禽白血病p27抗原检测阳性与病毒分离的相关性比较

本试验以80只300日龄的A品系蛋鸡为试验对象,分5个日龄段按翅号采集蛋清、泄殖腔棉拭子,无菌抗凝血和血清.用ALV p27抗原检测试剂盒检测蛋清和泄殖腔棉拭子.将无菌抗凝血分离血浆接种DF-1细胞,培养一周后用同样方法检测上清收集液,分析该群鸡只在不同日龄段泄殖腔棉拭子阳性、蛋清样本阳性和病毒分离阳性之间的相关性.用ALV-Ab抗体试剂盒检测各日龄段血清的抗体水平.此外,选取某一日龄段蛋清和泄殖腔拭子样本用4个不同厂家的ALV p27抗原检测试剂盒进行检测比较.结果表明,5个日龄段泄殖腔棉拭子平均阳性率为61％,蛋清样本平均阳性率为72.6％,病毒分离平均阳性率为48.8％.5个日龄段ALV的抗体阳性率一直为零;4个厂家的ELISA试剂盒对同一批样本的检测结果表明,IDEXX试剂盒的敏感度最高.本试验为外源性鸡白血病病毒检测及鸡白血病净化其方法的应用、试剂盒的选择、减少判定的误差、提高净化效果提供了一定的科学依据.     

禽白血病病毒检测技术研究进展

禽白血病作为传染性免疫抑制病已然成为了我国乃至世界禽业最难控制的疾病之一,只有通过净化手段才能控制,而检测手段的可靠性、迅捷性在诊断中起着至关重要的作用,本文就近些年常用的新型的检测技术做了简要的综述,为实验室诊断方法的选择提供参考.     

禽白血病的PCR检测

试验根据禽白血病病毒群特异性抗原P27基因合成引物,经PCR反应条件的优化,针对来源于不同养殖场病料样本的P27基因进行PCR扩增,结果ALV–J抗体阳性鸡血液样本、ALV–J抗体阴性鸡血液样本、疑似病例肝脏和正常鸡肝脏中的病原核酸检出率分别为50.0%、0、90.0%和61.5%.同时将扩增的目的基因进行克隆测序,并与GenBank中的参考毒株进行比较,结果表明目的基因片段序列长793 bp,与参考毒株核苷酸序列同源性分别为99.2%、97.6%.     

禽白血病净化检测中不同样品应用的比较

为研究泄殖腔棉拭子、胎粪、血浆、精液、蛋清等不同检测样品在种鸡场禽白血病净化实施中的适用性和差异,将不同类型样品的禽白血病病毒p27抗原ELISA检测结果进行分组比对:一是将泄殖腔棉拭子与其他样品比对;二是以血浆病毒分离检测结果为基准,将血浆与蛋清、精液样品比对;三是将蛋清与胎粪样品比对.结果显示,泄殖腔棉拭子样品阳性...     

通过公鸡血液和精液禽白血病病毒分离净化禽白血病的研究

在对种鸡群实施禽白血病净化过程中,检测并淘汰感染公鸡对推进净化极其重要,然而对于以血液病毒分离为准还是以精液病毒分离为准还缺乏准确的参考数据.为此,本研究对中国正在实施禽白血病净化的4个不同品系的种公鸡群同时采集血液和精液分别实施病毒分离,并对其中某蛋鸡场公鸡通过这两种方式分离的病毒进行了gp85基因扩增并分析其同源性...     

禽白血病/肉瘤病毒群特异性抗原p27的分离纯化及其抗体的制备

采用细胞培养法增殖禽白血病/肉瘤病毒(ALV/RSV)A亚型,然后对其进行超速离心浓缩及蔗糖密度梯度离心纯化病毒,再采用电泳分离与电洗脱收集相结合的方法纯化p27蛋白.经检测,提取的p27蛋白具有良好的抗原性与免疫原性.用该蛋白免疫家兔制备的兔抗p27抗体,经ELISA方法检测其效价可达1:6400以上.     

禽白血病净化中胎粪检测方法的研究

禽白血病是呈世界性分布的可垂直传播的病毒性肿瘤性疾病,严重制约着养禽业的发展。该病主要通过对原种核心鸡群实施持续性逐一检测并淘汰禽白血病阳性鸡只,从而实现疾病净化。胎粪检测是建立阴性核心鸡群的第一步,因此胎粪检测方法的建立是禽白血病净化方案的重要一环,是禽白血病净化工作的基础保障。在规模化养殖场原种核心鸡群的禽白血病净化中,选择准确的、合适的检测方法至关重要。本文通过对1日龄雏鸡胎粪样品进行不同方式的处理,比较其对禽白血病病毒检测结果准确性的影响,结果显示：胎粪样品经过冷冻后可提高检出率;冷冻的次数及冷冻的方法对检测结果无影响;多份胎粪混样检测会影响样品的检出率,有假阳或假阴性的产生。研究结果为规模化养殖场快速、有效和准确地检测禽白血病病毒提供了技术支撑。     

禽白血病检测技术研究进展

禽白血病（avian leukosis,AL）是由禽白血病病毒（avian leucosis virus,ALV）引起的一种禽类重要免疫抑制性疾病,主要以垂直方式传播,给我国养禽业造成了严重经济损失。目前控制ALV传播的最有效手段是净化,而检测技术是实现净化的重要技术支撑。本文从病原学、病理学、血清学、分子生物学等方面对ALV检测技术进行综述,概述了不同检测技术的研究进展情况,分析了其优缺点和应用条件。随着新技术的发展和完善,各种ALV检测技术得到了不断优化、改进和发展。本文有助于充分了解现有的ALV检测技术,对日常检测中不同检测技术的综合考量、选择或优化组合具有借鉴意义,为提高ALV检出率,缩短净化时间,提高工作效率提供了技术支撑。     

禽白血病的流行病学特点及净化措施

禽白血病(AL)是由禽白血病病毒（ALV）引起的,可诱发家禽多种肿瘤性疾病,给家禽养殖业造成重大的经济损失。目前,由于我国对ALV的大规模净化,商品蛋鸡和肉鸡的ALV净化工作取得了显著成就,但是AL仍在我国许多本地鸡群中流行。本文对禽白血病的病原特征以及临床症状、流行情况等方面进行了综述,为该病的深入研究和养殖场工作防控提供参考。     

禽白血病的检测和净化技术

禽白血病是由禽白血病病毒引起鸡生长受阻、免疫抑制和产能下降的一种禽类重要传染性疾病。目前无有效治疗禽白血病的方法,主要通过净化的手段进行防控。本文综述禽白血病病毒检测和净化技术的研究,以期为种禽和商品禽饲养中防控净化该禽病提供参考。     

F亚群禽白血病病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

为建立检测F亚群禽白血病病毒(ALV-F)的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法,本研究以ALV-F分离株FGD1803基因组为模板,PCR扩增其env基因,构建重组质粒pMD18-T-F作为标准品.利用该重组质粒建立了 SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法(qPCR)的标准曲线,并经反应条件优化建立了检测...     

双重PCR检测禽源生物制品中禽网状内皮组织增生症病毒和禽白血病病毒

为了快速、准确检测禽源生物制品中的禽网状内皮组织增生症病毒(REV)和禽白血病病毒(ALV),根据GenBank中登录的REV参考毒株LTR基因序列和ALV P27基因序列,设计合成2对特异性引物。在建立各病毒单项PCR检测技术的基础上,优化反应条件,建立2种病毒的双重PCR检测方法。结果:可同时扩增REV的467 bp和ALV的675 bp的特异性片段,而对其他5种禽病病原的PCR扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明,该双重PCR技术能检出10 pg的ALV和10 pg的REV模板。用双重PCR技术与REV的间接免疫荧光法及ALV ELISA对245份疫苗株检测,进行同步比较,结果总符合率为100%。表明建立的双重PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,对这2种外源病毒的同时检测,显示出了较好的可行性。     

J亚群禽白血病病毒套式PCR检测方法的建立

本试验根据GenBank中登录的禽白血病病毒(ALV)基因组序列,设计合成了2对引物,外部引物的扩增片段大小为478 bp,内部引物的扩增片段大小为314 bp,建立了适合ALV快速检测的套式PCR方法(nested-PCR)。采用该方法对ALV毒株进行了检测,试验结果表明,能扩增到314 bp的条带,禽流感病毒(H9亚型)、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、减蛋综合征病毒、禽网状内皮增生病病毒、禽呼肠孤病毒、马立克氏病病毒的扩增结果均为阴性。该方法第1次扩增的敏感性是100 pg,第2次扩增的敏感性是1 fg,第2次比第1次扩增的敏感性高10⁵倍。所建立的套式PCR方法具有敏感性高、重复性好、特异性强等优点,可用于禽白血病病毒(ALV)的临床诊断和分子流行病学调查等。     

禽白血病J亚群病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

本研究旨在通过荧光定量PCR方法研究禽白血病J亚群病毒(ALV-J)在家禽体内各个器官的分布。根据ALV-J NX0101毒株基因5 258—5 510bp的碱基序列,设计了1对特异性引物,进行RT-PCR反应,扩增产物为253bp,将该产物连接T载体作为Real-time PCR反应的标准品,利用SYBR Green I染料进行Real-time PCR反应,建立了标准曲线,并进行反应灵敏性,特异性和重复性试验。然后用已建立的方法对人工感染ALV-J的SPF鸡心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸腺、法氏囊、腺胃进行3次重复检测,将Ct值带入标准曲线公式得出各个组织的病毒拷贝数。试验结果表明:标准曲线线性关系R值均为0.991 4,检测极限约为81拷贝质粒DNA,比RT-PCR灵敏100倍以上;特异性分析表明只有ALV-J能检测到特异性的熔解度峰值;批内和批间重复性试验的变异系数均小于5%。通过比较数值以得出胸腺ALV-J基因含量是最高的,肺脏、脾脏、法氏囊含量也比较高,心脏拷贝数最低。自然感染发病鸡各器官ALV-J基因均高于人工感染ALV-J的基因含量。本研究所建立的ALV-J基因实时荧光定量RT-PCR方法灵敏度高、特异性强、检测周期短,初步探讨了禽白血病J亚群病毒在畜禽体内各个器官的病毒分布。这为以后禽白血病的诊断以及治疗提供了重要的技术支持。     

禽白血病病毒贵州流行株env基因克隆与序列分析

为了解禽白血病病毒（ALV）贵州流行株的遗传变异情况及分子特征,本试验基于ALV env基因设计合成引物对禽白血病贵州临床病例进行目的基因扩增、克隆和序列分析。结果显示,从临床病例中筛选获得3份阳性样本,PCR扩增均获得大小约921 bp的目的基因片段,将其命名为：GZ-ALV-1株、GZ-ALV-2株和GZ-ALV-3株。序列分析结果显示,3株ALV贵州流行株之间核苷酸同源性在97.2%~97.6%之间,与国内外ALV-J的同源性相对较高,为93.1%~99.3%;而与A、B、C、D、E、K亚群ALV同源性仅为51.4%~53.2%。系统进化分析显示,3株ALV贵州流行株与ALV-J亚群参考株处于同一分支,表明本试验所检测的ALV毒株均为ALV-J亚群;与A、B、C、D、E、K亚群处于不同进化分支。基因变异分析显示,3株流行株37处相同核苷酸变异导致17处氨基酸发生位点变异,其中9个可变点在高变区hr1和hr2,1个可变点在低变区vr3。结果表明,3株ALV贵州流行株均为ALV-J亚群,env基因存在位点发生了变异,且可变位点位于序列高变区。本研究结果为明确贵州禽白血病流行概况及ALV的防控与净化提供基础数据。     

广西麻(花)鸡禽白血病净化研究初报

鉴于禽白血病(Avian leukosis, AL)流行病学调查发现广西麻(花)鸡禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)感染率较高,我们对DGGX5公司的麻鸡一个三系配套的品系开展了ALV净化的研究.初步结果显示,母系一世代公鸡和母鸡J-ALV的阳性率比零世代的下降了33.33个百分点和21....     

PCR／PFLP鉴别伉禽白血病病毒

用PCR方法从禽白血病病毒（avian leukosis virus,ALY）亚群毒株RAV－1、RAV－2感染或未感染的SPF鸡胚成纤维细胞（CEF）分别扩增出1．2kb基因手段。RAV－1囊膜基因可初BglⅡ分为2条相近的600bp片段，RAV－2囊膜基因被BamHI分为2条约600bp片段，对照组基因片段（内源性病毒）不被BglⅡ和BamHI切割。结果显示，ALV囊膜基因PCR／RFLP可用于诊断禽白血病和鉴别不同的AVL毒株。     

盱眙县禽白血病的检测与净化

禽白血病对养禽业危害极大,近年来随着研究的深入和检测与净化技术的发展,禽白血病的感染率明显下降.介绍了盱眙县禽白血病的检测与净化工作,以供参考.     

1株J亚群禽白血病病毒env基因克隆及生物信息学分析

【目的】通过生物信息学方法分析1株禽白血病病毒(Avian Leukosis virus, ALV)的囊膜蛋白env的分子特征。【方法】利用鸡成纤维细胞(DF-1)培养疑似禽白血病病鸡的血清样品,通过ELISA和实时荧光定量PCR鉴定ALV亚群。对env基因PCR产物进行测序,利用SeqMan拼接env基因。将该env基因与国内外多个ALV亚群进行序列比对及遗传进化分析,并借助多种生物信息学软件对env蛋白进行分析,包括理化性质、亲/疏水性、跨膜区、信号肽、糖基化位点、磷酸化位点、乙酰化位点、二级结构、三级结构、抗原决定簇和B细胞抗原表位预测。【结果】ALV-J毒株的env基因全长1 719 bp,获得GenBank登录号为OP837418,其与J亚群ALV位于同一进化分支,相似性为89.3%～94.8%。该env蛋白有2个跨膜区,是由572个氨基酸组成的不稳定的亲水蛋白,不稳定系数预测值为43.49,总平均亲水性为―0.201;该env蛋白为非分泌蛋白,无信号肽,有17个N-糖基化修饰位点、77个O-糖基化修饰位点、42个磷酸化修饰位点、21个潜在抗原决定簇和9个连续碱基数超过10个...