添加不同发情时期山羊血清对牛胚胎体外发育的影响

为了提高牛体外胚胎囊胚发育率,添加不同发情时期山羊血清对牛胚胎进行体外培养。分别采集发情周期D0、D2、D4和D7山羊血清（发情当天为D0）,灭活除菌备用。结果表明不同发情时期羊血清对孤紫激活胚胎孵裂率影响差异不显著,囊胚发育率分别为29.5%、32.4%、33.9%和41.3%,D7血清能显著提高囊胚发育率（P＜0.05）,且扩张和孵化胚出现较早。添加D0血清体外受精胚胎卵裂率较高,但对囊胚发育率影响差异不显著。说明孤紫激活和体外受精胚胎发育有差异,D7血清对胚胎后期发育有利。受精胚无血清培养3d后添加D7血清,囊胚发育率为42.9%,是较为理想的培养方法。     

芝麻素对小鼠早期胚胎体外发育的影响

本试验旨研究在体外培养(in vitro culture,IVC)中添加芝麻素(sesamin,SES)对小鼠早期胚胎体外发育的影响。采集6周龄雌性昆明小鼠受精卵,随机分为对照组和不同浓度(10、50、100μmol/L) SES组。采用Fluorescein-dUTP和Hoechst 33342免疫荧光染色分别检测囊胚内细胞凋亡率和总细胞数;采用DCFH-DA检测早期胚胎内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;采用CMF_2HC检测早期胚胎内谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平;采用JC-1检测早期胚胎线粒体膜电位强度。结果显示,不同浓度SES组分裂率和囊胚率较对照组均有提高,但无显著差异(P0.05);50μmol/L SES组细胞数较对照组显著提高(P0.05),细胞凋亡率较对照组显著降低(P0.05);与对照组相比,50μmol/L SES组ROS水平显著降低(P0.05),GSH水平和线粒体膜电位水平显著提高(P0.05)。结果表明,在IVC中添加SES可提高囊胚内细胞数、减少细胞凋亡率,降低细胞内ROS水平,提高细胞内GSH水平,改善早期胚胎线粒体功能,减少胚胎氧化应激的损伤,提高小鼠早期胚胎发育质量。     

芝麻素对小鼠早期胚胎体外发育的影响

本试验旨研究在体外培养（in vitro culture,IVC）中添加芝麻素（sesamin,SES）对小鼠早期胚胎体外发育的影响。采集6周龄雌性昆明小鼠受精卵,随机分为对照组和不同浓度（10、50、100 μmol/L）SES组。采用Fluorescein-dUTP和Hoechst 33342免疫荧光染色分别检测囊胚内细胞凋亡率和总细胞数;采用DCFH-DA检测早期胚胎内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;采用CMF₂HC检测早期胚胎内谷胱甘肽（glutathione,GSH）水平;采用JC-1检测早期胚胎线粒体膜电位强度。结果显示,不同浓度SES组分裂率和囊胚率较对照组均有提高,但无显著差异（P>0.05）;50 μmol/L SES组细胞数较对照组显著提高（P<0.05）,细胞凋亡率较对照组显著降低（P<0.05）;与对照组相比,50 μmol/L SES组ROS水平显著降低（P<0.05）,GSH水平和线粒体膜电位水平显著提高（P<0.05）。结果表明,在IVC中添加SES可提高囊胚内细胞数、减少细胞凋亡率,降低细胞内ROS水平,提高细胞内GSH水平,改善早期胚胎线粒体功能,减少胚胎氧化应激的损伤,提高小鼠早期胚胎发育质量。     

活性氧对兔早期胚胎体外发育的影响

研究旨在探讨活性氧-过氧化氢(H2O2)对兔2-细胞期胚胎体外发育的影响。在添加不同浓度过氧化氢的含胎牛血清的TCM-199培养液中,培养兔2-细胞期胚胎的对照组、≤88μmol/L、94μmol/L、103μmol/L≥118μmol/L组的囊胚发育率分别为86%、75%、34%、26%和5%;不同发育时间添加H2O2时对兔2-细胞期胚胎体外发育的影响为第1天处理组(37.14%)、第2天处理组(54.29%)与对照组(91.42%)差异显著。不同发育时间停止H2O2处理对兔2-细胞期胚胎体外发育的影响为第1天不处理组(82.26%)与对照组(97.14%)无显著性差异,但与第2天不处理组(52.50%)和第3天不处理组(30.00%)有差异。可以抑制兔2-细胞期胚胎体外发育的最低过氧化氢浓度为94μmol/L。兔2-细胞胚胎体外发育过程中,16-细胞之前的胚胎对环境中的过氧化氢都敏感,尤其是8-细胞之前的胚胎对环境中的过氧化氢更为敏感。     

超数排卵对家兔早期胚胎体外发育的影响

为探讨超数排卵对家兔早期胚胎体外发育能力的影响,收集自然发情组和超数排卵处理组交配72 h后家兔胚胎,对经筛选合格的胚胎以小鼠成纤维细胞为饲养层进行体外培养,以自然发情交配的家兔胚胎为对照,观察培养96 h贴壁情况和内细胞团传代能力.超数排卵处理的家兔交配后经筛选所获得的可用胚胎数量增多;其96 h贴壁率和成功传代内细...     

Iloprost对猪早期胚胎体外发育的影响

本研究旨在探讨PGI2类似物iloprost对猪胚胎体外发育的影响。试验以IVF胚胎为研究对象,分别在不同时期(0、24、48、72h)将不同浓度(0、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μmol.L-1)iloprost加入到猪胚胎培养液中,于156h时记录囊胚发育率和囊胚细胞数,筛选获得最佳添加方案,检测胚胎脂肪代谢速度和代谢相关基因(cox2、creb、pparδ、pdk、cpt2)的表达水平,分析iloprost影响胚胎发育的机制。结果显示,最佳的添加方案为,在受精后48h加入2.0μmol.L-1 iloprost,胚胎囊胚发育率(28%)和囊胚细胞数(49.42)显著高于(P<0.05)对照组的囊胚发育率(16%)和囊胚细胞数(28.22);添加iloprost后,胚胎脂肪酸降解速度也显著加快(P<0.05),脂肪酸代谢相关基因cox2、creb、pparδ、cpt2的表达量上升,糖代谢相关基因pdk表达量无显著变化。结果表明,PGI2类似物iloprost可以促进胚胎降解脂肪酸,为胚胎发育提供能量,提高了胚胎体外发育能力。     

影响犊牛早期胚胎体外发育的因素

犊牛超数排卵不但可为科研和生产提供大量可用卵母细胞,而且对于加快育种进程、缩短育种间隔、基因优良个体扩繁等存在巨大的潜力和意义。但是,多数研究表明犊牛卵母细胞在体外发育方面还不及成年牛卵母细胞,文章就诱导犊牛卵泡发育取得的主要研究成果和犊牛卵母细胞及其胚胎在发育等方面存在的问题及其影响因素进行了综述。     

影响牛早期胚胎体外发育的因素

早期胚胎的体外培养系统比较复杂，包括培养液、温度、气相、湿度、pH值、渗透压、离子浓度、能量来源、血清成分、光、水质和培养皿等等。不同物种的早期胚胎代谢具有差异性，而培养液的组成又极为复杂，这可能是造成各种胚胎培养基差异的根本原因。因为简单培养液不能较大限度地满足胚胎发育的需求成分，所以现在一般培养胚胎都用复合培养液。     

不同培养体系对牛胚胎体外发育的影响

采用离子霉素和6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)对牛体外成熟卵母细胞进行联合激活,激活后采用不同的培养体系进行体外培养,观察不同的培养液对牛孤雌激活胚体外发育能力的影响。3种培养体系分别为:A(0~48 h:CR1aa+3 mg/mL BSA;48 h~7 d:CR1aa+10%FBS),B(连续7 d均为SOFaa+3 mg/mL BSA),C(0~5 d:SOFaa+3 mg/mL BSA;6~7 d:SOFaa+10%FBS)。结果表明:3种培养液对卵裂率没有显著性影响,分别为87.22%,94.33%和91.30%,但囊胚发育率存在显著性差异,以A效果最好,其囊胚发育率为25.56%;C次之,囊胚发育率为11.80%;B最低,囊胚发育率为3.55%。之后选择最佳的培养液进行体外受精实验,结果表明CR1aa可用做牛胚胎体外生产的培养液。     

牛胚胎早期体外发育图谱

1988年,我院卢克焕教授在爱尔兰首次报道了体外成熟卵子经体外受精后继续在体外培养成囊胚期胚胎的成就。这种胚胎移植到母牛子宫,可发育成小牛产出。现卢教授在爱尔兰Ovamass公司及英国剑桥大学ABC公司指导及从事此项工作,进行大规模商品胚胎生产,我教研室有8名同志参加,实行国内外相结合的研究。我院畜牧试验站迄今已有11头“试管牛”陆续降生。由     

氨基酸对胚胎体外发育的影响

1 前言 氨基酸是胚胎培养液的重要成分,在培养液中添加氨基酸可促进胚胎发育[1],提高囊胚率、孵化率和胚胎质量,使胚胎的细胞数增加[2].但不同氨基酸对胚胎发育的作用不同,不同添加方式其效果也不一样.Bavister和他的同事对小鼠的研究工作,第一次揭示了氨基酸在体外胚胎培养中的作用.     

不同培养方法对奶牛体外受精卵发育的影响

用颗粒细胞单层、输卵管上皮细胞单层及中间受体兔三种方法培养奶牛体外受精后卵裂卵发育至可用于移植的桑椹胚及囊胚的百分率分别为２２．７３％、２２．３９％、２９．６０％。     

PLCγ1基因对绵羊早期胚胎体外发育的影响

旨在探究磷脂酶Cγ1（phospholipase Cgamma 1,PLCγ1）基因对绵羊早期胚胎体外发育的影响,为揭示PLCγ1基因在早期胚胎发育过程中的作用机制奠定基础。本研究选取包裹3层以上颗粒细胞的绵羊卵母细胞为试验材料,体外培养成熟后将其分为两组,利用显微注射技术将PLCγ1基因导入MⅡ期（减数第二次分裂中期）卵母细胞（n=127）中为试验组,以显微注射空载体pcDNA3.1-EGFP作为对照组（n=120）,经48 h后统计其卵裂率;并利用Ca²⁺探针Rhod 2-AM监测MⅡ卵母细胞和显微注射后16、48、72、96、120 h时各时期卵母细胞以及早期胚胎内Ca²⁺波动。结果显示,PLCγ1基因显微注射后卵母细胞被激活,卵裂率为（（19.67±0.2）%,P<0.01）,桑椹胚发育率为（（9.00±0.17）%,P<0.05）;PLCγ1基因注射后,卵母细胞和早期胚胎不同发育时期有Ca²⁺浓度变化,可观察发现Ca²⁺主要分布在胞质中且注射48 h时可达到峰值（P<0.01）。结果表明,PLCγ1基因可以引起绵羊卵母细胞发育过程中发生Ca²⁺振荡,启动其卵裂,并促使早期胚胎的继续发育。     

活性氧对胚胎体外发育阻滞的影响

自由基是含有一个不成对电子的原子团.早在1931年,Michalis就提出某些酶促氧化还原反应的中间产物为自由基,其试验证据也表明,生物体内可能存在自由基,然而直到自由基生物学迅猛发展的最近30年,自由基在机体内的产生与清除才得以重视.现在,人们已经认识到自由基与许多疾病的发生和发展密切相关.自由基主要分为活性氧自由基和活性氮自由基.文章主要介绍活性氧自由基.     

氨基酸对哺乳动物胚胎体外发育的影响

在培养液中添加氨基酸可促进胚胎发育,提高囊胚率和孵化率,增加胚胎的细胞数。本文对氨基酸在胚胎体外发育中的作用进行了综述,并对生殖道液、胚胎体外培养液和胚胎内氨基酸浓度的差异进行了比较。     

不同体细胞共培养体系对小鼠胚胎早期发育的影响

为研究小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)、颗粒细胞及子宫内膜细胞共培养体系对小鼠胚胎早期发育的影响,试验采用将小鼠体内受精2 -细胞与这些体细胞共培养的方法.结果表明,第3代MEF共培养组的桑囊胚发育率、囊胚孵化率及囊胚细胞数显著高于第1或第6代MEF共培养组(P＜0.05);颗粒细胞、子宫内膜细胞或第3代MEF共培养组的过...     

活性氧对哺乳动物早期胚胎体外发育阻滞的研究进展

哺乳动物早期胚胎体外培养过程中常发生体外发育阻滞现象，活性氧是引起发育阻滞的重要原因之一，作者综合国内外研究报道，综述了活性氧对哺乳动物早期胚胎体外发育的影响及克服发育阻滞现象的方法，为哺乳动物胚胎体外培养提供一些参考。     

昆明小鼠不同性别早期胚胎体外培养发育潜力观察

自主设计2对引物,提取已知性别小鼠肝细胞DNA,扩增雄性小鼠特有的Sry基因及雌、雄小鼠共有的ZFX基因,建立双重PCR性别鉴定方法.提取小鼠早期8细胞胚胎单卵裂球、双卵裂球DNA,分别进行双重PCR性别鉴定,选择出早期8细胞胚胎的适宜模板量;将已测性别的8细胞胚胎按照雌、雄性别分开培养,观察统计雌、雄8细胞胚胎发育至囊胚的比率.试验结果显示,与单个卵裂球DNA模板量相比,双卵裂球的模板量检出率高,两者之间差异显著(75.00%Vs 93.33%,P<0.05);经过性别鉴定的雄性8细胞胚胎比雌性8细胞胚胎发育至囊胚的比率高,两者之间差异显著(53.33%Vs 33.33%,P<0.05).结果表明,采用双重PCR性别鉴定方法,以双卵裂球的DNA量为模板能够有效的对小鼠早期8细胞胚胎进行性别鉴定;雄性胚胎在体外培养条件下比雌性胚胎具有更好的发育潜力.