松材线虫与拟松材线虫分泌的纤维素酶系研究

采用羧甲基纤维素钠(CMC)、微晶纤维素(MC)和水杨素(SC)三种底物,用刚果红染色法和DNS法分别定性和定量分析了松材线虫和拟松材线虫分泌物中纤维素酶系组分和酶活力.结果表明,松材线虫和拟松材线虫分泌物中存在完全降解纤维素所需的3种酶系组分:内切-β-1,4-葡聚糖酶、外切-β-1,4-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶,松材线虫分泌物中三种酶活力明显高于拟松材线虫酶活力.研究结果为更好的解释松材线虫致病机理提供了科学数据.     

松材线虫提取液和分泌液中纤维素酶定性检测

纤维素酶Ｃｅｌｌｕｌａｓｅ已被证实在松材线虫Ｂｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓｘｙｌｏｐｈｉｌｕｓ（ＳｔｅｉｎｅｒｅｔＢｕｈｒｅｒ）Ｎｉｃｋｌｅ致病过程中起重要作用。通过多种方法对这一特异性物质进行生化检测，从中筛选出一种简单灵敏的检测方法——纤维素酶扩散法。该方法以羧甲基纤维素钠为酶底物，超薄层琼脂板为反应板，刚果红为染色剂，乙酸为中止反应剂。用这种方法分别以松材线虫虫体提取液和分泌液进行纤维素酶的定性检测，结果均呈阳性反应，说明松材线虫虫体含纤维素酶，且向体外分泌。这对区分松材线虫和拟松材线虫Ｂｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓｍｕｃｒｏｎａｔｕｓ（ＭａｍｕｙａｅｔＥｎｄａ．）两个相似种及松材线虫病的诊断和检疫都有重要意义。     

松材线虫纤维素酶的分离纯化及性质研究

以浙江省松材线虫病疫区马尾松样品中分离得到的松材线虫为研究对象,对其分泌物中纤维素酶的活力和酶学性质进行分析,并与试验筛选出的伴生真菌所分泌的纤维素酶进行对比。试验结果证明,两者在酶促反应最适温度、酶促反应最适pH值、金属离子对酶活力影响方面均有明显差异。     

松材线虫染色观察及植物凝集素对松材线虫作用的初步研究

研究了4种染色剂对松材线虫的染色效果,结果表明,虎红和水溶性苯胺兰对松材线虫的染色效果好,虫体全身着色且着色较深,而亚甲基蓝和结晶紫对松材线虫的染色能力较弱,只在头部和尾部着色明显;初步研究了刀豆凝集素、麦胚凝集素和花生凝集素对松材线虫的作用,结果显示,植物凝集素处理后,松材线虫初期均表现出活动加强、幅度增大,部分线虫身体卷曲呈"S"状或"8"字状,部分线虫出现聚集现象,随着处理时间的延长,松材线虫的死亡率逐渐上升,4.0mg/mL的刀豆凝集素、麦胚凝集素和花生凝集素分别处理10min,松材线虫的死亡率分别为100%、80%和65%。该研究为松材线虫的形态观察及防治提供了参考。     

松材线虫和拟松材线虫繁殖能力差异研究

松材线虫作为外来入侵种,逐步取代拟松材线虫占据生态位。初步研究表明这可能与两种线虫的繁殖能力差异关系密切。本研究采取了两种方法,即离体条件竞争试验和体内竞争试验比较二者繁殖力。结果表明,松材线虫的繁殖水平明显高于拟松材线虫。松材线虫和拟松材线虫混合物长时间培养后,松材线虫逐步竞争淘汰拟松材线虫。除此以外,离体培养和体内竞争结果均表明,竞争条件下松材线虫的繁殖力高于非竞争条件。     

松材线虫与拟松材线虫迁移能力的比较

松材线虫病,又称松树萎蔫病、松树枯萎病,是由松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)引起的一种毁灭性森林病害。松材线虫原来广泛分布于北美地区,但在原产地并未造成严重危害。1905     

松材线虫与拟松材线虫杂交试验及后代繁殖力研究

松材线虫Bursaphelenchus xylophilus和拟松材线虫B.mucronatus是伞滑刃属内两个独立的种,均可引起松材线虫病。松材线虫与拟松材线虫能否进行种间杂交在学术界一直存在争议。采用4个虫株在实验室条件下开展了杂交试验及杂交后代繁殖力研究。结果表明:实验室条件下松材线虫和拟松材线虫可成功杂交,他们之间未发展出严格的生殖隔离,二者极可能来源于同一祖先。     

拟松材线虫研究进展

松材线虫和拟松材线虫共同构成松材线虫复合群体,为松材线虫病的病原物。拟松材线虫危害过去没有引起足够重视,相关研究工作不如松材线虫细致。近年来,随着拟松材线虫致病性增强现象不断被报道,人们逐步加强了拟松材线虫研究。本文从拟松材线虫分类学特征、致病性研究及与松材线虫关系等角度对拟松材线虫研究进展进行综述,并展望未来可能的研究热点。     

松材线虫和拟松材线虫不同株系线粒体DNA RAPD分析

对松材线虫7个株系和拟松材线虫2个株系的线粒体DNA随机扩增多态性分析结果显示,松材线虫和拟松材线虫种间和种内都表现出很大的变异性,但种间变异明显大于种内变异,因而支持将松材线虫和拟松材线虫划分为两个不同的种.两个拟松材线虫株系(法国株系和日本株系)之间的相似值和松材线虫各株系间的相似值极为接近,由此看来,这两个株系的变异为种内变异,应同属于一个种.聚类分析的结果表明,松材线虫和拟松材线虫系两个明显不同的类群,即松材线虫类群和拟松材线虫类群.松材线虫类群又分为两个亚组,一个是以日本株系为代表,另一个是以北美洲(美国和加拿大)株系为代表.     

国内部分地区松材线虫和拟松材线虫基因多态性的RAPD分析

采用SDS法提取线虫基因组DNA,分别选取了6种随机引物对部分地区的10株松材线虫和10株拟松材线虫进行随机扩增和亲缘关系比较。RAPD的结果可以明显区分松材线虫和拟松材线虫,与形态学分类相吻合。聚类分析的结果也表明,线虫种内和种间均存在差异,但种间差异明显大于种内差异,同种线虫在同一地区或临近地区的同源性明显高于其它地区,同一地区内寄主对线虫种类分布的影响较小。该方法具有所需样品量少、检测灵敏度高、结果准确等优点,为松材线虫种群的亲缘关系、传播途径及其检测防疫等方面提供一种灵敏、可靠的研究方法。     

药剂防治松线虫病的研究

用呋喃丹、克线磷、涕灭威等杀线虫剂进行沟施,防治松树线虫病的效果达９６％～１００％;氧化乐果、果树宝杀虫剂,注射防治松树线虫病的效果为９２％以上;林间应用呋喃丹、涕灭威,其防治效果达６７．５％～１００％,防治后的松林不但枯死率下降,而且生长良好,枝茂叶盛,郁郁葱葱。     

Interspecific hybridization between Bursaphelenchus xylophilus and Bursaphelenchus mucronatus

Bursaphelenchus xylophilus is the pathogen that causes pine wilt disease, which has greatly damaged forests and ecosystems in countries of East Asia and Europe.Bursaphelenchus mucronatus is closely related to B. xylophilus in morphology and host plant specificity. A longrunning debate has existed regarding whether these two species can successfully produce hybrid offspring. In the present study, we performed in the laboratory, hybridization of two B. xylophilus nematode isolates from China and Japan and three B. mucronatus isolates from China, Japan and France. Nematode isolates of B. xylophilus were successfully crossed with B. mucronatus isolates, and the rate of hybridization was relatively high; however, some hybrid offspring died. Successful hybridization occurred between B. xylophilus and B. mucronatus isolates from China, and 22 generations of hybrids were produced. All F1 hybrids could be backcrossed with their parents and produce offspring. Variation in mucro length among the hybrid offspring and their parents was observed. The hybrid offspring and their parents were inoculated into 3-months-old black pine(Pinus tunbergii) seedlings. Weaker pathogenicity of hybrid offspring was observed compared with that of their parents, and significantly fewer offspring nematodes than parents were reisolated from pines. Therefore, the offspring of B. xylophilus and B. mucronatus may exist in the forest and could influence disease epidemics.     

松材线虫病研究进展

概述了松材线虫的生物学特性、行为学、致病机理等方面的研究动态，并介绍了松材线虫病环境影响评价的研究进展，提出了目前对松材线虫病的环境影响经济评价尚属空白，在松材线虫病对环境影响方面缺乏深入的研究。对其致病主要机理仍不清楚，需进一步进行研究。     

松材线虫与拟松材线虫的几种鉴别方法

在形态、生化与分子以及致病性3个方面综述了松材线虫和拟松材线虫的鉴别方法,旨在为松材线虫病的防治和进出口检疫提供更多更安全的检疫方法,同时为更好的区别两种线虫提供理论依据。     

松材线虫病综合防治技术研究

1996－1999年在浙江省富阳市，新昌县等地开展了松材线虫病的综合防治技术研究，明确了松褐天牛补充营养，携带和传递松材线虫特性，研究出新型松褐天牛引诱剂（M99），并取得应用预测和防治松褐天牛的显著效果，采用松材线虫早期诊断，病木伐除清理，引诱监测，化学防治等综合防治技术扑灭了一个松材线虫病新发生地，建立了6700hm^2的综合防治示范林，总结出包含有八章五十一款的“浙江省松材线虫病工程治理技术规程”。     

庐山自然保护区预防松枯萎病对策

通过庐山周边几个县松枯萎病发生现状调查,分析庐山自然保护区有易感病寄主,传播媒介,物流、人流的频繁活动等因素存在,山上松林极可能发病。提出严格检疫,建立监测网和检测点,积极消灭等措施和预防对策。     

松材线虫病在辽宁省的潜在危险性分析

参照国内外专家对有害生物危险性分析方法，结合辽宁省森林资源状况，从松材线虫病的国内分布情况、在我省的潜在危险性、寄主植物的经济重要性、传播扩散的可能性以及危险性的管理难度等几个方面进行定性和定量分析，对松材线虫病的危险性做出综合评价。评价结果表明松材线虫病在我省属于高度危险的林业有害生物。     

桐庐县松材线虫病预防形势与对策初探

根据桐庐县特定的区域特点，分析了桐庐县松材线虫病预防工作的严峻形势，总结了桐庐县多年来松材线虫病预防工作的实践和取得的成效，并从保护森林生态环境和杭州市旅游西进的战略高度，提出了加强网络建设，强化动态监测；加强内查外拒，严防病源人为传播；加快松林改造，构建自然屏障等预防对策。