大米抗氧化肽的分离纯化及结构鉴定

通过高效凝胶过滤层析和反相高效液相色谱先后对大米渣蛋白酶解后的多肽溶液进行分离纯化,分别得到组分2和组分RF9;再经反相高效液相色谱-质谱联用对组分RF9进行分析鉴定得到抗氧化肽氨基酸序列L-Q-P-Y(Leu-Gln-Pro-Tyr),分子质量为520.277u。合成的抗氧化肽片段L-Q-P-Y质量浓度为1 mg/mL时,对DPPH自由基清除率达到85.84%。     

冰温酶解贮藏对低盐脱水牡蛎滋味的影响

为了探究冰温酶解贮藏过程中蛋白质降解、呈味核苷酸及其关联物变化对低盐脱水太平洋牡蛎Crassostrea gigas滋味的影响,以牡蛎肉(去壳质量为25.0 g±5.0 g)中注射25 U/g风味蛋白酶(F组)和中性蛋白酶(Z组)作为试验组,以注射等量蒸馏水作为对照组(D组),脱水后进行冰温贮藏(-2.0℃±0.5℃),每3 d测定一次理化指标(pH、挥发性盐基氮TVBN含量、K值、Ca2+-ATPase活力、总巯基含量、TCA-可溶性肽含量)、游离氨基酸含量和呈味核苷酸含量,并结合电子舌进行分析.结果表明:太平洋牡蛎冰温贮藏过程中,F和Z组在18 d内满足鲜度要求,D组在24 d内满足鲜度要求;与D组相比,F和Z组蛋白质降解明显,TCA-可溶性肽和游离氨基酸含量显著提高(P<0.05),游离氨基酸味道强度(TAV)值上升;肌苷酸(IMP)积累与鲜味氨基酸协同增鲜使得F和Z组味精当量(EUC)与D组相比显著提高(P<0.05);电子舌分析显示,F、Z和D组滋味差异能被有效区分且酶解前期和后期滋味差异明显.研究表明,冰温酶解能提高低盐脱水牡蛎的多肽及游离氨基酸含量,影响呈味核苷酸降解,对低盐脱水牡蛎起到增鲜作用,其中中性蛋白酶优于风味蛋白酶,本研究结果可为高附加值海珍品加工提供新的思路.     

饲料中植物油替代鱼油对中华绒螯蟹滋味品质的影响

为研究饲料中植物油替代鱼油对中华绒螯蟹滋味品质的影响,采用植物油（W﹝豆油﹞：W﹝菜籽油﹞=3:1）替代不同水平鱼油（0%、50%和100%）的3种等氮等脂饲料（F1、F2和F3,F1为对照组）喂养成体雌蟹[体质量（95 ± 10）g]70 d后,分析3组蟹可食部位的基本营养成分、游离氨基酸和呈味核苷酸的含量,并利用电子舌结合感官评价分析其整体滋味差异。结果显示,3组蟹的体肉、性腺和肝胰腺的粗脂肪含量无显著差异（P > 0.05）,而F2组肝胰腺的粗蛋白含量显著高于其他两组（P < 0.05）,F3组体肉的粗蛋白含量显著低于其他两组（P < 0.05）。与F1组相比,F2组可食部位的鲜味、甜味感官强度值以及呈味核苷酸总量,味精当量均最高,而F3组较低。F2组性腺和肝胰腺中呈鲜味、甜味氨基酸含量也均较高。由此可得,使用50%植物油替代鱼油饲料喂养雌性中华绒螯蟹可提高其营养品质,增强其滋味品质,这可为养殖中华绒螯蟹的滋味品质的改善和育肥饲料中鱼油替代源的开发等提供一定的参考依据。     

水稻RuBP羧化酶的提纯及电泳性质分析

RuBP(1、5—二磷酸核酮础)羧化酶,在绿色植物的光合过程中起着重要作用。我们采用Sephadex 柱层析法从水稻中分离和纯化了该酶,并获得了结晶。经电泳鉴定为一条酶带。该酶结品又经解聚,S—羧甲基化和聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳分析呈5条带,3条为大亚基肽链,2条为小亚基肽链。     

盐水鸭加工过程中滋味成分变化研究

该文采用高效液相色谱和氨基酸自动分析仪研究了盐水鸭加工过程中的滋味成分变化.盐水鸭加工过程中大部分小肽含量具有减少的趋势.在煮制前的加工中,游离氨基酸含量增加而风味核苷酸含量减少,煮制过程中两者的含量均显著减少.干腌后鸭肉含盐量最高,但经其后工序加工后含量降为适宜食用的3%左右.重要的滋味成分盐水鸭含量均高于对照鸭肉.风味核苷酸和鲜味氨基酸对盐水鸭的滋味具有重要贡献.盐水鸭加工过程中复卤工艺对鸭肉滋味成分作用显著,是构成盐水鸭美味的原因之一.     

饲用羽毛肽粉的组分分离及分析

旨在研究饲用羽毛肽粉中肽分子量分布及各组分的氨基酸组成.利用AKTA purifier 100蛋白层析系统分离饲用羽毛肽粉溶液各组分.通过高分辨率Sephacryl S-100预装柱从样品中分离获得5种主要组分,利用氨基酸色谱分析各组分的氨基酸组成.通过回归方程计算出5种组分的平均分子量分别为:大于2 000 000、6 456.54、758.58、398.11、186.21.游离氨基酸组分5为天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸;组分4为由天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸、丙氨酸组成的二肽或三肽;组分3为天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸组成的六肽或七肽;组分2的肽链长度与抗菌肽相近,氨基酸组成与组分1相同,较羽毛原毛少了胱氨酸、甲硫氨酸.结果提示:饲用羽毛肽粉富含小分子肽段,在饲料蛋白源领域具有潜在的应用价值.     

黑豆ACE抑制肽的分离纯化与稳定性研究

利用大孔吸附树脂DA201-C、超滤和Sephadex G-15凝胶色谱对ACE抑制肽进行分离纯化,并对其稳定性进行研究。结果表明,经过分离纯化后,得到的4个组分均有一定的ACE抑制作用,其中组分ⅢACE抑制率最高为90.78%,其分子量主要集中在145~468 Da;ACE抑制肽具有较好的p H(2~10)、金属离子(Ca2+、K+和Mg2+)和温度(40℃)稳定性,但发现其抗消化稳定性不强,属于底物型ACE抑制肽。该结果可为进一步研究和开发黑豆的ACE抑制肽提供参考。     

蝇蛆抗氧化肽的制备及其纯化

以DPPH自由基清除率为评价指标,通过单因素试验和正交试验优化碱性蛋白酶水解蝇蛆蛋白制备抗氧化肽的工艺条件。采用超滤、Sephadex G25凝胶过滤层析对蝇蛆蛋白水解物进行分离纯化,筛选高抗氧化活性组分。结果表明,酶法制备蝇蛆蛋白抗氧化肽的最佳工艺条件为:加酶量7000 U/g,底物质量浓度1%,酶解时间15 min,酶解温度50℃,p H值7.5。水解物经超滤得到相对分子量大于10 k D、5~10 k D以及小于5 k D的组分,以小于5 k D组分清除DPPH自由基活性最强。该组分通过凝胶过滤层析进一步分离得到2个组分,其中组分Ⅱ的清除DPPH活性明显高于组分Ⅰ,达到81.83±0.80%。酶解产物经2步纯化后,其DPPH清除活性得到了显著提高,提高约57.88%。     

不同等级霍山黄芽茶滋味的电子舌评价及呈味氨基酸组成

为快速科学地判定茶叶等级,采用电子舌技术结合HPLC技术研究不同等级霍山黄芽茶的滋味品质及其呈味氨基酸组成。结果表明:电子舌测得特一级茶、一级茶至三级茶的鲜度值和复合滋味值显著递减,HPLC测得特一级茶、一级茶和三级茶的游离氨基酸总量分别为51.92 mg/g、46.45 mg/g和43.01mg/g,各级茶的茶氨酸含量均占游离氨基酸总量的70%以上,特一级茶和一级茶的游离氨基酸总量和茶氨酸含量均与三级茶间的差异显著(P0.05);单组分氨基酸含量在0.02~29.811mg/g,特一级茶的谷氨酸、丝氨酸、精氨酸、丙氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和赖氨酸等8种主要氨基酸含量明显高于一级茶。茶汤鲜度值与氨基酸含量呈正相关,电子舌可凭借茶叶氨基酸组成和含量区别霍山黄芽茶的等级。     

欧李仁抗氧化肽的免疫功能及其表征结构的研究

本文研究了经三酶(碱性蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶)复合水解制备的欧李仁抗氧化肽的免疫调节作用以及确定欧李仁抗氧化肽的表征结构。通过给正常小鼠灌胃不同剂量的欧李仁抗氧化肽来研究其对正常小鼠的免疫调节作用;并利用葡聚糖凝胶Sephadex G-25层析法对制备的欧李仁肽进行分离纯化并收集各纯化组分,将对DPPH·自由基的清除能力最强的组分进行表征结构的鉴定。试验表明欧李仁抗氧化肽能提高小鼠免疫器官指数,还可以增强小鼠淋巴细胞的增殖能力以及因绵羊红细胞致敏而出现的肿胀反应,还可促进小鼠血清溶血素和溶血空斑的形成以及小鼠的碳廓清能力。欧李仁多肽液经葡聚糖凝胶Sephadex G-25分离纯化后主要获得有4个组分,且在相同浓度下(2mg/ml)第4个组分对DPPH·自由基的清除能力最强,其清除率可达95. 6%,经质谱鉴定这个组分有2个肽片段分别为Leu-Ala-Thr-Ala-Pro-Ser-Arg和Leu-Asp-Gln-Val-Pro-Arg。研究表明欧李仁抗氧化肽对正常小鼠具有较好的免疫调节作用。     

松仁肽及其Zn2+螯合物的分离纯化、结构表征的对比分析

探究在相同条件下制备得到的松仁肽与其Zn2+螯合物的分离纯化、结构表征,对比分析两者的结构区别及抗氧化能力的变化。采用超滤过滤、葡聚糖凝胶Sephadex G-50和Sephadex G-15分离的方法进行分离纯化;用氨基酸组成、紫外扫描光谱、傅里叶红外光谱、能谱的分析测定结构表征。分离纯化得到抗氧化能力最强的组分P-4-1和P-Zn-3-1,并对该组分进行结构分析。松仁肽与松仁肽-锌螯合物的氨基酸组成分析可得出氨基酸质量分数在螯合前后有所变化。其中天冬氨酸的质量分数由6.306%上升至12.083%,谷氨酸的质量分数由14.953%上升到16.076%。紫外扫描得出松仁肽吸收峰为220 nm,Zn²⁺螯合物的吸收峰为240 nm,发生了红移。红外扫描显示出螯合前与螯合后的透射率、吸收峰和吸收强度均有所变化。在能谱分析中,根据不同元素的能量来辨别不同物质的元素组成,得出的能谱结果显示螯合前无Zn²⁺的能量柱,螯合后出现Zn²⁺。通过对比分析可知抗氧化能力最强的2个组分结构表征有明显的区别,并且与Zn²⁺螯合后的松仁肽抗氧化能力高于未螯合的松仁肽,由此可以推断有Zn²⁺参与的螯合反应会对松仁肽的抗氧化能力有所影响。     

香蕉枯萎病菌4号小种β-1,6-半乳聚糖酶的纯化与鉴定

收集了1%柑桔果胶作为碳源诱导培养的香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f. sp.cubense)4号小种菌液,通过PM-10膜超滤、Sephacry S-100凝胶过滤柱层析和超滤除杂蛋白等步骤进行分离, SDS-PAGE电泳获得单一约50 kDa的蛋白条带.经过质谱鉴定,获得其肽质量指纹谱,最后与数据库比较,与尖孢镰刀菌番茄专化型的β-1, 6-半乳聚糖酶(gi:119507928)匹配度最高.克隆获得该蛋白的DNA序列Foc4gal1共1 368 bp,包含2个内含子和3个外显子;开放阅读框为1 263 bp,预测编码420个氨基酸残基,1-20个氨基酸残基为其信号肽序列,理论等电点为5.26,分子量约47.2 kDa.本研究成功纯化鉴定了香蕉枯萎病菌4号小种β-1,6-半乳聚糖酶,并克隆了该蛋白的基因序列.     

北太平洋鱿鱼缠卵腺抗氧化酶解寡肽的制备

为探讨北太平洋鱿鱼(Todarodes pacificus)缠卵腺酶解寡肽的制备和抗氧化活性,以北太平洋鱿鱼缠卵腺为原料,选择碱性蛋白酶进行酶解,以水解度和DPPH自由基清除率为指标,经单因素和正交试验方法获得最佳酶解条件,超滤得到不同分子段多肽,通过测定还原能力、DPPH清除率、Fe~(2+)螯合能力、OH自由基清除率、超氧阴离子清除率评价不同分子量酶解多肽的抗氧化性,得出最佳分子段;采用琼脂糖凝胶G-25对最佳分子段进行分离,检测各峰对DPPH清除能力,得出最佳峰段后经HPLC进一步分离获得单一组分,由氨基酸测序仪进行N端降解测序得出目标肽序列。结果表明,碱性蛋白酶的酶解条件为温度50℃、酶解时间7 h、加酶量3 500 U/g、pH 9.0、料液比1∶6。经超滤得到的3～5 ku分子段抗氧化活性最强,经琼脂糖凝胶G-25分离得到3个峰,其中峰Ⅰ组分对DPPH清除率最好,当浓度为0.5 mg/m L时其DPPH的清除率为61.87%。经HPLC纯化得到单一峰,氨基酸序列测定为Ala-Tyr-Ala-Ser-Ser,相对分子质量为497.50。北太平洋鱿鱼缠卵腺酶解寡肽有较好的抗氧化活性。     

米糠蛋白抗氧化肽的制备及初步分离

试验以米糠蛋白为原料,制备米糠蛋白抗氧化肽。以DPPH自由基清除率为指标,采用正交试验,优化碱性蛋白酶酶解米糠蛋白制备抗氧化肽的工艺条件;采用超滤、SephadesG-25柱层析分离纯化米糠蛋白抗氧化肽。试验结果表明,制备米糠蛋白抗氧化肽的最优工艺条件为：酶解温度45℃,pH9．0,时间60rain,米糠蛋白底物浓度3％,碱性蛋白酶加酶量3000U·g-1。在米糠蛋白酶解产物中,Mrs〈5KDa组分的抗氧化活性最强,其对DPPH自由基清除率为68．7％。通过SephadexG-25凝胶层析柱进一步分离得到4个混合组分,混合组分Ⅱ活性最强,其DPPH自由基清除率为75．83％。     

黑曲霉D226乳糖酶分离纯化研究

为从黑曲霉D2-26发酵液中得到单一的乳糖酶组分,以便研究其酶学性质。试验通过采用过滤、超滤、硫酸铵分级盐析、Sephadex G-25脱盐、DEAE-纤维素-32离子强度梯度层析、Sephadex G-100凝胶过滤、DEAE-纤维素-32 pH梯度层析等方法从发酵液中分离纯化乳糖酶,纯化酶液经PAGE电泳鉴定得到单一蛋白条带。为此建立了一套简单易行的黑曲霉D2-26乳糖酶分离纯化方法。     

4种甜米酒主要营养成分与滋味特征对比及分析

以湖北孝感珍珠糯米为原料,选用孝感酒曲、米婆婆酒曲、苏州酒曲、安琪酒曲等4种酒曲制作甜米酒。对制作的4种甜米酒的基本理化指标、糖类组成、有机酸组成、游离氨基酸组成等营养成分进行测定且采用感官评价法及电子舌技术对其滋味特性进行分析。结果表明,不同品牌酒曲制作的甜米酒含有的主要营养成分存在较大差异,其中安琪甜米酒和苏州甜米酒总糖、还原糖含量较高,同时安琪甜米酒、米婆婆甜米酒中小分子糖类和有机酸含量具有一定优势。在游离氨基酸分析中,以孝感甜米酒最优,米婆婆甜米酒次之。米婆婆甜米酒在综合感官评价过程中所获评分最高。此外,利用电子舌对4种甜米酒中的滋味物质进行人工智能识别并建立了基于电子舌探头响应值与滋味感官的预测模型。     

杏仁功能性短肽制备关键技术

<正>项目简介本研究以杏仁粕为原料,对杏仁功能性短肽的生物复合酶解制备技术、超滤技术、功能性评价、抗高血压机理以及功能性组分的分离纯化和结构鉴定技术进行了系统研究。本项目已实现杏仁功能性短肽生产工艺放大,确定了核心技术和工艺流程,建立了年产100吨杏仁短肽生产线。该研究已申请专利一项,发表科研论文5篇,其中     

膜超滤分离美洲大蠊抗肿瘤活性部位小分子肽的研究

[目的]建立美洲大蠊抗肿瘤活性部位小分子肽的超滤膜分离工艺。[方法]采用中空纤维超滤膜(3 kDa)对美洲大蠊抗肿瘤活性部位小分子肽进行分离,通过单因素试验考察了转速、浓缩比、pH及操作时间对分离效果的影响,并在单因素试验的基础上通过正交试验优化了分离工艺条件。[结果]超滤膜分离美洲大蠊抗肿瘤活性部位小分子肽的最佳工艺条件为转速4 500 r/min、浓缩比30%以及pH 11,其中转速是最主要的影响因素。[结论]为膜超滤分离美洲大蠊抗肿瘤活性部位小分子肽的工业化奠定了基础。     

不同二次杀菌处理的南京盐水鸭产品风味变化及感官特性

采用顶空固相微萃取(HS-SPME)和气质联用(GC-MS)分析技术研究5组不同二次杀菌处理(对照组、99℃组、108℃组、微波组和121℃组)盐水鸭产品的挥发性风味变化,同时对5组鸭肉进行了感官评定试验。结果显示:鸭肉中共鉴定出76种主要风味化合物,包括3种酸类、14种酮类、20种醛类、11种醇类、5种酯类、7种烷烃类、1种呋喃类、11种含硫含氮及苯系物、4种烯烃;对照组、99℃组和108℃组分别鉴定出57、56、59种风味化合物,远高于微波组(51种)和121℃组(52种);对照组鸭肉主要挥发性化合物峰累计相对百分含量(87.27%)高于二次杀菌99℃组(83.27%)、108℃组(81.6%)、微波组(84.06%)和121℃组(84.33%)。与微波组和121℃组相比,108℃组感官评定得分较高,此组鸭肉更为接近盐水鸭原有风味。     

酵母抽提物对鱼糕凝胶品质和风味特性的影响

为研究不同类型酵母抽提物对鱼糕凝胶品质和风味特性的影响,分别添加7种不同类型酵母抽提物(FA31、FA37、FIG12、KU012、FIG22、KA66、FG10)和味精,测定鱼糕的白度、质构特性、凝胶强度和持水性,综合感官评分选取3种酵母抽提物(KA66、FA31、KU012),进一步采用电子舌对鱼糕滋味整体评判,并...