植冰前后平衡时间对小鼠胚胎一步细管冷冻解冻效果的影响

本试验以 1 5mol/L乙二醇为小鼠胚胎一步细管冷冻保护剂 ,观察小鼠胚胎在植冰前后不同的平衡时间的冷冻解冻效果 结果表明 ,以植冰前平衡 5min更利于胚胎在体外培养发育 ,其发育率为 83 65% ,而植冰前平衡 >10min ,其发育率仅为 4 5 65% ,二者差异极显著 ;植冰后平衡时间对小鼠胚胎一步细管冷冻效果无显著影响 ( p >0 0 5)     

奶牛冷冻胚胎细管内一步解冻法的应用效果

奶牛冷冻胚胎细管内一步解冻法的应用效果贺文杰和彦利徐照学王二耀辛晓玲李峰（河南省农业科学院畜牧兽医研究所，郑州４５０００２）为了在畜牧业生产中推广应用冷冻胚胎移植技术，就必须简化冷冻胚胎的解冻、脱除冷冻保护剂的操作步骤。为此，我们于１９９４年开展了该...     

奶牛一步细管法冷冻胚胎移植试验

以PBS+20%FCS+1.5 mol/L乙二醇(EG)+0.1 mol/L蔗糖(SU)液作为冷冻液,对122枚奶牛胚胎进行一步细管法冷冻,管内解冻,然后移植给122头受体黄牛,结果有49头供体牛妊娠,受胎率为40.09%,产犊率38.52%.结果表明一步细管法是一种可行性良好的便于在农牧区奶牛胚胎移植中推广的方法.     

冷冻液平衡时间和复温时间对小鼠胚胎冷冻解冻效果的影响

本试验以 1 5mol/L乙二醇为小鼠胚胎一步细管冷冻保护剂 ,观察小鼠胚胎在冷冻液中平衡时间和复温时间的冷冻解冻效果 .结果表明 ,以冷冻液中平衡 6 8～ 10 1min和细管解冻时在室温中停留 15s更利于胚胎在体外培养发育 ,其发育率为 86 96 %     

小鼠半胚冷冻的研究

对半胚冷冻的方法和条件进行了系统研究，证明采用下述程序冷冻小鼠半胚可显著提高解决半胚的成活率：①在含10%甘油的磷酸缓冲液中平衡35-40min；②在-6.5℃7或-7℃诱发结晶；③以0.05℃/min的速度缓慢降温15min；④以0.3℃/min的速度降温至-35℃投入液氮；⑤在30-35℃的水浴中解冻；⑥在含不同浓度（6.6%,3.3%,0%)甘油和0.3mol/L蔗糖的磷酸缓冲液中平衡35-40min，却除甘油。将按上述程序冷冻-解冻的16对半胚移植后，获半胚鼠12只，其中5对为同卵双生。     

影响猪胚冷冻效果的若干因素的研究

屠宰（或手术）采取３￣７日龄猪胚，分别就胚胎不同发育时期，２５℃和－７℃两个冷冻起始温度，甘油、丙二醇和乙二醇３种防冻剂及６％、８％、１０％３种甘油浓度进行冷冻比较。结果表明，冷冻解冻后及解冻后在Ｍ１６＋１０％ＦＣＳ中培养２４小时的胚胎存活率均与胚胎发育时期有关。胚胎存活率以孵化囊胚最高，分别为５８．８％和５２．９％，高于校内发育（２４．４％和１７．１％）或体外培养发育（２１．４％和１７．９％）的     

不同解冻方法对猪精液冷冻效果的影响

以姜曲海种公猪冷冻精液为研究对象,观察了使用2种不同解冻方法对精液品质及体外受精胚胎发育的影响.试验结果表明,冷冻精液从液氮取出后,使用37℃水浴30s解冻在精子运动度、质膜完整率、顶体完整率和体外受精胚胎发育率方面均显著优于在室温放置20s后迅速投入37℃水浴10s解冻(P＜0.05).而与新鲜精液体外受精卵裂率和4细胞胚胎发育率相比,37℃水浴30s解冻方法与对照组无显著差异(P＞0.05).表明37.C水浴30s解冻方法优于室温放置20s后迅速投入37℃水浴10s解冻方法.     

猪精液0.5 ml细管快速冷冻和解冻方法的优化

 【目的】优化冷冻-解冻方法,提高0.5 ml细管快速冷冻保存猪精液的质量。【方法】冷冻方法：分别将细管水平置于液氮面上方3、5、7、9和11 cm处,每一水平位置细管分别熏蒸3、5、10、15和20 min后投入液氮保存,37℃×30 s水浴解冻,确定最优冷冻方法;在选择最优冷冻方法的基础上,分别采用37℃×30s(对照组)、42℃×25 s、47℃×20 s、52℃×15 s、57℃×10 s和62℃×5 s共6种方法水浴解冻,确定最佳解冻方法。【结果】采用3 cm×10 min冷冻方法,解冻0、8 h精液中精子活率、质膜完整率和顶体完整率均最高。采用相对“高温短时”解冻,精子活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体膜电位均较高,同时丙二醛浓度降低;57℃×10 s和62℃×5 s解冻的精子各项指标无显著差异（P＞0.05）,但前4项指标显著高于对照组（P＜0.05）,丙二醛浓度显著降低（P＜0.05）。【结论】优化猪精液0.5 ml细管快速冷冻的冷冻和解冻方法可以显著提高解冻质量,采用3 cm×10 min冷冻、57℃×10 s或62℃×5 s解冻方法效果最佳。     

不同解冻温度和时间对肉牛细管冻精精子活力的影响

[目的]寻找肉牛精子最佳解冻温度和解冻时间。[方法]将54支利木赞公牛细管冻精在不同温度、不同时间下进行解冻,对解冻后的精液品质进行检测。[结果]解冻后精子活率随解冻温度升高(40～75℃)而升高,而畸形率随解冻温度升高而降低,但高温下(90℃)解冻,精子活率显著低于解冻温度为40～75℃(P<0.05),畸形率显著高于解冻温度75℃(P<0.05);低温(40、75℃)下随着解冻时间延长,精子活率增高,但差异不显著;高温(90℃)下解冻,精子活率与解冻时间长短关系更为明显,时间越长,精子活率越低。精子畸形率、存活时间与解冻时间无显著关系。[结论]在生产实践中根据具体情况选用适合的解冻温度和解冻时间,建议使用75℃/3～5s解冻。     

不同冷冻-解冻处理方式对猕猴桃品质的影响

以‘徐香’猕猴桃为原材料,系统探究不同冷冻温度（-20 ℃、-40 ℃、-50 ℃和-80 ℃）及解冻温度（4 ℃、15 ℃、25 ℃和35 ℃）组合对猕猴桃主要理化性质及香气成分的影响。结果表明：不同冷冻-解冻处理不会影响猕猴桃的色度;与鲜切猕猴桃一致,4 ℃/-50 ℃、4 ℃/-80 ℃和15 ℃/-80 ℃处理条件下猕猴桃的可溶性固形物含量均为16.0 oBrix。鲜切猕猴桃的可滴定酸和维生素C含量分别为1.22 g/hg 和45.30 mg/hg,处理后猕猴桃的可滴定酸含量为1.06~1.33 g/hg,维生素C含量降低17.62%~33.89%。不同处理后猕猴桃的多酚类物质损失率为20.44%~31.72%,且不同组合处理之间无显著差异。同时,不同处理对猕猴桃香气成分的种类和含量有一定损失,且较低的冷冻温度和解冻温度有利于香气成分的保持。综合考虑,-50 ℃/4 ℃和 -80 ℃/4 ℃冷冻-解冻组合方式可有效保持猕猴桃的品质,为猕猴桃的贮藏保鲜提供了技术支撑。     

小鼠冻胚分割试验

研究了分割所用溶液、冷冻前胚胎发育时期和分割后将半胚是否装入透明带对冻胚分割效果的影响。结果证明:①将解冻囊胚分割后,无论是否将半胚装入透明带对冻胚分割的效果均无显著影响(P>0.05);②在PBS中分割解冻桑椹胚和囊胚的效果无显著差异(P>0.05);③与分割解冻桑椹胚相比,在蔗糖液中分割解冻囊胚可显著提高冻胚分割效果(P<0.05)。将在蔗糖液中分割冻囊胚获得10对半胚移植于5只受体,结果有2只妊娠,共获得半胚仔鼠6只,其中2对为同卵双生。     

亚硒酸钠对小鼠附植前胚胎发育能力的影响

为探讨不同浓度的亚硒酸钠对小鼠体重、超排效果及其胚胎后续发育的影响,将6～7周龄的小鼠随机分为4组,1组为对照组,其余3组按小鼠每千克体重分别注射0.30 mg(低剂量组)、1.50 mg(中剂量组)和2.25 mg(高剂量组)的亚硒酸钠溶液,再分别测量各组小鼠的体重及观察、记录各组小鼠的超排效果和胚胎体外发育情况.结果显示:(1)高剂量组小鼠体重变化量(-0.31 g)显著低于低剂量组(7.95 g)、中剂量组(8.65 g)和对照组(11.06 g)(P＜0.05),而低剂量组、中剂量组与对照组之间无显著差异(P＞0.05);(2)不同剂量亚硒酸钠处理的小鼠经超排后回收的平均可用胚胎数,各组之间相比均无显著差异(P＞0.05),但高剂量组冲出的胚胎经体外培养后的囊胚发育率(17.6％)显著低于对照组(27.6％)(P＜0.05),而与低剂量组(24.3％)和中剂量组(20.6％)差异不显著(P＞0.05).以上结果表明,高剂量的亚硒酸钠不利于小鼠胚胎的发育,其作用机制需要从细胞和分子水平做更深入的研究.     

激素对小鼠胚胎体外发育的影响

探讨小鼠胚胎体外发育过程中,2种激素(孕马血清促性腺激素PMSG、人绒毛膜促性腺激素HCG)对早期胚胎发育的影响。取原核期胚胎培养于不同的培养体系中,确定适合胚胎发育的最佳体外培养体系;在胚胎培养液中加入不同浓度的激素,观察激素对体外发育的影响。试验发现含10%胎牛血清的人输卵管液培养液(HTF)是该试验条件下小鼠早期胚胎发育的最佳培养液;在该培养液中添加不同浓度和不同种类的激素后,各发育阶段胚胎的发育率与未添加激素的对照组相比均有所下降,但未发现浓度依赖性。由此可认为,高浓度的PMSG和HCG对体外培养的胚胎发育有抑制作用,可降低胚胎发育到各阶段的比例,尤其是显著降低了囊胚的发生率。     

化学培养液对小鼠原核胚体外发育的影响

本试验用０．１ｍＬ培养液在３７℃，５％ＣＯ２条件下培养昆明小鼠原核胚。结果表明，用ｍＳＯＦ和ＰＬ３培养小鼠原核胚，４－细胞发育率分别为１０％和７７％。以后停止发育；ＰＬ３和ＰＬ３培养小鼠原核胚，每２４ｈ换１次培养液，结果发育到桑椹胚和囊胚的百分离分别是２７．５％和３８．５％；用ｍＭＴＦ，ｍＭＴＦ＋２０ＡＡ，ｍＭＴＦ＋Ｎｏｎ＋Ｇｌｎ，ｍＭＴＦ＋Ｎｏｎ，ｍＭＴＦ＋Ｅｓｓ＋Ｇｌｎ培养小鼠原核胚，发育率分     

小鼠胚胎卵巢体外培养中卵细胞的生长及其数量的调节

利用胚胎卵巢体外长期培养技术研究了小鼠卵巢中卵细胞的生长发育状况。材料取自B6D2雌小鼠F1代胚胎，服龄为11．5日和13．5日。用Orcein染色法鉴别雌雄。分离出的卵巢培养12～14d。5d后换一次培养液，以后每2d换1次。培养8d后，13．5日龄胚胎卵巢中卵细胞已形成与体内相似的有规则的分布。在卵巢皮质部有大量的卵母细胞和少量体细胞，而在髓质部只有少量的卵母细胞和大量的体细胞。大量的未生长的小卵母细胞（直径＜25μm）紧密地分布在皮质的外侧，而生长印母细胞则主要分布在皮质的内侧和髓质。11．5日龄胚胎卵巢经过10～12d培养，没有形成上述分布规律，所有观察到的卵细胞都是生长中的卵母细胞。卵细胞数量也显著低于13．5日龄胚胎的卵巢（34．4±6．53比566．7±49．5）。用IGF－I和FSH处理11．5日龄胚胎卵巢可显著增加其卵细胞的数量（分别为88对55，P＜0．01和140对20，P＜0．005）。较老龄的胚胎卵巢组织对于11．5日龄胚胎卵巢卵细胞数量均有促进作用，其中以16．5日龄胚胎卵巢的作用较强（165对65，P＜0.005）。实验结果表明小鼠胚胎发育到达11．5～13．5日龄时期对于卵巢来说是获得形成卵巢内卵细胞分布规律能力的重要时期。11．0日龄胚胎卵巢缺乏某些因子的作用，因而不能在体外正常发育。     

丙酸睾酮对鸡胚性腺发育和成活率的影响

研究丙酸睾酮的剂量与注射时间对早期鸡胚性腺发育和成活率的影响。选择320枚种蛋(蛋重60.00 g±0.10 g),在入孵的0、3、6、9 d分别向蛋清内注射0.00、0.05、0.10和0.20 mL丙酸睾酮,共16个处理水平,孵化18 d后,形态学观察鸡胚性腺发育,统计其成活率及胚重。结果表明,丙酸睾酮对鸡胚性腺发育有显著影响(P<0.05),公鸡左侧睾丸或母鸡右侧卵巢发育均受到不同程度的影响。鸡胚性腺异常占总数的19.88%,其中公鸡占性腺异常总数的6.02%,母鸡占性腺异常总数的13.86%,且存在0.60%间性。随处理剂量的上升,鸡胚成活率及平均胚重不断下降,且随处理时间的延长,鸡胚成活率及胚重受到的影响程度逐渐降低。     

小鼠超数排卵与早期胚胎体外培养效果研究

为探讨冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响,分别采用子宫切碎法与子宫冲胚法对超排小鼠进行了冲胚。结果表明:子宫冲胚法的平均采卵数和平均获胚数极显著高于子宫切碎法(P0.01),而平均可用胚数显著高于子宫切碎法(P0.05),两种方法的平均未受精卵数则差异不显著(P0.05),说明冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响显著,且子宫冲胚法明显优于子宫切碎法。小鼠早期胚胎发育观察结果表明:超排处理后,在公母鼠合笼后76~79.5 h采胚,胚胎大多处于桑椹胚期,而在公母鼠合笼后88~91.5 h采胚,胚胎大多处于致密桑椹胚期与囊胚期;采用TCM199+15%胎牛血清培养液对小鼠胚胎进行体外培养是可行的。     

用抗雄性特异性单克隆抗体鉴别小鼠胚胎性别

用实验室筛选的雄性特异性单克隆抗体鉴别小鼠胚胎性别时,阳性符合率为67.31% ,阴性符合率为82.22% 。将胚胎在单抗中孵育的时间从105～120 min 减至45 m in,相应地减少了难以分辨雌雄的荧光中间型胚胎数量。为了统一对胚胎中荧光斑的描述,根据荧光组成的基本形状和强度将胚胎荧光型分为8种,按荧光型的不同将胚胎判为阴性和阳性,并逐一用PCR法检测胚胎的真实性别,以检验免疫学鉴别胚胎的符合率,从而建立了更符合客观实际的免疫学鉴别胚胎的标准,提高了小鼠胚胎性别鉴别的效率。