鸡马立克氏病二价苗对超强毒攻击的保护试验

将鸡马立克氏病毒（ＭＤＶ）血清Ⅱ型Ｚ_４毒株５００个空斑形成单位（ＰＦＵ）与ＭＤＶ血清Ⅲ型ＦＣ_（１２６）毒株１０００ＰＦＵ组成鸡马立克氏病（ＭＤ）二价疫苗，免疫对ＭＤ高度易感的Ｐ系ＳＰＦ白来航鸡，设３０１Ｂ／１＋ＦＣ＿（１２６）二价疫苗，Ｚ＿４，３０１Ｂ／１和ＦＣ_（１２６）３种单价疫苗免疫组做对照，以ＭＤＶ超强毒Ｍｄ＿５毒株（ｖｖＭＤＶ－Ｍｄ_５）攻击。结果表明：Ｚ_４＋ＦＣ_（１２６）和３０１Ｂ／１＋ＦＣ_（１２６）２种二价疫苗均能给免疫鸡提供较强的免疫效力，而３种单价疫苗则不能给免疫鸡提供对ｖｖＭＤＶ－Ｍｄ＿５毒株攻击的有效保护力。     

马立克氏病病毒gB基因的重组痘苗质粒构建

根据马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ｇＢ基因序列设计ＰＣＲ引物,以ｇＢ质粒为模板,扩增出ＭＤＶｇＢ基因５’端到３’端３８８ｂｐ的ＤＮＡ片段。用ＥｃｏＲⅠ和ＸｂａⅠ双酶消化ＰＣＲ产物,将其克隆入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ质粒,构建中间质粒Ⅰ;用ＸｂａⅠ消化ｇＢ质粒,切出ＭＤＶｇＢ基因ＸｂａⅠ片段,并正向克隆入中间质粒Ⅰ的ＸｂａⅠ位点,将ＭＤＶｇＢ基因１３７ｂｐ的ＰＣＲ产物与其ＸｂａⅠ片段正向连接,构建中间质粒Ⅱ用ＥｃｏＲⅠ调出中间质粒Ⅱ中的ＭＤＶｇＢ基因,正向克隆入痘苗病毒表达载体ｐ１６启动子下游,构建ＭＤＶｇＢ基因表达质粒ｐ１６－ＭＤＶｇＢＭＤＶｇＢ基因重组痘苗表达质粒的成功构建,为下一步进行重组病毒的构建及ＣＴＬ应答的深入研究奠定了基础     

鸡马立克氏病二价苗对超强毒攻击的保护试验

将鸡马立克氏病毒血清Ⅱ型Ｚ４毒株５００个空斑形成单位与ＭＤＶ血清Ⅲ型ＦＣ１２６毒株１０００ＰＦＵ组成鸡马立克氏病二价疫苗，免疫对ＭＤ高度易感的Ｐ系ＳＰＦ白来航鸡，设３０１Ｂ／１＋ＦＣ１２６二价疫苗，Ｚ４，３０１Ｂ／１和ＦＣ１２６３种单价疫苗免疫组做对照，以ＭＤＶ超强毒ＭＤ５毒株攻击，结果表明：Ｚ４＋ＦＣ１２６和３０１Ｂ／１＋ＦＣ１２６２种二价疫苗均能给免疫鸡提供较强的免疫效力，而３种单价疫苗则不能     

免疫鸡群马立克氏病病毒分离物的生物学特性

本实验在对内蒙古呼和浩特和包头的７个鸡场进行ＭＤ流行情况调查的基础上，通过病毒分离实验，首次自内蒙古呼和浩特、包头地区经ＭＤ疫苗免疫过的５个发病鸡群和１个健康鸡群中分离到６株马立克氏病毒（分别命名为ＨＡ、ＨＢ、ＨＣ、ＨＥ、ＨＦ和ＢＧ），并对６株病毒在鸡胚成纤维细胞（ＥＦ）上的增殖特性、蚀斑形成、形态和毒力等生物学特性进行了鉴定。结果表明，ＭＤ在呼和浩特、包头地区鸡群中广泛流行。自然感染鸡羽囊中ＭＤＶ抗原与病毒血症呈正相关。雏鸡接种法和组织培养法用于分离ＭＤＶ时，敏感性无显著差异。应用ＣＥＦ分离ＭＤＶ是１种快速、简便、敏感、经济的方法；６株ＭＤＶ在ＣＥＦ上能良好地增殖，并引起比较规则的细胞病变，还能在ＣＥＦ上产生圆形或椭圆形的小细胞蚀斑、大小为１．０８～１．４２ｍｍ。６株ＭＤＶ对雏鸡均有致病性，其中ＨＢ、ＨＥ、ＨＦ和ＢＧ４株之间毒力差异显著，ＨＢ和ＢＧ株的毒力比京—１株ＭＤＶ强。根据以上结果判定６株ＭＤＶ均属血清Ⅰ型ＭＤＶ强毒。结合接种雏鸡的病理学检查结果确定，ＨＡ、ＨＢ、和ＨＥ为内脏型ＭＤＶ，属Ⅰ生物组；ＨＣ、ＨＦ和ＢＧ为神经型ＭＤＶ，属Ⅱ生物组。     

亲和层析法提纯鸡马立克病毒gB基因重组产物

应用针对鸡马立克病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）抗原单克隆抗体ＩＡＮ８６制备亲和层析柱，从感染重组杆状病毒（ｇＢ－ＡｃＮＰＶ）的昆虫细胞中提纯鸡ＭＤＶｇＢ基因重组产物，获得较好效果。提纯的蛋白质在ＳＤＳ－ｐＡＧＥ中出现的５条条带中有４条在免疫印迹试验中出现，其分子量为１００，６０，４９，４０ｋｄ占蛋白总量的５４．７％。试验证明用单克隆抗体亲和层析法提纯ＭＤＶｇＢ基因重组产物是一个行之有效的方法。     

CpG DNA对鸡传染性喉气管炎病毒DNA疫苗免疫效果的影响

 将分别构建的含有鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）王岗株ｇＢｇＣ和ｇＤ基因的重组真核表达质粒及ＣＰＧＤＮＡ佐剂分组肌肉注射 ＳＰＦ鸡，检测了免疫后的抗体水平，并观测了攻毒后的免疫保护效果。实验结果显示，ＣｐＧＤＮＡ佐剂和ＤＮＡ疫苗联合免疫后的抗体水平比单一使用ＤＮＡ疫苗的要高，而佐剂组的发病率、死亡率均低于非佐剂组，保护率则高于非佐剂组。这表明 ＣｐＧ ＤＮＡ佐剂增强了 ＩＬＴＶ ＤＮＡ疫苗的免疫效果。     

基因探针技术检测血清1型马立克氏病病毒的研究

选用马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＧＡ株ＢａｍＨＩ基因文库中ＬＤＮＡ片段，制成ＤＩＧ－标记的ＭＤＶ核酸探针，分别对Ｉ型ＭＤＶ强毒株（ＢＪ－１株）和弱毒株（Ｍｄ１１／７５ｃ株）感染材料的核酸进行ｄｏｔ ｂｌｏｔ杂交检测，结果显示均有阳性呈色反应；而对ＭＤＶ血清２型（ＳＢ－１株）、３型（Ｆｃ１２６株）及禽网状内皮组织增殖病病毒（ＲＥＶ）和淋巴细胞性白血病病毒（ＬＬＶ）感染细胞的核酸，作上述同样检测，则均未见     

鸡马立克氏病毒I型毒株的分离和鉴定

从鸡马立克氏病（ＭＤ）疫苗免疫的发病鸡群中采集肝，脾，血液等病科，经鸭胚成纤维细胞（ＤＥＦ）培育盲传数代，分离到１株（ＭＤＶ）暂定名为沪Ｘ株，该病毒在ＤＥＦ培养上出现典型的ＭＤＶ细胞病变，电镜下病毒大小为１００ｎｍ左右，呈椭圆半开圆形，位于细胞核内。细胞培养物经饱和硫酸铵浓缩后，与标准的马立克氏阳性血清出现琼扩沉淀线，病毒按种ＳＰＦ鸡后，鸡群主要表现内脏肿瘤，并回收到ＭＤＶ，表明分离的沪Ｘ株具有致     

马立克氏病毒Z4株培养特性和免疫原性的研究

将鸡马立克氏病毒（ＭＤＶ）血清２型Ｚ４毒株第１０代（Ｚ４－１０），在对鸡马立克氏病（ＭＤ）高度易感的Ｐ系ＳＰＦ鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）单层上连续传代至第３０代（Ｚ４－３０），Ｚ４毒株空斑形成速度和空斑形态均未发生显著变化，分别以Ｚ４－１１，Ｚ４－２５和Ｚ４－３０细胞结合毒作单介疫苗，将Ｚ４－１１，Ｚ４－２０和Ｚ４－３０细胞结合毒分别与ＦＣ１２６细胞结合毒组成二价疫苗，免疫Ｐ系ＳＰＦ鸡，用ＭＤＶ强毒     

ELISA检测BVD－MDV抗体

ＥＬＩＳＡ检测ＢＶＤ－ＭＤＶ抗体王新华，刘守仁，张荣兴（新疆农垦科学院，石河子，８３２０００）（中国科学院上海细胞所）自１９８０年国内首次报道牛病毒性腹泻验（ＥＬＩＳＡ）检测ＢＶＤ－ＭＤＶ抗体，以确定粘膜病（ＢＶＤ－ＭＤ）以来，已有许多地区在小鼠免疫...     

鸡马立克氏病毒Ⅰ型毒株的分离和鉴定

从鸡马立克氏病（ＭＤ）疫苗免疫的发病鸡群中采集肝、脾、血液等病料，经鸭胚成纤维细胞（ＤＥＦ）培养盲传数代，分离到１株（ＭＤＶ）暂定名为沪Ｘ株。该病毒在ＤＥＦ培养上出现典型的ＭＤＶ细胞病变。电镜下病毒大小为１００ｎｍ左右，呈椭圆半开圆形，位于细胞核内。细胞培养物经饱和硫酸铵浓缩后，与标准的马立克氏阳性血清出现琼扩沉淀线。病毒按种ＳＰＦ鸡后，鸡群主要表现内脏肿瘤，并回收到ＭＤＶ，表明分离的沪Ｘ株具有致病性，属于马立克氏疱疹病毒Ⅰ型     

斑点免疫金检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

通过胶体金标记提纯后的兔抗ＩＢＶＩｇＧ，建立了一种以微孔滤膜为固相载体，以红色胶体金为标记物，检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）的斑点免疫金测定法（ＤＩＧＦＡ）。ＤＩＧＦＡ对ＩＢＶ的最小检出量为２０．３×１０￣（－８）ｇ，在１０份自然病例样品中检出８份。鸡胚培养法以育传３～５代，出现侏儒胚者为阳性，从上述样品中检出６份。对接种ＩＢＶ的鸡胚尿囊液，ＤＩＧＦＡ法检出率为１００％。实验结果表明，ＤＩＧＦＡ法对鸡传染性支气管炎的早期诊断具有简便、灵敏、快速、特异性强和重复性好等优点。     

瓜绢野螟的生活史及习性观察

瓜绢野螟的生活史及习性观察汪钟信，彭传华（华中农业大学植保系武汉４３００７０）；（湖北省植保总站武汉４３００７０）关键词瓜绢野螟，生活史，习性ＯＢＳＥＲＶＡＴＩＯＮＳＯＮＴＨＥＬＩＦＥＨＩＳＴＯＲＹＡＮＤＨＡＢＩＴＳＯＦＩＮＤＩＡＮＣＡＢＢＡＧＥＭＯ...     

UV－B辐射对农垦58s某些生理特性和育性的影响

ＵＶ－Ｂ辐射对农垦５８ｓ某些生理特性和育性的影响李合生１）岳兵１）曾汉来１）戴秋杰２）（１）华中农业大学农学系，武汉４３００７０；２）江苏省农科院，南京２１００１４）ＥＦＦＥＣＴＯＦＵＶ－ＢＲＡＤＩＡＴＩＯＮＯＮＳＯＭＥＰＨＹＳＩＯＬＯＧＩＣＡＬＣＨ...     

IBDV超强毒HZ株VP2基因的克隆和真核表达质粒的构建

利用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）,扩增克隆传染性法低囊病病毒超强毒（ｖｖＩＢＤＶ）ＨＺ株ＶＰ２基因,并ＶＰ２基因进行全序列测定、序列分析和聚类分析,同时将ＶＰ２基因与真核表达载体ｐｃＮＤＡ３相连接。结果克隆到ＶＰ２基因全序列长１３５６ｂｐ,分析表明ＨＺ株与欧洲超强毒株ＵＫ６６１高度相似,同时将ＶＰ２基因正向插入ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子下游,得到了ＶＰ２基因的真核表达质粒。为ＩＢＤＶ分子流行病学和基因工程疫苗的研究奠定了物质基础。     

MD疫苗免疫雏鸡vMDV攻击后细胞免疫功能的变化

马立克氏病（ＭＤ）三价疫苗免疫雏鸡马立克氏病强毒（ｖＭＤＶ）攻击后，免疫保护指数（ＶＰＩ）为７３．３０％，脾脏和胸腺Ｔ淋巴细胞增殖反应比ｖＭＤＶ感染雏鸡和ＨＶＴ疫苗免疫后ｖＭＤＶ攻击雏鸡显著增强（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５），外周血液Ｔ辅助细胞（ＴＨ）和单核细胞数量显著增加（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５和Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０５）．火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）疫苗免疫雏鸡ｖＭＤＶ攻击后，ＶＰＩ为５６．７％，脾脏和胸腺Ｔ淋巴细胞增殖反应比ｒＭＤＶ感染雏鸡显著增强（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０５）和外周血液ＴＨ数量显著增加（Ｐ＜０．０５），单核细胞数量虽有增加但无统计学显著性差异（Ｐ＞０．０５）．     

马立克病毒糖蛋白D基因转入感染细胞DNA的研究

用ＥｃｏＲＩ，ＰｓｔＩ内切酶将已分离和克隆的马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｄ（ｇＤ）基因从重组ｐＭｇＤ１８质粒中切出，克隆进反转录病毒质粒载体（ＲＣＡＳ）的连接质粒载体ｐＵＣＣｌａ１１２Ｎ的相同位点。用Ｃｌａｌ再将ｇＤ重组ｐＵＣＣｌａ１１２Ｎ中的ｇＤ基因切出，用ＣｌａＩ将ＲＣＡＳ载体切开，将ｇＤ基因构建于ＲＣＡＳ的ＣｌａＩ位点。通过原位杂交筛选重组ＲＣＡＳ，并结合酶切分析鉴定出ｇＤ插入方向正确的重组ＲＣＡＳ。用磷酸钙沉淀法将ｇＤ重组ＲＣＡＳ转染鸡胚成纤维细胞。收集转染后第９天的细胞上清，并用其感染原代ＣＥＦ，在感染后第４天和第６天收集ＣＥＦ。提取ＣＥＦ基因组ＤＮＡ，用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（ｄｉｇ）标记ｇＤ基因片段作为探针，通过ｄｏｔｂｌｏｔ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测基因转移情况。结果表明，转染的重组ＲＣＡＳ不仅在细胞内变成有传染性的完整病毒，而且成功地将ｇＤ基因与病毒前ＤＮＡ一起整合在ＣＥＦＤＮＡ中     

扭转轴在冲击载荷作用下冲击应力和动载系数的计算

扭转轴在冲击载荷作用下冲击应力和动载系数的计算姜玉明（南京农业大学农业工程学院，南京２１００３２）ＣＡＬＣＵＬＡＴＩＯＮＯＦＩＭＰＡＣＴＳＴＲＥＳＳＡＮＤＤＹＮＡＭＩＣＬＯＡＤＦＡＣＴＯＲＯＮＴＯＲＳＩＯＮＳＨＡＦＴＡＣＴＥＤＢＹＩＭＰＵＬＳＩＶＥＬ...     

鸡群类甲,乙,丙型肝炎病毒感染的血清流行病学调查

从河南部分地区收集鸡血清３１２份，用ＥＬＩＳＡ法分别检测：（１）抗甲型肝炎病毒抗体－ＩｇＭ（ＨＡＶＩｇＭ）；（２）乙型肝炎病毒“两对半”；（３）抗丙型肝炎病毒抗体。其结果３１２份鸡血清抗ＨＡＶＩｇＭ和抗ＨＣＶＡｂ全部阴性。乙肝病毒“两对半”血清阳性数分别为：ＨＢｓＡｇ１８份，抗－ＨＢｓ１６份，ＨＢｅＡｇ１４份，抗－ＨＢｅ２份；抗－ＨＢｃ零份。     

甘蓝型油菜减数分裂中的染色体行为观察

甘蓝型油菜减数分裂中的染色体行为观察李再云，刘后利（华中农业大学农学系，武汉１３００７０）关键词甘蓝型油菜，减数分裂，染色体行为，前期ⅠＯＢＳＥＲＶＡＴＩＯＮＯＮＣＨＲＯＭＯＳＯＭＥＢＥＨＡＶＩＯＵＲＤＵＲＩＮＧＭＥＩＯＳＩＳＯＦＢＲＡＳＳＩＣＡＮＡ...