论的2个支柱是物元理论和可拓数学,特有的方法是可抗方法。可拓论和可拓方法在各个领域的应用技术是可拓工程。其学科体系的框架如下所示：可抗方法是可拓学特有的方法,它以可抗集合为数学工具,用关联函数分析所研究对象间的相容性,…     

牦牛TLR4基因的克隆测序及序列分析

旨在了解牦牛天然免疫受体TLR4基因特点。根据GenBank已公布的牛TLR4基因序列,分3段设计引物,测序、拼接克隆序列,并对所得序列进行生物信息学分析和预测。基因序列分析表明,克隆得到牦牛TLR4基因编码区全长2 807bp,开放阅读框2 526bp,编码氨基酸841个,N端含有27个氨基酸组成的信号肽,分子质量96.009 8ku,理论等电点为6.35。蛋白预测结果表明,TLR4编码蛋白整体表现为亲水性。同源性分析表明,10条序列当中牦牛与野牦牛、普通牛、绵羊等物种具有较高的同源性,在系统发育树中距离最近。说明TLR4基因序列具有较高的保守性。     

一种逆M序列的动态显示方法

根据逆Ｍ序列产生原理，实现了计算机系统辨识仿真时逆Ｍ序列的产生和动态显示，并通过实例证明了程序的正确性和实用性。     

一种新的测试柴炉柴灶方法

评定一台炉灶的好坏,应从结构是否合理,使用是否方便、造价是否低廉、卫生条件怎样、热性能如何等方面加以全面衡量。其中热性能一项,用户难以作出定量的评价。而要用专门仪器设备和采用一定方法才能判定其上火快慢、热利用率高低。本文着重从实际使用要求阐述表征炉灶热性能的各项指标及其获取方法。     

一种新的凝血酶活性检测方法

根据纤维蛋白原在凝血酶的催化下转化为纤维蛋白的反应原理,建立一种新的凝血酶活性的检测方法.利用紫外扫描仪将此反应的反应物与生成物进行全波长扫描,取二者吸光度的最大差异处波长(250.0nm),在此波长下,绘制不同比活的凝血酶与纤维蛋白原的反应时间与吸光度的变化曲线,根据其变化规律,选择吸光度为0.800时的反应时间为初凝时间,进而拟合出凝血酶活性标准曲线.利用紫外法建立的凝血酶活性检测标准曲线,其线性相关系数(R2)可达0.9987.该法操作快速简便,可广泛应用于凝血酶活性的检测.     

一种用高拷贝质粒载体制备BAC载体基本功能基因的新方法

介绍一种改进的用普通高拷贝质粒pUC119来制备细菌人工杂色体（BAC）载体基本功能基因序列的新方法及其在构建分子克隆化病毒中的应用,该方法可使BAC载体基本功能基因序列的制备更为简易、高效。     

一种用高拷贝质粒载体制备BAC载体基本功能基因的新方法

[目的]简便有效地解决BAC载体序列因单一拷贝数带来的制备以及下游亚克隆操作的困难。[方法]选择适当的单一酶切位点,将单拷贝BAC载体质粒序列全部插入高拷贝质粒pUC119载体的适当位点。[结果]BAC载体基本功能基因序列在新质粒pUC119-BAC中失去了单一拷贝数控制功能,以高拷贝形式进行复制,利用单一酶切,可将BAC载体基本功能基因序列完整切下来,自连后重新恢复严格的单拷贝控制功能。[结论]利用高拷贝pUC119-BAC质粒,实现了BAC载体的基本功能基因序列高拷贝的复制和扩增,可以方便地用于分子克隆化重组病毒转移载体的构建或BAC文库的构建。     

一种改进的基因合成方法

[目的]建立一种简便、廉价、准确的基因合成方法。[方法]对现有的重叠延伸合成方法进行了改进,提出一种IOEP（ImprovedoverlapextensionPCRmethod）法。[结果]拆分的单链寡核苷酸长度为60nt左右,重叠区碱基数13～17bp,Tm值为40-50℃。IOEP法具体步骤如下：把拆分的寡核苷酸组装成500bp左右的中间片段,再将中间片段拼接成全长基因。利用IOEP法合成了10条基因,其平均化学合成成本率为1．291,平均错误率为1．031％o,优于其他合成方法。[结论]IOEP法是一种具有高准确率、低成本、重复性好的基因合成方法。     

城市合作社:一种新的消费形式

建国初期到改革开放这段历史时期,合作社在老百姓生活中扮演着十分重要的角色,买油、盐等日常用品,几乎都是到合作社去.改革开放以后,随着分田到户和个体工商业的发展,合作社这一经济组织形式慢慢淡出.但是,近年来,一些城市中的人们纷纷联合起来,以组成合作社的形式参与经济活动,获益匪浅.合作社日渐成为大众日常生活中的好伙伴、好帮手,中国人团结友爱、互助合作的传统美德也似乎在合作社的回潮中得到了深化和延伸.