应用荧光抗体法诊断猪瘟的研究 Ⅲ.仔猪肾细胞培养-荧光抗体法诊断猪瘟的研究

用猪扁桃体冰冻切片荧光抗体法诊断人工感染猪瘟及在应用上的几个问题已作过报导。自然感染的猪瘟病例,由于在病的后期往往因细菌性感染,使扁桃体化脓,以致扁桃体隐窝上皮细胞部分或全部破坏;或因扁桃体的采取、处理不当等,都影响检出率。     

应用荧光抗体法诊断猪瘟的研究 Ⅱ有关扁桃体冰冻切片荧光抗体法在应用上的几个问题

前报已报导了用免疫荧光抗体法对人工感染猪瘟猪扁桃体冰冻切片诊断猪瘟的研究结果,证明这是一种特异的、快速的实验室诊断方法。本报提出了制备荧光抗体用高免血清效价的测定方法、活体扁桃体病料的采样方法、感染猪瘟病毒猪扁桃体免疫荧光的检出时间和猪瘟兔化弱毒疫苗接种后是否产生免疫荧光等研究结果。     

应用仔猪肾细胞培养荧光抗体法诊断猪瘟的研究(摘要)

我们曾经进行了应用猪扁桃体冰冻组织切片荧光抗体法诊断猪瘟的研究,证明在人工感染猪瘟强毒后72～96小时检查到阳性反应,对急性猪瘟的早期诊断可以达到快速、特异的诊断目的。但是自然感染病例在病的后期往往由于细菌的继发感染,扁桃体化脓导致扁桃体隐窝上皮细胞部分或全部破坏,或扁桃体的采取、处理不当等都可影响检出率。基于上述原因,又开展了应用细胞培养免疫荧光抗体法诊     

用冰冻切片荧光抗体法诊断猪瘟自然病例

采用冰冻切片荧光抗体法对猪瘟自然病例进行诊断,收到了满意的效果,现报告如下。材料和方法一、被检材料:来自全省几个地、市、县的养猪场和个体饲养户的发病猪,主要采集扁桃体和肾脏。大部分病料在本站剖检采集,部分病料由低温保存送检。二、荧光抗体:由中国兽药临察所提     

猪瘟荧光抗体的制备及应用

用硫酸铵盐析法从抗猪瘟血清中提取免疫球蛋白，应用搅拌法标记荧光素，硫酸铵盐析、Sephadex G-25层析和肝粉吸收三法结合去除标记物之游离荧光素，制备猪瘟荧光抗体。经测定，标记的荧光抗体工作稀释度为1：16～1：32。用标记的荧光抗体诊断猪瘟，从39份可疑病料中检出阳性病例12份。     

荧光抗体技术在猪瘟净化中的应用研究

猪瘟(HC)是由黄病毒科瘟病毒属的猪瘟病毒引起猪的一种高度传染性、致病性病毒病.控制和净化猪瘟的关键在于采取有效方法尽快查出抗原体,找出"带毒猪"并淘汰.采用荧光抗体试验(fluorescentantibody teclmology,FAT)检测猪瘟病毒是一种灵敏而又特异的诊断方法.因此,2005年应用FAT技术在广西一些规模化猪场进行了检测猪扁桃体猪瘟病毒、清除带毒猪、控制与净化猪瘟的试验,达到了预期的净化效果.     

螢光抗体技术在猪瘟诊断中的应用

现在日本采用萤光抗体法诊断猪瘟。萤光抗体技术是将抗体(或抗原)标记上萤光色素,与相应抗原(或抗体)结合后,在萤光显微镜下,呈萤光现象的一种特异免疫萤光反应方法。诊断猪有三种作法。 1.组织切片法:从病猪采取扁桃体的薄     

荧光抗体与酶标抗体诊断野外猪瘟的比较

酶标抗体技术是继荧光抗体技术之后发展起来的又一先进的诊断技术。它的快速性,敏感性及特异性均不亚于荧光抗体技术。因此已逐渐广泛地应用于畜牧兽医诊断领域中。1980年以来,国内先后发表了用荧光抗体技术和酶标抗体技术诊断猪瘟的报告,对这两种快速诊断技术都做了大量的工作和充分的肯定。并且在全国各地进行了推广应用。两种诊断试剂目前均     

猪瘟荧光抗体的制备及应用评价

制备猪瘟荧光抗体并用于猪只活体扁桃体组织抹/涂片检测。将制备的猪瘟高免血清采用硫酸铵分级沉淀法纯化免疫球蛋白,反向透析法标记荧光素,过葡聚糖凝胶柱(Sephadex G-50)去除游离荧光素,通过扁桃体组织匀浆吸附去除异嗜性或交叉反应抗体。以5?S做稀释液,以RT-PCR检测阳性样本的冰冻切片确定其最大稀释度为1/60,最佳工作浓度为1/30,阻抑试验证明荧光为特异荧光。用标记的荧光抗体检测活体扁桃体样本39份,检出阳性11份,与IDEXX猪瘟抗原检测试剂盒复核结果完全吻合。结果表明,本实验所制备的猪瘟荧光抗体具有很高的灵敏性和特异性,可用于猪瘟净化中扁桃体组织抹/涂片检测。     

非洲猪瘟诊断技术研究进展

非洲猪瘟防控目前暂无安全有效疫苗可用,因此快速、可靠的检测方法对其防控至关重要。目前应用的非洲猪瘟诊断技术主要表现在病原、核酸、抗原与抗体四个方面:病原检测主要有红细胞吸附和病毒分离方法,核酸检测目前已开发出实时荧光定量PCR(qPCR)、多重PCR(mPCR)、微滴数字PCR(ddPCR)、巢氏PCR(nested-PCR)、环介导等温扩增技术(LAMP)、重组酶聚合酶扩增技术(RPA)、交叉引物扩增技术(CPA)、原位杂交技术(ISH)以及生物传感器技术等,抗原检测常用荧光抗体试验(FAT)、抗原ELISA、侧向流动免疫色谱分析(LFA)等,而抗体检测主要通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接荧光抗体试验(IFA)、胶体金快速免疫层析法(GICA)、免疫印迹法(IBT)等方法。每种诊断技术都有其特点,从而为不同情况下的A SFV诊断提供了多种选择。未来,其他技术如CRISPR等与上述技术的结合应用,以及不同诊断技术的联合应用,将成为非洲猪瘟诊断技术发展的趋势。     

荧光抗体技术在猪瘟净化中的应用

荧光抗体技术(FAT)是一种灵敏而又特异的诊断方法,被世界各国作为猪瘟的法定诊断方法。采用FAT对猪瘟病毒进行控制和净化,其方法简单、快速、技术可靠,检测成本相对较低。2005~2007年笔者采用FAT对规模化猪场猪瘟进行2~3次净化,可以稳定地控制猪瘟,使猪瘟的阳性率下降至3%左右,大大降低了各阶段猪群的死亡率,并明显提高了母猪的繁殖性能,取得了良好的经济效益。     

猪瘟抗体镧系荧光免疫层析法的建立

本研究以纯化的猪瘟病毒(CSFV)重组E2蛋白和纯化全病毒为抗原,用镧系元素铕(Eu)为荧光标记,建立了猪瘟抗体镧系荧光免疫层析快检法,经特异性、敏感性、重复性试验,表明该方法具有敏感性和特异性强、重复性好、快速、无辐射、高通量等优点,且操作简单、省时省力,该方法完全可以用于CSF抗体检测和免疫效价评估。     

荧光抗体染色法检测猪瘟的研究

利用荧光抗体技术检测病猪内脏器官可能存在的猪瘟病毒，对猪瘟的早期诊断具有十分重要意义，猪瘟的常规诊断需要4～5天，而该项技术可在半天之内作出判断，既快速又客观、准确，在规模化猪场临床上可得到很多广泛应用。     

应用ELISA法诊断非典型猪瘟的报告

近年来,猪瘟的流行特征发生了重要变化,出现了以非典型、隐性感染为主的流行趋势,致使猪瘟的临床诊断更为困难.酶联免疫吸附试验(ELISA)是快速检测猪瘟的有效方法.本试验通过应用ELISA法检测非典型猪瘟病例,摸索出诊断非典型猪瘟的可靠方法.发现非典型猪瘟——流产型猪瘟病例,其血清中不含抗病毒抗体,因此诊断本病必须通过检测病毒的方法.     

非洲猪瘟诊断技术研究进展

非洲猪瘟是猪的一种急性、高度接触性传染病,致死率可达100%。本文综述了非洲猪瘟病原学和血清学诊断技术研究进展,包括红细胞吸附试验(HAD)、聚合酶链反应技术(PCR)、环介导恒温扩增技术(LAMP)、荧光抗体技术(FAT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和胶体金快速免疫层析技术(GICA)等,并对各种方法的优缺点进行简要汇总分析,总结认为今后非洲猪瘟诊断的发展趋势在于不同诊断技术的联合应用。     

用微量酶标抗体血清中和试验检测猪瘟病毒抗体的初步研究

检测猪瘟病毒(HCV)抗体的实验室诊断方法有琼脂扩散试验、对流免疫电泳试验、补体结合试验、间接酶标抗体试验和间接荧光抗体试验等。但这些实验的敏感性都比较低,而且不能区分出HCV和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的抗体。据报道,用酶标抗体和荧光抗体血清中和试验检测HCV     

猪瘟荧光抗体的制备及其在自然感染病例中的应用

用硫酸铵盐析法从抗猪瘟高免血清中提取免疫球蛋白，应用搅拌标记异硫氰酸荧光素（FITC），葡聚糖凝胶G-25层析除去标记物中游离的荧光素，制备出猪瘟荧光抗体（CSF—FA）。经测定．标记荧光抗体的染色效价为1：4。用此浓度荧光抗体，结合常规诊断检测猪瘟，从33例采自陕西省不同地区自然发病猪的扁桃体中检出猪瘟阳性病例7份，阳性率21．3％（7／33）。结果表明，制备的荧光抗体诊断猪瘟敏感性高、特异性强；陕西省猪瘟自然感染发病率高。     

猪瘟病毒的实时荧光RT-PCR检测

应用实时荧光RT-PCR方法对12份猪瘟可疑病料进行了检测,结果有9份为阳性,阳性率为75%（9/12）,并对这12份病料进行猪瘟直接免疫荧光抗体试验,结果与猪瘟实时荧光RT-PCR检测结果基本一致,结果证明,应用实时荧光RT-PCR方法诊断临床中的猪瘟病例可行,并具有快速、准确、敏感的特点。     

ELISA间接法检测猪瘟抗体的研究

本文介绍了以中国株猪瘟兔化弱毒乳兔组织冻干疫苗为原料提取猪瘟抗原,以酶标葡萄球菌蛋白 A(PPA)代替酶标抗猪IgG,建立ELISA间接法检测猪瘟抗体的方法。该方法与血清兔体中和试验对73份猪血清进行检测猪瘟抗体的同步试验,结果基本一致( P >0.05)。敏感性、特异性及准确性分别为100％、92.16％及94.52％。用该方法对1528头份猪血清及36头份猪扁桃体浸出液进行猪瘟抗体测定,结果稳定,重复性好。     

斑点免疫金渗滤法检测猪瘟抗体的研究

以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜，然后用胶体金标记SPA，建立检测猪瘟抗体水平的斑点免疫金渗滤法检测试纸盒。通过胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)直接显色，阳性者出现红色斑点，结果易于判断。整个试验过程仅需5min，操作简单，与猪兰耳病、猪伪狂犬病、猪细小病毒、新城疫和禽流感等阳性血清不发生交叉反应。同时将该法与目前猪瘟的常规检测方法Dot—ELISA法和间接血凝试验同时对200份猪血清进行猪瘟抗体检测比较，符合率达98．4％和98．9％。说明该法微量、特异、敏感可靠，检测时间短，效果直观，非常适用于猪瘟的早期诊断和普查以及疫苗免疫效果后抗体水平的检测。