大肠杆菌987P抗原的提纯及部分特性鉴定

用高速匀浆法使987P纤毛从987P菌体上脱开,等电点沉淀粗提无细胞液中的987P抗原,用Sepharose CL-4B凝胶柱进一步纯化该抗原。提纯抗原的分子量为19500;电子显微镜负染观察可见匀质、僵直、长短不一的毛发状结构,直径约7nm,与抗原来源菌株OK抗血清进行的免疫电泳,只出现一条沉淀线;用纯化抗原制备的兔、豚鼠抗血清,能凝集不同血清型的987P~+参考和分离菌株。提纯的987P抗原达到了免疫纯和电泳纯,并用此抗原制备了高特异、高效价的抗血清。     

大肠杆菌K88、K99、987P纤毛抗原提纯及抗血清制备

采用加热法和盐析法对大肠杆菌K88、K99、987P纤毛抗原进行了提取、纯化,并通过SDS—PAGE凝胶电泳对提纯效果进行了检验。将纯化的纤毛抗原免疫家兔,制备了K88、K99、987P纤毛抗原抗血清,用琼脂扩散试验检测了抗血清的效价。结果表明,纯化的K88、K99、987P纤毛为高纯度的纤毛抗原,其分子量分别约为26、18、20kD。K88、K99、987P抗血清的琼扩效价依次为1：32、1：32、1：128,且特异性高。本研究为K88、K99、987P纤毛抗原定量检测及产纤毛大肠杆菌菌株的鉴定奠定了基础。     

大肠杆菌K88纤毛抗原的提纯和抗血清的制备

以5％绵羊血改良Minca琼脂筛选和克隆表达良好的K88^＋菌株，改良Minca琼脂培养获得K88菌液。用加热法及高速匀浆法使K88纤毛从菌体上脱下。饱和硫酸铵沉淀粗提，用Sepharose CL-4B凝胶过滤纯化K88抗原。提纯的抗原经SDS—PAGE电泳测定其分子量约为25000，且仅此一条蛋白带；与K88抗血清进行琼脂扩散试验只出现一条沉淀线。用提纯的抗原经多次免疫家兔制备了K88抗血清。抗血清在玻板凝集试验中只凝集K88菌株，不凝集K99，987P或F41菌株；在琼扩试验中，只与K88粗提抗原出现一条沉淀线，且效价为1：64，而不与K99，987P抗原出现沉淀线；在免疫电泳试验中，与无细胞K88纤毛液只出现一条沉淀线。鉴定结果表明，所制备的K88血清特异性强、效价高，可作为单因子血清用于凝集试验、琼扩试验等血清学试验，对K88菌株进行鉴定，对K88纤毛抗原进行定性和定量检测。     

E.coli纤毛抗原K_(99)菌株电子显微镜观察试验

肠致病性埃希氏大肠杆菌(E.co1i)的粘附因子K_(99)抗原,是一种易热蛋白质,从形态上看是一种纤毛结构,这种纤毛可以粘附于小肠上皮细胞,使细菌在小肠中聚集产生肠毒素而致病。这种纤毛的致病作用越来越引起人们的重视,在兽医研究方面,现已发现猪的肠致病性大肠杆菌带有K_(88)、K_(99)和987P三种纤毛抗原,在引起新生仔猪腹泻     

化学诱变剂和紫外线对K88抗原工程菌及产肠毒素性大肠杆菌质粒作用的比较

某些产肠毒素性大肠杆菌可致仔猪黄痢病,危害养猪业。猪源性产肠毒素性大肠杆菌有两种致病因子,其一为肠毒素,其二为粘附因子(即纤毛抗原)。后者有K_(88)、K_(66)、987P和F_(41)四个血清型,但以K_(88)纤毛抗原产生菌居多。现已知道K_(88)基因和肠毒素基     

坏死梭杆菌FN(A)型毒力株保护性抗原筛选及初步鉴定

通过胰蛋白酶裂解坏死梭杆菌FN（A）型毒力菌株菌体,分别以菌体裂解物上清和沉淀作为抗原免疫家兔制备血清。利用SDS-PAGE/Western-blot技术在菌体中筛选出4种具有免疫原性的组分,通过免疫后的攻毒试验,筛选出1种具有免疫保护性的抗原。抗原分离纯化后,进行N端氨基酸序列测定、免疫试验及生物学特性研究,据试验结果可初步判定该抗原为溶血素类似物或一种新发现的抗原物质。该抗原不仅能使机体产生保护性免疫反应,而且不同菌株中此种抗原间可产生明显的交叉免疫。     

用ELISA改良双夹心法检测大肠杆菌3P抗原

用参考菌株建立了大肠杆菌K88、K99和987P三种纤毛(3P)抗原的ELISA改良双夹心检测法。通过对分离菌株、仔猪粪便样品中三种抗原的检测,对已知阳、阴性菌株和部分腹泻病原、正常肠道菌的试验以及对抗原的定量测定,证明本方法具有较高的特异性和敏感性。     

仔猪大肠杆菌性腹泻3p—ELISA诊断试剂盒的研究——中间试制及检验总结

在仔猪腹泻中,约有40%由肠毒素原性大肠杆菌引起。肠毒素原性大肠杆菌产生二种致病因子,即肠毒素(LT、ST)和纤毛粘着素(纤毛抗原)。与仔猪腹泻有关的大肠杆菌纤毛粘着素主要有 K_(88)、K_(99)和987P,F_(41)较少见,且往往与 K_(99)在同一菌株上表达。由于仔猪腹腹泻病因的复杂性,给该病的防治带来了一定的困难。我们在先     

大肠艾希氏杆菌987p菌株的初步探讨

一、前言肠病原性E.Colj的987p纤毛抗原是促使细菌在仔猪肠道中定居的纤毛群之一,它与K_(88)、K_(99)抗原一样,是一种不耐热的表面抗原,并证明是一种粘着因子,能使E.Coli菌在仔猪粘膜表面上粘着定居,随之细菌产生肠毒素而引起仔猪腹泻发病。Nagy等于1976年报告了缺乏K_(88)抗原的肠病     

通过饲喂特异性卵黄抗体控制猪肠道疾病(完)

<正>4新生仔猪中鸡卵黄免疫球蛋白对ETEC的被动保护作用Yokoyama等使用鸡卵黄抗体控制大肠杆菌引起的腹泻进行了一项卓越的研究。选择大肠杆菌产毒菌株(K88、K99和987P),在实验室发酵罐中扩繁、分离和纯化含有粘附素的棒状纤毛。将纤毛注射给蛋鸡,在抗体滴度较高时分离卵黄中的抗体(Ig Y)并喷雾干燥。将仔猪感染不同菌株的大肠杆菌,并使用适当的抗体。     

仔猪黄痢K88、K99基因工程菌、987P无毒菌三价苗的研制

仔猪黄痢主要危害1月龄以内的新生仔猪,尤其是1周龄内仔猪的发病率和死亡率最高,多以急性、水样腹泻为特征,预防仔猪黄痢最有效的措施是采用疫苗对怀孕母猪免疫接种,新生仔猪通过吮吸母猪初乳获得被动免疫。本疫苗是通过分别带有K88、K99、987P纤毛抗原的大肠埃希氏菌,接种于适     

K88和K99双价基因工程菌C株与E株表达效果的比较

应用ＬＢ培养基３７℃、１５０ｒ／ｍｉｎ振荡培养１７小时,室温４０００ｒ／ｍｉｎ,离心３０分钟,收集沉淀菌体,用ＰＢＳ离心洗涤一次,沉淀物重悬于适量的ＰＢＳ中。三等分菌体悬浮液分别用超声波、冻融、热休克等方法处理后,室温８０００ｒ／ｍｉｎ离心３０分钟,取上清液加入饱和硫酸铵４℃过夜,沉淀蛋白经透析,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０过柱纯化。应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、凝胶扫描测定Ｋ８８、Ｋ９９蛋白的分子量及浓度,双向免疫扩散、ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ试验测定其抗原性。结果表明,热休克法分离纤毛抗原是最好的方法,从Ｃ株Ｅ株分离得到的纤毛抗原,在分子量大小及对单抗亲和反应能力方面没有明显的差异。     

肠毒性大肠杆菌(ETEC)蛋黄抗体防治仔猪腹泻病试验

肠毒性大肠杆菌(ETEC)蛋黄抗体是将K88、K99、987P和HRV的大肠杆菌抗原免疫产蛋母鸡后,使血清产生相应抗体,产蛋母鸡又以产蛋方式将含有抗大肠杆菌K88、K99、987P和HRV的高效价血清免疫球蛋白(IgG)有效地转移到蛋黄中,即免疫球蛋白,简称IgY,再采用理化方法从高免鸡蛋中提取纯化IgY,即肠毒性大肠杆菌蛋黄抗体粉.     

K_(88)抗原工程菌株构建中的电镜观察

在K_(88)抗原工程菌株的构建中,通过对供体菌、受体菌相接合菌的电镜观察发现,在接合菌C-84中,菌体表面长有纤细、柔韧的纤毛,与供体菌B-5所见相似.而在受体菌1548中,未见有纤毛,证明不含肠毒素质粒的K_(88)抗原,工程菌株的构建已经完成.     

产肠毒素性大肠杆菌F41与987P菌毛蛋白的串联表达

根据GenBank中发表的E．coliF41、987P基因序列,分别设计合成一对引物。利用PCR技术．分别以大肠杆菌C83707的基因组和C83710的质粒为模板扩增F41、987P基因。通过分离、纯化、限制性核酸内切酶酶切、连接和转化,构建了含F41-987P串联表达载体的重组菌株BL21（DE3）／pETF41-987P。经酶切、PCR鉴定和DNA序列分析,证实了构建的重组质粒pETF41-987P中含有F41-987P融合基因,且基因序列和阅读框架均正确。经过SDS．PAGE分析,串联表达蛋白含量在30％左右,经Western blot检测,该串联表达蛋白能被大肠杆菌F41、987P阳性血清识别。反向间接血凝试验结果,F41效价为2^6～2^8,987P效价为2^8～2^10。说明F41-987P融合蛋白具有良好的抗原性。表明构建的重组菌株可以作为预防新生仔猪大肠杆菌性腹泻基因工程疫苗的候选菌株。     

肠毒性大肠杆菌菌毛抗原987P和F41的提纯及部分特性分析

肠毒性大肠杆菌(ETEC)C83917(987P~+)、C83919(F41~+)分别在 TSB 和 Minimal 液体培养基中培养,菌体表面能产生丰富的菌毛.用加热搅拌法使菌毛从菌表面脱落,通过酸沉淀和 MgCl_2反复沉淀提纯菌毛,经负染后用电镜观察。987P 菌毛较粗大。F41菌毛较纤细,两种菌毛都保持完整,呈长丝状,纵横交错或束状排列.用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定,987P 菌毛的分子量为20000,F41菌毛的分子量为28000。用提纯的987P 和 F41菌毛分别免疫家兔,得到高效价的抗血清,经琼扩试验检测,抗血清滴度最高可达1:128～1:256.琼扩试验证明,987P 与 F41之间无交叉免疫反应.     

鷄白痢病全血平板快速診断法的研究

1956年著者在“关于試制鷄白痢病全血凝集診断抗原液的初步研究”一文中提到:含0.4％福馬林的3％氯化鈉水溶液稀释菌体抗原,使每毫升含菌体300亿。这种診断抗原液在室温6～38℃之間,均可使用。在养鷄場内使用此种診断抗原液检查鷄羣,检出許多病鷄,并从其内脏中分离出典型鷄白痢杆菌,結果相当滿意。此种抗原液的菌体染色及敏感度滴定均直接影响診断的正确性。故作如下的研究。     

犊牛腹泻大肠杆菌二种新纤毛抗原菌株的分析鉴定

本报告用因子血清玻板凝集反应首次从国内分离的54株犊牛腹泻大肠杆菌中检出5株新表面抗原菌株,并用电子显微镜技术证实这种表面抗原为纤毛抗原。用玻板凝集反应、免疫扩散和免疫电源试验及电子显微镜技术对菌株进行分析鉴定的结果表明:5个菌株产生二种纤毛形态相同,但抗原性完全相别的纤毛抗原。其中2个菌株产生242菌株型纤毛抗原,暂标记为F242纤毛抗原;3个菌株产生293菌株型纤毛抗原,暂标记为F293纤毛抗原。二种新纤毛抗原菌株产耐热肠毒素(ST)性和部分动物红细胞的甘露糖抗性血凝特性测定表明:3株F293抗原菌产生ST,对豚鼠和兔红细胞具有甘露糖抗性血凝特性,而对绵羊红细胞不具有该特性;2株F242抗原菌对不产生ST,对豚鼠、兔和绵羊红细胞均具有甘露糖抗性血凝特性。     

产肠毒素大肠埃希茵主要黏附素的研究进展

产肠毒素大肠埃希茵的主要黏附素抗原有K88、K99、987P和F41，在发病学和免疫学上扮演着重要的作用。文章就其理化特性、生物学特性、分子生物学特性及主要检测方法进行综述。     

产肠毒素大肠埃希菌主要黏附素的研究进展

产肠毒素大肠埃希菌的主要黏附素抗原有K88、K99、987P和F41,在发病学和免疫学上扮演着重要的作用.文章就其理化特性、生物学特性、分子生物学特性及主要检测方法进行综述.