环境雌激素调控的β-半乳糖苷酶酵母细胞的建立

为建立环境雌激素的酵母评价体系,将人工合成的雌激素效应元件插入pMP206质粒的上游,并将该质粒转入人雌激素受体基因重组酵母细胞,使LacZ基因置于雌激素的调控之下,以构建可用于评价环境雌激素的酵母细胞。结果表明：经DNA测序发现pMP206／ERE-LacZ报告质粒DNA框架正确。对转化子进行PCR鉴定,发现有雌激素受体基因和pMP206／ERE-LacZ报告质粒的特异性条带,说明雌激素受体基因和受雌激素调控的LacZ报告基因已重组于酵母细胞。从而证明以LacZ为报告基因的环境雌激素酵母评价细胞重组成功。     

雌激素调控的绿色荧光蛋白在酵母细胞中的表达

采用绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因,用酵母细胞构建环境雌激素(EEH)的评价体系,可敏感、快速、方便地筛选出EEH化合物。通过分子生物学技术,将GFP基因插入到pM P 206/ERE启动子CYC 1的下游,用GFP取代L ac Z基因,并转化于酵母细胞。DNA测序发现ERE-CYC 1-GFP框架正确。对转化子进行PCR鉴定,发现有雌激素受体基因(hER cDNA)和GFP基因特异条带,说明hER cDNA和GFP已重组于酵母细胞。荧光显微镜下发现大量的绿色荧光颗粒,表明GFP基因在酵母细胞中成功表达。酵母细胞经不同浓度雌二醇作用后,与GFP表达量有剂量效应关系。与其他酵母评价体系相比,以GFP为报告基因评价EEH不需要破坏细胞壁,也不需要底物,可在96孔板中完成,这为高通量筛选EEH化合物奠定了基础。     

快速筛选环境雌激素酵母细胞的试验研究

通过分子生物学技术将雌激素效应元件(ERE)基本序列插入β-半乳糖苷酶的Lac Z报告基因的上游．并将其置于重组酵母细胞雌激素受体(ER)的调控之下。结果表明：当环境雌激素作用于酵母细胞时,会使ER发生变构效应．与ERE结合使LacZ基因得以表达．其表达量与环境雌激素的污染程度具有剂量效应关系,通过检测β-半乳糖苷酶的活性,可反映环境雌激素的污染程度;与双酚A和苯甲酸雌二醇活性相比较,β-雌二醇活性最强,但双酚A活性明显高于苯甲酸雌二醇。     

人雌激素受体cDNA在酵母细胞中的表达

根据人全长雌激素受体cDNA序列,用RT—PCR方法使乳腺癌细胞MCF-7株扩增人雌激素受体基因(hER cDNA),通过pGEM—T／hER载体克隆到酵母表达载体中,并转化到酿酒酵母细胞中,用Western blot法和免疫组化法检测hER cDNA的表达。结果表明：hER cDNA在酵母细胞中成功表达,可用于建立环境雌激素的酵母细胞检测体系。     

安徽省奶牛养殖场粪便中甾体雌激素污染特征研究

[目的]研究安徽省奶牛养殖场粪便中甾体雌激素的污染特征.[方法]利用气相色谱-质谱联用测定了安徽省6个规模化奶牛养殖场奶牛粪便及养殖场周边水样和粪便堆积场土样中雌激素的种类和浓度.[结果]奶牛粪便中的甾体雌激素主要以雌酮(E1)、17α-雌二醇(17α-E2)和17β-雌二醇(17β-E2)3种形式存在,其中17α-E2的含量最高.不同生理时期奶牛粪便中雌激素排放总量分别为青年期奶牛432.90 μg/kg,泌乳期奶牛为1 114.51 μg/kg,干奶期奶牛1 540.13 μg/kg,不同养殖场中奶牛的雌激素排放总量及E1、17α-E2和17β-E2所占比例无明显差异.奶牛日平均雌激素排放17β-E2当量值为931.51μg/(头·d),以此推算可知安徽省奶牛养殖场通过粪便排放的年雌激素当量为23.24 kg/a.奶牛养殖场附近水塘水样及粪便堆积场土样中17β-E2当量总浓度分别为1 252.02ng/L和1 424.21 μg/kg,表明粪便不加任何处理堆置存放存在潜在的环境风险.[结论]该研究可为安徽省奶牛养殖场的科学管理及甾体雌激素的有效去除提供技术参考.     

phyA基因在毕赤酵母中的表达以及表达产物的检测

对获得的植酸酶基因PhyA进行TA克隆,获质粒pTA-phyA,酶切后,使其在连接体系中连接到酵母表达载体pPIC9K-InS片段上,随后将重组质粒转化给大肠杆菌,验证其成功后,再将重组质粒转化给毕赤酵母,诱导其表达,通过测定植酸酶活性,得出其表达量。     

基于SPE-HPLC的芹菜中环境雌激素检测

[目的]建立芹菜茎叶中6种环境雌激素（雌酮、17β-雌二醇、雌三醇1、7α-乙炔基雌二醇、双酚A和4-壬基酚）的高效液相色谱检测方法。[方法]样品切碎榨汁后,用超声波振荡提取,固相萃取小柱浓缩净化,对硝基苯甲酰氯柱前衍生,高效液相色谱法荧光测定。[结果]6种环境雌激素的线性范围为8.3～1 000.0μg/L,相关系数r=0.998 8～0.999 9,最低检出限量为3.7～8.3μg/L。样品加标平均回收率在89.60%～97.13%,相对标准偏差RSD均小于2.9%。[结论]该研究建立的方法同时测定芹菜茎叶中的6种环境雌激素,结果满意。     

酵母线粒体基因出现功能性放松

线粒体是真核生物通过有氧呼吸过程产生生物能量的工厂。这一重要细胞器相关基因的突变或缺失会使生物体产生重要功能缺陷。     

重组雌激素受体基因酵母细胞检测牛尿液中β-雌二醇残留的方法

为探索畜禽产品中雌激素残留的检验方法,加强对畜禽生产过程中激素添加的监控,本研究选择了在我国几种常见影响比较大的合成雌激素-β-雌二醇(E2)为研究对象,建立用于测定动物尿液中雌激素的重组基因酵母检测法。结果表明本方法简单、有效,能够作为雌激素残留检测体系的有益补充。     

畜禽养殖废水处理技术的研究与应用

畜禽养殖污染是造成我国农村面源污染的主要原因之一,针对这种污染现状,近年来出现了许多废水处理方法。在概括分析我国畜禽养殖业污染现状的基础上,重点介绍了畜禽养殖业废水的几种主要处理工艺技术及其应用实例。     

不同季节生态沟净化养殖废水能力对比研究

研究了不同季节生态沟对低浓度养殖污水净化效果,结果表明：在夏秋季,生态沟对COD和TN的削减率均达到86%以上,对于TP的削减率高达98%以上。夏季生态沟对养分的削减能力要优于其他处理,秋季其次,然后是春季,最差是冬季。即使水生植物进行了刈割,生态沟依然能发挥一定的净化效果。随着生态沟的运行时间积累,底泥中养分含量快速增加。初始阶段增加最快,但随着生态沟的延长,3种污染物的浓度急剧下降,到生态沟末端,底泥的养分含量变化已经不显著。生态沟中初始段的水生植物的生物量最高,随着生态沟的延长生物量显著下降,末端点最低,水生植物吸收N素产生的削减占生态沟总削减量的28%,吸收P素占总削减量的8.7%。     

电解氧化法去除养殖废水中抗生素和激素研究

通过研究三维电极的电解氧化法对模拟养殖废水中抗生素、激素的去除影响和处理效果.结果表明:对抗生素、激素去除率的影响大小顺序表现为电解时间,初始pH和曝气时间.最优试验参数条件为电解电压5V,电解时间2 min,初始pH值为9,曝气时间3h.最优条件下,喹乙醇、土霉素、四环素、金霉素的去除率分别为99.1％,90.8％,97.7％和90.7％.少量的柠檬酸(0.02 mol/L)、乙酸(0.175 mol/L)能够提高去除效果;加入0.02 mol/L十二烷基磺酸钠(SDS)能够显著提高喹乙醇去除效果,但是会对土霉素、四环素、金霉素的去除效果产生不同程度的抑制.     

畜禽废水胁迫对芦苇生理特性的影响

以两种浓度畜禽废水（高浓度畜禽废水原水和经一倍稀释的中浓度畜禽废水）胁迫湿地植物芦苇,研究其对芦苇根系活力、游离脯氨酸含量、丙二醛（MDA）含量以及质膜透性等生理生化指标的影响.结果表明,高浓度畜禽废水较中浓度畜禽废水对芦苇生理特性的影响更为强烈,两种浓度畜禽废水胁迫均促使芦苇根系活力明显上升、游离脯氨酸含量在急速下降后稳定在一个较低水平、MDA含量稳中有降、电解质渗漏现象不明显.由此说明芦苇在畜禽废水胁迫下具有较强的抗逆性和耐受性,可作为人工湿地处理畜禽废水的主要植物之一.     

畜禽废水胁迫对芦苇叶绿素含量及抗氧化酶系统的影响

采用自然条件模拟实验，以两种浓度畜禽废水（高浓度畜禽废水原水和经一倍稀释的中浓度畜禽废水）胁迫湿地植物芦苇，研究其对芦苇叶绿素含量及其抗氧化酶系统的影响。结果表明，高浓度畜禽废水较中浓度畜禽废水对芦苇的影响更大。两种浓度畜禽废水胁迫均促使芦苇叶绿素含量下降、叶绿素a／b值上升、CAT活性下降、POD活性急速下降后逐渐上升，到处理末期时与对照基本相同、SOD活性明显上升。说明畜禽废水胁迫对芦苇的影响较小，芦苇在畜禽废水胁迫下具有较强的抗逆性和耐受性．如果将其运用于我国集约化畜禽养殖业废水的处理，将极大地缓解我国畜禽养殖业发展与环境污染之间的矛盾。     

养殖业废水人工湿地处理法净化效率的探讨

养殖业废水中有机物浓度和N、P含量高,并且含有重金属和残留兽药成分等,仅经过常规处理不能直接排放或农用。人工湿地处理法具有易于建设、运行费用低、耗能少、维护方便和运行过程缓冲能力强等特点,适合用于养殖业废水的二级或三级处理。针对养殖业废水的特点,分析了影响人工湿地法处理养殖业废水的各种因素、不同湿地植物对污染物的净化能力和最佳的适用条件等,为建造适宜的人工湿地生境,提高养殖业废水处理效率提供参考。     

糖蜜酵母废水厌氧处理研究

[目的]研究蜜糖酵母废水厌氧处理工艺。[方法]采用UASB工艺来处理糖蜜酵母废水,降低其COD。在进行厌氧处理前,通过好氧剩余污泥的预处理,调节水样的pH值。[结果]该工艺处理效果较好,对SO42-有高达69%的去除率,同时COD也能下降50%,而且不用再投加碱。采用预处理,有利于UASB处理糖蜜酵母废水,提高COD去除率,使其稳定在60%左右。[结论]该研究为蜜糖酵母废水厌氧处理提供了试验参考和理论依据。     

基于GIS的北京市密云县畜禽养殖污水污染物浓度空间分布

畜禽养殖场排放污水的浓度高，排放量较大，已成为对地表水体水质的威胁，本研究以北京市惟一地表饮用水水源地-密云县畜禽养殖场排放污水中污染物浓度为研究对象，应用GPS及GIS技术，直观呈现并分析其浓度空间分布规律，为水源地政府制定、调整畜牧业布局，更好保护密云水库水质提供科学的依据。     

江西省畜禽养殖废水及环境中抗生素残留现状调查

[目的]调查江西省畜禽养殖废水及环境中抗生素残留现状.[方法]建立了高效液相色谱串联四极杆质谱对四环素(TC)、金霉素(CTC)、磺胺二甲嘧啶(SMT)、磺胺甲噁唑(SMX)、诺氟沙星(NFC)、氧氟沙星(OFC)6种抗生素的检测方法,对江西省南昌县12个规模化养猪场养殖废水及下游水环境样品进行调查.[结果]6种抗生素在养殖废水中都有检出,最大检出浓度分别为0.110、0.135、0.106、0.181、0.024和0.911μg/L,以氧氟沙星最高;在下游水环境检出率分别为58.3％、33.3％、66.7％、75.0％、41.7％和100.0％,氧氟沙星检出率最高.[结论]下游水环境中抗生素残留量总体低于养殖废水,四环素类和磺胺类抗生素在少数养殖场下游环境水体中有一定富集.     

三种水生植物对养殖废水中氨氮的净化效果

为了解3种常见水生植物对养殖废水中氨氮(NH_3-N)的去除能力,通过模拟试验研究了芦苇(Phragmites australis)、水葫芦(Eichhornia crassipes)、蕹菜(Ipomoea aquatica)对养殖废水中氨氮的净化效果。结果表明,3种供试水生植物对养殖废水中氨氮的净化能力大小为芦苇-水葫芦组合芦苇-蕹菜组合水葫芦蕹菜芦苇。在处理15 d后,供试的3种水生植物对养殖废水中氨氮的净化效率为44.0%~76.5%,而对照组为36%~45%,供试水生植物对养殖废水中氨氮有较强的净化能力。